Opa相互作用蛋白5在胰腺癌中的表达及其对PANC-1细胞增殖的影响

目的探索Opa相互作用蛋白5(OIP5)在胰腺癌中的表达及其对PANC-1细胞增殖的影响。方法通过数据库分析OIP5在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达;用实时定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测人胰腺癌细胞系MIAPaCa-2、PANC-1、KP-3、BxPC-3细胞中OIP5 mRNA和蛋白表达;构建OIP5基因沉默质粒的慢病毒(pGCSIL-shOIP5)和对照质粒慢病毒(pGCSIL-shCtrl),分别感染PANC-1细胞,分为OIP5基因沉默组和shCtrl对照组,5 d后采用RT-qPCR和Western blot测定慢病毒敲低效率,流式细胞计量术检测细胞凋亡;OIP5基因沉默组和shCtrl对照组连续5 d进行MTT检测和细胞计数;OIP5基因沉默组和shCtrl对照组孵育10 d形成集落,Giemsa染色分别集落总数。结果胰腺癌中OIP5 mRNA表达显著高于正常胰腺组织(P<0.05),OIP5高表达患者的总存活率显著低于OIP5低表达患者(P<0.05),且其无病生存率也显著降低(P<0.05);OIP5在MIAPaCa-2、PANC-1和KP-3中表达较高,而在BxPC-3细胞系中的表达较低;MTT检测结果显示OIP5沉默在第4和第5天显著降低了PANC-1细胞的增殖速率(P<0.01);OIP5沉默后细胞集落数(平均为9个)显著低于shCtrl对照组中的数量(平均为40个)(P<0.01);OIP5沉默后PANC-1细胞凋亡比例为8.3%显著高于shCtrl的4.5%(P<0.01)。结论OIP5在胰腺癌细胞系中异常高表达,OIP5基因可调控胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡以及集落形成,提示OIP5可能在胰腺癌发病机制中作为癌基因发挥作用,从而为胰腺癌的靶向治疗提供了潜在的生物标志物。     

前列地尔Lipo-PGE1干预肝脏血流灌注的实验研究

目的： 探讨前列地尔脂微球(liposome prostaglandin E₁,Lipo-PGE₁) 不同用药时间和途径对肝脏血流灌注的作用机制。方法: 选取健康成年犬12只，经左小隐静脉注射Lipo-PGE₁₁ μg/kg，速度均为0.05 μg·kg^-1·min^-1。分别于0 min、5 min、15 min、30 min后行肝脏CT灌注成像（computed tomography perfusion imaging，CTPI）扫描，计算肝动脉灌注量(hepatic arterial perfusion,HAP)、门静脉灌注量 (portal vein perfusion,PVP)、总肝灌注量（total liver perfusion,TLP），对照分析不同时间Lipo-PGE1对肝脏血流灌注的影响。选取健康成年犬24只，随机平均分成4组：对照组、外周静脉用药组、肝动脉组、肠系膜上动脉组。Lipo-PGE₁的用药量均为1 μg/kg、用药速度均为0.05 μg·kg^-1·min^-1，0.9%生理盐水用量为20 mL。各组用药5 min后行肝脏CTPI，比较分析不同途径给予Lipo-PGE₁对肝脏血流灌注的影响。结果: 经外周静脉注射Lipo-PGE10 min、5 min、15 min、30 min后CTPI测量的HAP(mL·min^-1·mL^-1)分别为：0.22 ±0.65、0.24±0.65、0.22±0.69、0.22±0.06；PVP (mL·min^-1·mL^-1)：1.22±0.40、1.88±0.59、1.55±0.55、1.29 ±0.57；TLP (mL·min^-1·mL^-1)分别为：1.44±0.42、2.12±0.61、1.77±0.56、1.51±0.58。方差分析显示HAP组间比较无显著差异（F=0.249，P>0.05），而PVP、TLP组间比较有显著差异（F=3.812，P<0.05）、（F=3.805，P<0.05）。5 min组PVP、TLP增加最为显著，15 min、30 min时两者仍处于高值水平。对照组和外周静脉组、肝动脉组、肠系膜上动脉组的HAP (mL·min^-1·mL^-1)分别为：0.22±0.06、0.24±0.06、0.31±0.07、0.26±0.05；PVP (mL·min^-1·mL^-1)分别为1.28±0.38、2.33±0.41、2.37±0.55、2.83±0.94；TLP (mL·min^-1·mL^-1)分别为：1.50±0.40、2.57±0.42、2.67±0.58、3.09±0.94。方差分析显示HAP组间比较无显著差异（F=2.248，P>0.05），而PVP、TLP组间比较有显著差异（F=6.892，P<0.01）、（F=7.802，P<0.01）。经肠系膜上动脉给药较其它途径给药PVP、TLP增加趋势更为显著。结论: Lipo-PGE₁能显著增强肝脏血流灌注，且主要影响门静脉灌注分量，介入技术可为快速改善肝血流灌注提供有效途径。     

VEGF、ANG-1、ANG-2、TSP-1的表达与胆管细胞性肝癌血管生成和侵润转移的关系

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素-1（ANG-1）、血管生成素-2（ANG-2）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）的表达与胆管细胞性肝癌(CCC)血管生成和侵润转移的关系。方法： 对33例手术切除的CCC标本进行CD34、VEGF、 ANG-1、 ANG-2 和TSP-1的免疫组化染色，研究VEGF、ANG-1、ANG-2、TSP-1的表达与胆管细胞性肝癌血管生成和肿瘤门静脉侵犯、肝内转移、淋巴结转移以及肿瘤分化水平之间的关系。 结果： 本组CCC的微血管密度（MVD）为(87.2±52.6)/mm2，VEGF、ANG-1、ANG-2 和TSP-1的阳性率分别为75.6%、36.0%、57.6%和45.5%。VEGF和ANG-2的阳性表达与高MVD相关，TSP-1则与MVD负相关（P<0.01,P<0.05,P<0.01）。阳性TSP-1与肝内转移正相关（46.7% vs 5.6%，P<0.05）。结论： CCC瘤内的血管新生活跃，VEGF和ANG-2的阳性表达与CCC血管生成正相关，TSP-1则与其负相关，TSP-1的阳性表达还与肝内转移相关，VEGF、ANG-1、ANG-2的表达与肿瘤的侵润转移未见显著相关。     

1049例育龄妇女下生殖道感染情况调查

目的了解育龄妇女下生殖道感染情况,为育龄女性生殖健康提供进一步的数据资料。方法对1049例来自健康体检中心的21~40岁育龄妇女的阴道后穹窿及宫颈分泌物标本进行检测,阴道清洁度、滴虫采用显微镜镜检法,淋球菌、解脲支原体、人型支原体、真菌采用培养法,沙眼衣原体则采用免疫层析法。检测结果进行统计学分析。结果女性生殖道感染的感染率为53.3%,其中混合感染率为9.8%,而清洁度异常率仅为28.4%;前三位病原体感染依次为解脲支原体(35.9%)、衣原体(18.1%)、真菌(6.7%)。结论女性生殖道感染情况严重,具有隐匿性,应加强对无症状感染的育龄妇女的监测。     

CDK4-pRB-E2F1通路是Aβ1-40诱导皮层神经元凋亡的可能途径

目的:探讨β淀粉样肽_1-40(beta-amyloidpeptide_1-40, Aβ_1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的可能分子机制。方法:以40mg/L的Aβ_1-40诱导离体培养的大鼠皮层神经元凋亡, 流式细胞仪及免疫印迹方法检测细胞周期相关的周期依赖性激酶4(CDK4)、磷酸化的视网膜神经胶质瘤蛋白(pRB)水平;RT-PCR技术检测E2F1mRNA表达水平;荧光分光光度计检测半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)活力;观察在Aβ_1-40诱导凋亡过程中是否伴随上述指标的变化。结果:①CDK4、磷酸化pRB水平在Aβ_1-40作用后2-4h显著升高;②Aβ_1-40孵育3h后皮层神经元E2F1基因表达上调;③Aβ_1-40作用12-24h后caspase-3活力明显升高。结论:CDK4-pRB-E2F1信号转导通路可能在Aβ_1-40诱导的大鼠皮层神经元凋亡中起主要作用。     

促进胚胎干细胞来源造血干/祖细胞移植后细胞免疫功能恢复

目的:体外诱导胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞过程中, 增加成熟T淋巴细胞的含量, 以促进其重建致死量照射小鼠的造血功能后免疫功能的早期重建。方法:胚胎干细胞在含甲基纤维素的培养基中自由分化形成胚胎体, 分化第6d添加造血生长因子, 同时添加胸腺肽, 流式细胞仪检测分化细胞中CD₃₄⁺的造血干/祖细胞和CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 最后将分化细胞注射入致死量照射小鼠体内, 观察60d, 以移植物抗宿主病(GVHD)发病率作为T淋巴细胞免疫功能的指标, 用PCR检测Sry反映移植细胞在宿主体内的存活。结果:分化第13d, 未加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量仅10.52%, 重建造血后无GVHD发生;添加胸腺肽, CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量升高达22.93%, 重建造血后GVHD发病率100%。结论:胚胎干细胞体外分化为造血干/祖细胞过程中, 添加胸腺肽, 能增加CD⁺₃的成熟T淋巴细胞含量, 体内重建造血后细胞免疫功能恢复较快。     

大鼠嗅球和鼻腔嗅粘膜成鞘细胞的形态学研究

目的：观察大鼠嗅神经成鞘细胞在嗅球和嗅粘膜的分布及其形态学结构特征，研究其与中枢神经再生的关系。方法：Luxol固蓝染色、Mallory染色和NGFRp75免疫组织化学染色结合透射电镜观察。结果：在嗅球纤维层的成鞘细胞随神经纤维呈纵向排列，在嗅小球层的成鞘细胞则围绕着嗅小球环行排列。在嗅粘膜的成鞘细胞位于柱状上皮深方，沿基底膜分布。成鞘细胞的胞体为细长梭形，有较长的突起，细胞核呈圆形或椭圆形。在嗅小球周围或嗅粘膜内的成鞘细胞呈NGFRp75免疫反应阳性。在电镜下，嗅球成鞘细胞的纵断面上可见其胞体呈长梭形，细胞核为不规则形，核仁清晰。在胞体的周围有大量的平行神经纤维纵向排列，在放大的横断面上，可见在1个成鞘细胞的细胞核周围有数根神经纤维被胞质包裹在一起。结论：嗅成鞘细胞是一种特殊的胶质细胞，分布于嗅球的纤维层、嗅小球层和嗅粘膜内。嗅神经成鞘细胞的胞体细长，有较长突起，其轴系膜紧密包裹成束的无髓神经纤维。     

小檗碱对局部脑缺血组织中HIF-1α表达的影响

目的 研究大鼠局部性脑缺血再灌注损伤时,小檗碱(BE)对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及脑神经元凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉阻塞再灌注组(MCAO/R组)、假性治疗组(DMSO组)、小檗碱10mg/kg治疗组(BE10组)、小檗碱20mg/kg治疗组(BE20组)、小檗碱40mg/kg治疗组(BE40组).治疗组在术前48h、24h及术后6h腹腔注射相应剂量药物,观察各组大鼠神经行为学缺陷;再灌注7d,TTC染色观察脑梗死体积变化;再灌注24h,制备脑组织切片分别作Nissl染色、免疫组织化学染色、TUNEL标记及免疫荧光双标记.结果 BE20、BE40组神经功能较MCAO/R组有明显改善(P＜0.05),但BE10组神经学评分与MCAO/R组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).不同剂量BE治疗均可以减小梗死灶体积(P＜0.05),且呈现剂量依赖性.Nissl染色可见BE治疗组皮质神经元结构较清晰,胞体肿胀、核固缩、核溶解程度较模型组及假性治疗组明显减轻,淡染区域减小;免疫组织化学法观察到,BE组HIF-1α、Caspase-3、BNIP3、VEGF及TUNEL标记的阳性细胞数减少;免疫荧光双标记显示HIF-1α与BNIP3、Caspase-3及TUNEL阳性颗粒共表达于细胞中.结论 BE可能通过降低HIF-1α水平并下调其下游的BNIP3和VEGF的表达,从而减少凋亡因子Caspase-3的作用而发挥神经元保护作用.     

激发型4-1BB单抗联合凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞在恶性肿瘤免疫治疗中的作用

目的：研究激发型4-1BB单抗（2A）联合凋亡肿瘤细胞负载的DC（AP-DC）疫苗在小鼠B细胞淋巴瘤免疫治疗中的作用.方法：凋亡小鼠B细胞淋巴瘤细胞A20负载的DC用来制备AP-DC.A20荷瘤小鼠分别被注射AP-DC、2A单抗或二者联合.观察肿瘤生长情况及小鼠生存期.流式细胞术检测免疫治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞的表型和胞浆内细胞因子;3H-TdR掺入试验检测T细胞体外增殖能力;ELISA法检测荷瘤鼠血清和脾脏T细胞培养上清中IL-2、IFN-γ和IL-10含量.结果：应用激发型4-1BB单抗2A或AP-DC疫苗对荷瘤小鼠开展免疫治疗,可抑制肿瘤生长,延长荷瘤鼠生存期,获得12.5%或25%的肿瘤完全缓解率.但二者联合应用,治疗效果更好,可获得62.5%的肿瘤完全缓解率,并且荷瘤鼠可长期生存.联合治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞体外增殖更为显著,CD4^＋IFN-γ^＋细胞的比例也明显增加.IL-2和IFN-γ的分泌水平在联合治疗荷瘤鼠的血清和脾脏T细胞的培养上清中升高更明显,而IL-10的分泌则降低.结论：激发型4-1BB单抗和AP-DC在肿瘤免疫治疗中有协同作用.     

白藜芦醇诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的研究

目的：探讨白藜芦醇诱导人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤凋亡的机制。 方法： 建立人胃癌原代细胞裸鼠移植瘤模型，采用瘤旁注射的方法，用不同剂量的白藜芦醇进行治疗，并设对照，用透射电镜和TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡情况，免疫组织化学法和RT-PCR法检测肿瘤组织的凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用； 透射电镜和TUNEL法发现白藜芦醇导致移植瘤内大量细胞发生凋亡；免疫组织化学法发现白藜芦醇注射组的Bcl-2蛋白阳性细胞率（3.92％±0.85％、5.70％±0.84％和11.86％±0.97％）明显低于两个对照组（P<0.05），两个对照组（27.56％±1.40％和29.48％±0.51％）之间无显著差异；Bax蛋白阳性细胞率（52.30％±1.54％、45.72％±0.88％和40.02％±1.20％）明显高于两个对照组（P<0.05），两个对照组（20.88％±0.91％和19.34％±0.35％）之间无显著差异； RT-PCR法发现白藜芦醇注射组的bcl-2 mRNA条带强度随剂量的增大而递减，并明显低于两个对照组（P<0.05），两个对照组之间无显著差异（P>0.05）；bax mRNA条带强度递增，并明显高于两个对照组（P<0.05），两个对照组之间无显著差异（P>0.05）。 结论： 白藜芦醇对胃癌原代细胞移植瘤有明显的抑制作用，通过下调bcl-2 的表达和上调bax 的表达而诱导胃癌裸鼠移植瘤细胞发生凋亡，是其抗胃癌作用的机制之一。