呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价

目的 采用聚合酶链式反应（PCR）技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。 方法 根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区（ITS）基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素（Biotin）和异硫氰酸荧光素（FITC）进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。 结果 水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180 μg·L^－1以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100 μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为 3.3 μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白（BSA-Biotin）浓度为2.00 g·L^－1,检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^－1。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10^－4、10^－2和10^－3 mg·L^－1时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^－1;重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。 结论 本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。     

腹横肌修复膈缺损的初步研究

目的为带蒂腹横肌瓣转位修复膈缺损提供解剖学基础.方法在40侧新生儿尸体标本上,解剖观测腹横肌的形态、血供及神经支配.结果1)腹横肌肌性部厚度平均为(0.98±0.22)mm,与腱膜部移行处的长度平均为(10.35±1.78)cm,平脐高度的宽度平均为(4.88±1.05)cm,腱膜部平均宽度(2.62±0.51)cm.2)腹横肌血供为多源性,由肋间后动脉、肋下动脉、腰动脉、旋髂深动脉升支供血,位置恒定.结论设计带蒂腹横肌瓣转位修复膈缺损具有可行性.     

薄层斜轴位T2WI扫描在判断子宫恶性肿瘤宫颈浸润范围中的价值

目的 探讨薄层斜轴位扫描在判断子宫恶性肿瘤宫颈浸润范围中的价值. 资料与方法 回顾性分析53例经手术病理证实的子宫恶性肿瘤患者的MRI资料,比较普通轴位、旁矢状位及薄层斜轴位T2WI 3种扫描方法对判断子宫恶性肿瘤宫颈浸润范围的准确性. 结果 普通轴位、旁矢状位和薄层斜轴位T2WI判断宫颈病变浸润范围的准确性分别为77.36%、60.38%和92.45%.普通轴位与旁矢状位相比（χ2=3.56,P＞0.05）,两者之间差异无统计学意义;薄层斜轴位与旁矢状位比较（χ2=15.13,P＜0.05）,两者之间差异有统计学意义.薄层斜轴位与普通轴位比较（χ2=4.71,P＜0.05）,两者之间差异有统计学意义. 结论 对于宫颈病变浸润程度和范围的准确评价,薄层斜轴位扫描是一种非常必要而且有用的方法,应在常规轴位扫描的基础上加扫薄层斜轴位,提高宫颈病变浸润程度和范围判断的准确性.     

防风挥发油与其根际土壤的相关性研究

目的 研究不同时间、不同采集地的防风挥发油量与防风根际土壤相关性.方法 水蒸气蒸馏法提取防风挥发油,检测其成分;根据国家标准规定方法测定根际土壤pH,水解N,速效P、K,全N及有机质的量,用SPSS 13.0软件分析数据.结果 防风挥发油量随采集地不同由南至北递减,所含成分明显不同,但均以1-甲酰基-4-(1-丁烯-3基)-苯和β-没药烯为主.防风挥发油量与其根际土壤全N之间呈显著幂相关,与水解N呈显著非线性相关,而速效P、K、有机质,只一批样品之间呈较好的相关性.土壤自身pH、水解N与速效P之间,水解N、速效P与速效K之间,水解N、速效P、速效K与有机质之间显著相关(P＜0.01);土壤pH与水解N、速效K之间显著相关(P＜0.05).结论 防风挥发油量在不同采收期差异无规律性,但其产率受根际土壤全N量的抑制作用显著,随其量的增加而显著降低,而水解N、速效P、K及有机质量适宜时可显著提高挥发油产率.土壤pH则可以通过调节土壤其他化学性质而影响防风挥发油的量.     

五味子中内生拮抗活性细菌的分离与筛选

目的 从不同地区采集五味子植株,分离内生细菌,并进行菌群密度、拮抗菌筛选和抑菌活性研究。方法 采用平板分离法分离内生细菌并纯化典型菌株;平板对峙法测定体外拮抗活性;生长速率法测定抑菌活性。结果 不同种植地、五味子不同器官中内生细菌的菌群密度差异较大,野生的较栽培的大;五味子各器官中,根中的内生细菌最多,其次为茎,叶片中最少。从分得的大量内生细菌中共纯化出302株内生细菌,拮抗菌比率平均为24.19%。从中选出了12株对五味子茎基腐病菌、人参根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、人参黑斑病菌具有较好拮抗作用的菌株。12株菌株的发酵产物对供试病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中JYg-2对人参根腐病的抑制率最高,达80.02%。结论 五味子植株体内存在大量内生细菌,并且含有一定比率的拮抗菌,拮抗活性稳定。因此五味子内生细菌可以成为开发拮抗菌资源的重要途径,并具有较大潜能。     

刺五加的微乳液毛细管电动色谱指纹图谱研究

目的:在比较毛细管胶束电动色谱(MEKC)和毛细管区带电泳后(CZE)采用微乳液毛细管电动色谱法对刺五加进行指纹图谱的研究。方法:以1.0%(w/w)SDS,6.6%(w/w)正丁醇,0.7%(w/w)正庚烷,25 mmol/L硼砂溶液(91.6%,w/w,pH 9.5)的微乳液为运行介质,波长为222 nm。结果:与毛细管区带电泳、毛细管胶束电动色谱相比,微乳液毛细管电动色谱对刺五加提取物中的复杂组分具有很好的分离能力;指纹图谱中标定了12个指纹峰,重现性、稳定性和方法的精密度较好。结论:微乳液毛细管电动色谱指纹图谱对刺五加的质量控制优于MEKC和CZE法。     

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??OBJECTIVE To discuss the effect and mechanism of cinepazide maleate (CM) on myocardial injured rats induced by isoproterenol (Iso). METHODS Fifty male and female rats were divided into normal group, model group, the low and the high dose group of the CM, and captopril (Cap)positive control group. The rat model of myocardial injury was established by subcutaneous injection of Iso (5 mg??kg^-1??d^-1)for 7 d, rats in treatment group were given intraperitoneal injection of CM on the second day (1.5,3 mg??kg^-1??d^-1), rats in positive control group were given intragastric administration of Cap(10 mg??kg^-1??d^-1), and rats in normal group and model group were given intraperitoneal injection of normal saline in the same volume, for 14 d. The rats in each group were tested before and after treatment by three times of running endurance test. After stopping drug all rats were anesthetized for measuring the electrocardiogram (ECG), then taken blood for measuring the activities of serum SOD, LDH and CK, and taken hearts for measuring heart weight index (HWI), left ventricular mass index (LHWI), the contents of myocardial hydroxyproline (Hyp)and MDA, and observing the morphological changes of myocardial tissue by HE staining. RESULTS Compared with rats in normal group, rats in model group showed endurance value decrease, ECG abnormalities (arrhythmia and myocardial ischemia in waveform), increased HWI, LHWI (P<0.01), myocardial Hyp content, myocardial MDA level, and the level of serum LDH and CK, and reduced the serum SOD activity (P<0.05 or P<0.01). Compared with model group, CM could significantly increase endurance value, improve abnormal phenomenon of ECG, lower the HWI, LHWI, myocardial Hyp content, myocardial MDA level, and serum LDH and CK levels were lower, and serum SOD activity increased, especially in high dose group of CM (P<0.01). HE staining showed in the model group rat ventricular remodeling, myocardial rupture, a large number of collagen fibers, in the treatment group, ventricular remodeling and myocardial fibrosis were significantly improved. CONCLUSION Cinepazide maleate has protective effect on myocardial injury of rats induced by Iso.     

五味子甲素对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞毒性作用的影响

目的初步探讨不同浓度的五味子甲素(SchA)对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞毒性的影响。方法体外培养多巴胺能神经细胞SH-SY5Y,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的MPP+对SH-SY5Y细胞增殖的影响后,检测不同浓度的SchA对SH-SY5Y细胞的影响,筛选其无毒剂量后形态学及MTT法进一步观察一定浓度的SchA对MPP+引起的SH-SY5Y细胞毒性作用是否具有保护作用。结果与对照组相比,0.1～1.5 mmol/L MPP+染毒48 h均可引起SH-SY5Y细胞生长增殖抑制;0.5～5μmol/L SchA对SH-SY5Y细胞没有毒性作用,其中2～5μmol/L SchA均可明显抑制MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用。结论 MPP+对SH-SY5Y细胞增殖有明显的抑制作用,而一定浓度的SchA能有效抑制MPP+的细胞毒性。     

超声法与闪式提取法提取龙胆中龙胆苦苷的工艺对比研究

目的对比研究超声法与闪式提取法提取龙胆中龙胆苦苷的工艺。方法采用高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷的含量,超声法以乙醇浓度、提取时间、超声功率、料液比为考察因素,闪式提取法以乙醇浓度、料液比、提取时间为考察因素,以龙胆苦苷提取率为考察指标,采用L9（34）正交试验优选最佳提取工艺条件。结果与超声法相比,闪式提取法效率更高,其最佳提取工艺为提取溶剂50%乙醇,料液比1∶60,提取时间3 min。结论本法工艺简单、经济、提取率高,可为中药龙胆的开发利用提供参考。