可溶性mPDL1-hIgGFc表达载体构建、表达及对诱导细胞增殖与凋亡的影响

目的 可溶性mPDL1-hIgGFc(mouse PDL1-human IgG Fc)表达载体的构建与表达,及其对诱导细胞增殖与凋亡的研究.方法 以含有mPDL1基因的载体pmPDL1为模板,采用PCR的方法获得mPDL1胞外段基因,定向连接于含有hlgGFc基因片段的载体phIgGFc,构建表达载体pmPDL1-hIgGFc;采用脂质体将重组子转染CHO细胞,转染后的CHO命名为cHOp;ELISA和Western blot法检测目的 蛋白的表达,流式细胞术检测CHOp培养上清对混合淋巴细胞培养(MLC)的影响.结果 测序结果和酶切鉴定显示构建的表达载体pmPDL1-higGFc完全正确;ELISA和Westernblot法检测CHOp培养上清中有目的 蛋白表达;流式细胞术检测表明CHOp培养上清可体外抑制小鼠MLG,并诱导活化T细胞凋亡,其效应呈剂量依赖性.结论 成功构建mPDL1-hIgGFc表达载体;mPDL1-hIgGFc在体外可抑制MLC和诱导活化T细胞凋亡,具有负性调节T细胞的功能.     

α促黑素细胞激素对横纹肌溶解所致急性肾衰竭大鼠肾的保护作用

目的探讨α促黑素细胞激素（α—MSH）是否能减轻甘油诱导横纹肌溶解所致急性。肾衰竭（ARF）大鼠。肾组织中炎性反应和对。肾损害的保护作用。方法48只SD大鼠随机分4组：健康对照组：肌注生理盐水10ml／kg；ARF组;肌注50％甘油10ml／kg；α-MSH立即干预组：肌注50％甘油的同时腹腔注射α—MSH200μg／kg，12h后重复1次；α-MSH延迟干预组：肌注50％甘油6h后腹腔注射α—MSH200μg／kg，12h后重复1次。24h后处死大鼠，测Scr、BUN、肌酸激酶水平。。肾组织PAS染色光镜下行。肾小管坏死半定量评分。免疫组化ED-1染色半定量计数。实时定量PCR测。肾组织中单核细胞趋化因子（MCP）-1mRNA表达水平。结果与对照组相比，ARF组大鼠。肾组织内ED．1染色阳性细胞数（16．8±7．0比1．46＋1．24）、MCP-1的mRNA表达量（11．0±3．8比7．8±1．9）均显著增加（P均〈0．05）。α-MSH立即干预组ED-1染色阳性细胞数（9．5±8．2）和MCP．1的mRNA表达量（8．7±5．1）与ARF组相比均显著减少（P〈0．05）。α—MSH立即干预组Scr、BUN和。肾小管坏死评分均低于ARF组【分别为（152±76）比（333±60）μmol／L、（23．8±9．3）比（56．0±10．0）mmol／L和1．7±0．4比2．7±0．4，P均〈0．05]。而α-MSH延迟干预组与ARF组间各指标及各组间血IL．6和TNF—α差异均无统计学意义。结论甘油所致急性。肾衰竭大鼠。肾组织中巨噬细胞浸润及MCP-1表达增加，即刻注射α-MSH有一定的抑制。肾组织炎性反应、减轻。肾损害作用。     

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。     

心脏术后急性肾功能衰竭

急性肾功能衰竭是心脏术后常见而严重的并发症 ,是患者死亡率增加的独立危险因素 ,探讨心脏术后发生ARF的危险因素 ,并积极预防和治疗是近年来研究的热点之一 ,本文就心脏术后发生急性肾功能衰竭的相关因素、治疗和预后等问题的临床研究进展作一综述     

尿毒症患者血浆同型半胱氨酸及其相关因素的研究

目的　探讨尿毒症患者血浆同型半胱氨酸 (Hcy)的临床意义及其相关因素。方法　分别采用快速高压液相微柱层析法和Immlite全自动化学发光免疫分析仪测定 32例正常人和 32例尿毒症患者血液透析前后的血浆总Hcy和叶酸、维生素B12 浓度。结果　血液透析后血浆Hcy与叶酸较血液透析前明显下降 (P<0 .0 1) ,前者显著高于正常人 (P <0 .0 1) ,后者与正常值比较 ,均无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;血液透析前叶酸与Hcy存在明显负相关 ,血浆维生素B12 与Hcy无显著相关性。内瘘堵塞组与非堵塞组比较 :血浆Hcy明显升高(P <0 .0 1) ;叶酸显著降低 (P <0 .0 5 )。结论　所有血液透析患者均存在高Hcy血症 ,可能是血液透析患者内瘘栓塞的危险因素之一。高Hcy血症的形成可能与叶酸相对缺乏有关     

酒精性脂肪肝临床流行病学调查及病因量化标准探讨

目的探讨饮酒与脂肪肝的关系 ,以及酒精性脂肪肝病因的量化标准。方法将连续性体检人群分成非饮酒组、白酒组 (按日均饮酒量下分 <5 0g、5 0～ 1 0 0g及 >1 0 0g白酒组 )和啤酒组 (按日均饮酒量下分 <2 5 0mL、2 5 0～ 5 0 0mL及 >5 0 0mL啤酒组 ) ,对各组脂肪肝检出率及脂肪肝患者饮酒至发病时间进行流行病学调查。结果 5 0～ 1 0 0g及 >1 0 0g白酒组 ,2 5 0～ 5 0 0mL及>5 0 0mL啤酒组脂肪肝检出率分别为 4 3.6 % ,5 0 .0 % ,6 4.5 % ,6 6 .7% ,较非饮酒组的 2 5 .0 %明显增高 (P <0 .0 1 )。各组中脂肪肝患者饮酒时间显著高于同酒量非脂肪肝者 (P <0 .0 1 )。以日均饮白酒 80g、时间 9.0年 ,或日均饮啤酒 4 0 0mL、时间 5 .0年作为各自酒精性脂肪肝病因量化标准 ,分别具有 82 .6 %、88.6 %敏感性 ,72 .2 %、78.3%特异性。结论饮酒与脂肪肝的发生具有量效和时效关系 ,日均饮白酒 80g、时间 9.0年 ,以及日均饮啤酒 4 0 0mL、时间 5 .0年为其各自酒精性脂肪肝较好的病因量化诊断标准。     

低钙透析液对腹膜透析患者颈动脉粥样硬化的影响

目的:观察低钙透析液配合口服碳酸钙及活性维生素D3对持续性不卧床腹膜透析(CAPD)患者颈动脉粥样硬化的影响.方法:30例伴有颈动脉粥样硬化行CAPD的患者,改用低钙透析液(钙1.25 mmoL/L),同时调整碳酸钙及1,25-(OH)2维生素D3(罗盖全胶丸)的剂量.在改用低钙透析液3、6、9、12月时,采用多普勒超声观察颈动脉内-中膜厚度(IMT)、颈动脉血流阻力指数(RI)、颈动脉粥样斑块数量和超声分型的变化;同时检测血清钙、磷、血清甲状旁腺素(iPTH,放免法),计算钙磷乘积.结果:随访过程中,1例患者死亡,2例患者自行退出.低钙透析液CAPD后,患者颈动脉IMT逐渐变薄,12个月时降至最低[(1.58±0.36)mm,P＜0.01].伴随着颈动脉RI降低,8例患者颈动脉内的扁平斑及软斑数量减少(P＜0.05),颈动脉粥样硬化斑块总数量也由47块降至34块.与此同时,血钙、磷及钙磷乘积明显下降(P＜0.01),血iPTH明显增加(P＜0.01).至12月时钙、磷、钙磷乘积、iPTH达标比例分别为83.33％、70％、96.67％、70％.碳酸钙的剂量也由(2.27±0.41)g/d增至(3.35±0.22)g/d(P＜0.05),罗盖全剂量由(0.21±0.09)μg/d增至(0.33±0.14)μg/d(P＜0.05).患者均未发生低钙抽搐、低血压等.结论:低钙透析有助于尿毒症腹膜透析患者颈动脉粥样硬化的疾病转归,其机制可能与显著改善患者的钙磷代谢紊乱,减轻其对血管的损伤作用有关.     

无醋酸盐生物滤过中碳酸氢盐血液动力学的动态观察

目的：研究无醋酸盐生物滤过（ＡＦＢＦ）过程中碳酸氢盐血液动力学的变化。方法：对１８例尿毒症患者在ＡＦＢＦ过程中进行血气分析动态观察并测定透出液中碳酸氢盐的含量。结果：①经过透析器后，血浆碳酸氢盐浓度从２０７４±２８１ｍｍｏｌ／Ｌ降至１１２６±３２２ｍｍｏｌ／Ｌ，二氧化碳分压从５２ｋＰａ降至３０ｋＰａ，而血浆ｐＨ值无明显变化。②随着透析时间的延长，血浆碳酸氢盐浓度明显增加，当血浆碳酸氢盐浓度达正常水平时，碳酸氢盐从透析器丢失明显增加。③２０ｍｌ／ｍｉｎ、２５ｍｌ／ｍｉｎ和３０ｍｌ／ｍｉｎ三种不同的碳酸氢盐灌注速度，均能使患者在透析２ｈ后血浆碳酸氢盐浓度达正常水平。结论：碳酸氢盐的灌注速度决定了最终血浆碳酸氢盐浓度，但不会因补碱过多而造成碱中毒。     

来氟米特替代霉酚酸酯或硫唑嘌呤在肾移植中的应用

目的探讨来氟米特(LEF)替代霉酚酸酯(MMF)或硫唑嘌呤(Aza)进行免疫抑制治疗的可行性。方法选取肾移植后使用环孢素A(CsA)或他克莫司(FK506)+MMF或Aza+泼尼松三联免疫抑制方案的受者16例,用LEF替代MMF或Aza维持治疗,替换时间为肾移植术后1~50个月,平均(8.8±12.3)个月。结果受者使用LEF替代治疗1~18个月,平均(8.7±7.2)个月,其中9例使用LEF超过6个月,7例超过12个月,3例已服用了18个月。受者肾功能稳定,换药前血肌酐为(103±24)μmol/L,换药半年后血肌酐为(95±26)μmol/L,换药1年后血肌酐为(108±27)μmol/L。16例受者中有1例因经济困难于1个月后退出观察,继续服用Aza;1例受者于半年后因血肌酐从130μmol/L增加到143μmol/L,要求恢复使用MMF。换药后发生急性细胞性排斥反应1例,轻度脱发2例,皮疹1例;未见肝功能明显异常、严重感染、贫血加重和血白细胞明显降低。结论肾移植后用LEF替代MMF或Aza的免疫抑制剂方案是安全可行的。     

关木通浸膏加低盐饮食建立大鼠慢性马兜铃酸肾病模型

目的:探讨用关木通浸膏加低盐饮食建立大鼠慢性马兜铃酸肾病动物模型的方法.方法:制备关木通浸膏剂,并测定其中马兜铃酸(AA)含量.实验分为正常对照组、低剂量组(AA 5 mg·kg-1·d-1)、中剂量组(AA10 mg·kg-1·d-1)、高剂量组(AA 20 mg·kg-1·d-1).给药前一次性腹腔注射速尿4 mg/kg,然后分别灌胃不同浓度的关木通浸膏,给药组给予低盐饮食(钠含量＜0.05%);对照组灌胃同体积自来水.连续给药1周,停药1周,隔周给药.各组每周测量体重,每2周代谢笼法留取24 h尿液;每组分别于第10 d、30 d处死大鼠各2只,第56 d处死其余大鼠,腹主动脉采血,测定相关肾功能指标;取肾组织进行形态学检查.结果:AA用药组尿量均明显增多,体重明显降低,尿蛋白、尿酶排泄量、肌酐等均升高.肾脏病理出现明显的小管间质损伤和典型的早期间质纤维化表现.结论:表明成功建立了大鼠慢性AAN模型,且本方法造价低廉,造模时间短,成功率高.