重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞

目的:研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染,探索一条高效基因转染的途径,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法:①逆转录病毒载体的构建:EC1-4(repeats1-4ofcadherin-5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser222A)MEK1基因克隆产物,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD41⁺细胞的获取和细胞培养:从脐带血分离的CD34⁺细胞通过TPO诱导表达CD41,FACS分离CD41⁺细胞。高糖DMEM培养液培养NIH3T3和MDA-MB-435细胞,U937细胞培养在RPMI-1640培养液,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株,Iscove'smodifiedDulbeco's培养液中加入GM-CSF。③测定病毒滴度:逆转录病毒载体转入包装细胞293,36h后收集病毒上清液,感染NIH3T3细胞,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,Westernblot检测基因产物的表达。结果:293细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒:3.1×10⁷,高滴度EC1-4pMSCV病毒:1.0×10⁸。用稀释8倍的病毒转染基因,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞(转染阳性细胞)分别是60.73％、72.56％。重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染原代培养细胞CD41⁺,GFP阳性细胞为30.57％。重组逆转录病毒EC1-4pMSCV转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,GFP阳性细胞为97.54％。TPO作用CD41⁺和UT7细胞以及血清对U973细胞的作用,显示出外源mutationMEK基因的dominantnegative的效应,实验组磷酸化的MEK1减少。EC1-4基因转染的MDA-MB-435细胞表达了EC1-4基因产物。结论:重组小鼠干细胞逆转录病毒载体能高效基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,转染的基因能稳定地表达。     

基诺族睡眠状况调查及分析

目的:了解基诺族睡眠的一些基本情况、失眠症的发生率和治疗情况.方法:使用自拟的"基诺族睡眠情况调查表",通过入户调查和现场访谈对126名基诺族人进行调查.结果:随年龄增长基诺族人的睡眠时间渐减少.<30岁年龄组有午睡习惯的比例高于30岁以上年龄组,差异有统计学显著性.34.12%(43人)符合失眠症诊断,失眠原因以各种精神疾病(41.86%)和酒依赖(30.23%)最为常见.失眠患者中, 就诊率为25.58% (11例).结论:基诺族睡眠的基本情况与国内其他人群相比有一些共同之处;失眠发生率较高,但由于本研究样本量和样本选择的不足,此结果还需进一步证实.     

气道粘液、粘蛋白及其分泌调节

Mucus secreted mainly by epithelial goblet cells and submucosal glands coveting the respi-ratory tract plays an important role in the protection from external aggressions, such as solid particles,pathogens and chemical agents by mucocilialy clearance, The viscoelastic properties of mucus are mainly deter-mined by the presence of extensively - glycosylated high molecular weight mucins. A lot of factors influence the expression and secretion of mucins in airway, lead to mucus overproduction, which is a distinguishing feature of chronic obstructive pulmonaly disease (COPD) and causes disruption of the mucocilialy clearance function,resulting in airway block, chronic infection and death.     

注意缺陷多动障碍儿童行为问题的对照研究

目的：比较注意缺陷多动障碍（Attention Deficit Hyperactivity Disorder，ADHD）临床亚型和正常儿童的行为问题。方法：将符合DSM—Ⅳ ADHD诊断标准的男童70例分为注意障碍为主型（PI）44例，以多动／冲动为主型（HI）6例、混合型（CT）20例，采用儿童行为量表（Child Behavior Checklist，CBCL）比较各亚型和正常儿童的行为问题。结果：ADHD组行为问题发生率（48．57％）明显高于对照组（12．70％），P〈0．01；ADHD各亚型行为问题发生率存在统计学差异（P〈0．01）。混合型最高；ADHD亚型与对照组CBCL因子分的4组间比较显示分裂性、强迫性、体诉、多动、攻击性、违纪因子及CBCL总分存在统计学差异；分裂性因子PI〉HI，攻击性因子CT，HI〉PI，违纪因子HI〉PI，CT。结论：ADHD男童行为问题发生率高于正常儿童，其中混合型行为问题发生率最高；ADHD临床亚型行为问题特点不同。     

红外光电式连续血压测量研究

本文介绍了一种采用红外光电式换能器，通过在桡动脉处测量血液容积，并采用单片机软件运算，实现无创性连续血压测量的方法。     

大脑前动脉的A1优势征及在前交通动脉瘤脑血管造影诊断中的意义

目的：探讨A1优势征的影像学表现及其出现率与大脑前交通动脉瘤的关系.方法：回顾性分析128例脑动脉瘤数字减影脑血管造影的影像学资料.以大脑前交通动脉瘤作为试验组,其他部位的动脉瘤作为对照组.结果：128例病人中,共139个动脉瘤.前交通动脉瘤49个,后交通动脉瘤41个,基底动脉瘤29个,大脑中动脉瘤14个,颈内动脉瘤6个.A1优势征58例,A1对称75例.结论：前交通动脉瘤Al优势征多见,其出现率与其他部位脑动脉瘤之间存在显著差异（P＜0.05）.     

小檗胺诱导K562细胞凋亡及其与bcr/ablgene及P210表达的关系

目的:探讨小檗胺(BER)诱导K562细胞凋亡及其可能的机制。方法:以流式细胞仪(FCM)分析、电镜观察细胞微结构变化及基因组DNA电泳等方法检测细胞凋亡。以RT-PCR及Westernblot方法检测K562细胞BCR/ABLmRNA和蛋白质水平表达。结果:FCM检测见到典型的凋亡峰,8.0mg/LBER作用24-72h,随药物作用时间延长,细胞凋亡率由(29.20±3.82)%上升至(61.77±4.35)%(P＜0.01);以2.0-8.0mg/LBER作用24h,随药物浓度增加,K562细胞的凋亡率也增加。电镜下可见明确的细胞凋亡的形态学改变。DNA电泳呈现典型的梯形条带。16.0mg/LBER处理24h,K562细胞bcr/ablmRNA相对表达量及BCR/ABL融合蛋白质P210水平均明显低于对照组,分别为0.73±0.02vs1.19±0.02(P＜0.01)和0.63±0.01vs1.04±0.02(P＜0.01),呈时间-浓度依赖效应。经BER作用后,K562细胞bcr/ablmRNA表达强度与P210水平呈正相关(r=0.928,P＜0.05),且细胞凋亡率与bcr/ablmRNA表达呈负相关(r=-0.997,P＜0.01)。结论:在体外BER对K562细胞有明显的促凋亡作用,抑制bcr/ablmRNA表达及其蛋白质水平可能是其作用的重要机制之一。     

抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD28VH单链三特异抗体的胞内可溶表达、纯化及体外活性测定

目的　研究抗人卵巢癌 (ovariancarcinoma ,oc)×抗人CD3×抗CD2 8VH 单链三特异抗体(singlechaintrispecificantibody,scTsAb)在大肠杆菌中的可溶表达与纯化及纯化后产物的活性测定 ,从而为其应用于卵巢癌治疗的临床研究打下基础。方法　将已构建的scTsAb表达载体转化大肠杆菌BL2 1(DE3)Star菌株 ,采用低温 (30℃ )、低剂量IPTG(0 .2mmol L)诱导 ,进行胞内可溶表达。根据抗卵巢癌三特异抗体 (ocTsAb)等电点较高 (pI9.0 ) ,而菌体蛋白大多为酸性蛋白的特点 ,利用DEAE弱阴离子交换层析(pH8.0 )进行一步纯化 ,并利用ELISA及FACS的方法检测纯化后抗卵巢癌三特异抗体的活性。结果　(1)SDS PAGE鉴定低温诱导时可溶比例达到 5 6 %。 (2 )绝大多数菌体蛋白被DEAE层析柱吸附 ,而抗卵巢癌三特异抗体在穿透液中流出 ,SDS PAGE检测纯度达到 90 %。 (3)ELISA结果显示纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与重组CD2 8纯抗原 ,Jurkat(CD3 )细胞膜提取抗原 ,SKOV3细胞膜提取抗原均有特异性结合。 (4 )FACS结果证明纯化后的抗卵巢癌三特异抗体与Jurkat(CD3 )活细胞、SKOV3活细胞有特异性结合。结论　低温诱导胞内可溶表达的抗人卵巢癌×抗人CD3×抗CD2 8VH 单链三特异抗体经弱阴离子交换层析一步纯化后仍保持原有免疫学活性 ,这     

Cytocompatibility of Three Corneal Cell Types with Amniotic Membrane

Rabbit limbal corneal epithelial cells, corneal endothelial cells and keratocytes were cultured on amniotic membrane. Phase contrast microscope examination was performed daily. Histological and scan electron microscopic examinations were carried out to observe the growth, arrangement and adhesion of cultivated cells. Results showed that three corneal cell types seeded on amniotic membrane grew well and had normal cell morphology. Cultured cells attached firmly on the surface of amniotic membrane. Corneal epithelial cells showed singular layer or stratification. Cell boundaries were formed and tightly opposed. Corneal endothelial cells showed cobblestone or polygonal morphologic characteristics that appeared uniform in size. The cellular arrangement was compact. Keratocytes elongated and showed triangle or dendritic morphology with many intercellular joints which could form networks. In conclusion, amniotic membrane has good scaffold property, diffusion effect and compatibility with corneal cells. The basement membrane side of amniotic membrane facilitated the growth of corneal epithelial cells and endothelial cells and cell junctions were tightly developed. The spongy layer of amniotic membrane facilitated the growth of keratocytes and intercellular joints were rich. Amniotic membrane is an ideal biomaterial for layering tissue engineered cornea.     

徐州地区334例早产儿临床分析

目的探讨我院2006年334例早产儿,分析发生的危险因素,以总结提高产科早产预防、医疗水平,并提供研究参考。方法早产组334例与同期分娩的足月对照组334例分析比较,早产的临床相关因素及对围产儿的影响。结果胎膜早破,妊娠高血压综合征,前置胎盘,臀位,多胎妊娠是早产的重要因素。早产使新生儿窒息,围生儿死亡,低体重儿增加。结论早产使围产儿窒息和死亡率增加。加强早产预测可望降低早产的发生,提高围生医学质量。