腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞

背景：骨髓间充质干细胞作为骨、软骨创伤缺损及退变修复的种子细胞越来越受到关注。目的：分析人骨形态发生蛋白2基因转染对白色封闭群大鼠（SD大鼠）骨髓间充质干细胞的影响。方法：分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞并体外扩增,通过腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞,分别通过荧光显微镜观察荧光表达情况及蛋白质水平来测定转染后人骨形态发生蛋白2的表达,碱性磷酸酶定量测定鉴定成骨活性及MTT法评估人骨形态发生蛋白2转染对骨髓间充质干细胞的影响。结果与结论：从SD大鼠骨髓提取物中分离培养的细胞形态为梭形,呈铺路石状、漩涡状生长,经流式细胞仪检测及多项分化能力鉴定符合骨髓间充质干细胞的特征;经转染人骨形态发生蛋白2基因后,骨髓间充质干细胞表达人骨形态发生蛋白2、碱性磷酸酶;MTT法检测转染人骨形态发生蛋白2基因后,骨髓间充质干细胞增殖能力明显增强（P〈0．05）。说明人骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞后可以持续、高效表达入骨形态发生蛋白2和碱性磷酸酶,在体外明显促进骨髓间充质干细胞的增殖。     

人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒的构建与鉴定

背景:骨形态发生蛋白2是诱导成骨关键物质,参与调节从细胞增殖、决定种系分化方向到细胞死亡等一系列的生物过程。目的:利用AdMax系统构建人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法:以人cDNA为模板PCR扩增人骨形态发生蛋白2基因,转化E.coli感受态细胞,经菌落PCR鉴定阳性转化子、阳性克隆测序无误后,扩增、抽提。将带有目的基因的腺病毒表达载体和携带有腺病毒大部分基因的辅助包装质粒共转染293细胞进行病毒包装扩增,PCR检测目的基因、Western Blot检测目的蛋白及终点稀释法检测病毒滴度。结果与结论:PCR获得长度为1223bp的人骨形态发生蛋白2目的基因片段,同源重组表达载体经阳性克隆PCR及测序鉴定,结果正确。293细胞内包装、扩增,经Westernblot及PCR鉴定无误后,获得病毒滴度为5×1013pfu/L的重组腺病毒。实验成功构建携带有人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体。     

人转化生长因子β1基因重组腺病毒的构建与鉴定

背景：转化生长因子β1能促进多种细胞的生长增殖,是调控骨髓间充质干细胞向成骨方向定向分化的主要生长因子。 目的：利用AdMax系统构建人转化生长因子β1(hTGF-β1)基因的重组腺病毒表达载体。 方法：采用PCR方法克隆人转化生长因子β1基因cDNA后,插入线性化表达载体pAV-MCMV-EGFP-3FLAG中,转化E.coli DH5α感受态细胞,构建pAV-MCMV-hTGF-β1重组质粒。 结果与结论：含目的基因的重组腺病毒质粒共转染293细胞进行病毒包装、扩增后, 经PCR、Western Blot检测得到转化生长因子β1重组腺病毒,其滴度约为1.25×10¹⁰ pfu/mL。表明利用AdMax系统成功可构建人转化生长因子β1腺病毒载体,并可满足进一步的转化生长因子β1成骨作用的研究。     

关节镜下经胫骨前外侧骨道重建后交叉韧带的临床研究

目的:评价关节镜下经胫骨前外侧骨道重建后交叉韧带的临床疗效。方法:收集2012年1月至2015年12月在本科确诊为后交叉韧带断裂并在关节镜下经胫骨前外侧骨道行后交叉韧带重建的患者共30例;年龄21~45岁(平均29岁),男24例、女6例;合并半月板损伤10例,后外侧复合体损伤4例。通过关节镜探查并将取下的自体半腱及股薄肌腱用于重建后交叉韧带,采用韧带标准评价表(IKDC)和Lysholm膝关节功能评分表评估患膝功能。结果:所有随访患者术后无感染发生,术后屈膝活动度为全部超过120°.患肢功能均恢复良好,优良率达100%.结论:关节镜下经胫骨前外侧骨道重建后交叉韧带,能满意地恢复膝关节功能,可作为后交叉韧带重建的选择方法之一。     

关节镜下胫前肌腱单束与双束重建后交叉韧带的临床效果比较

目的 比较关节镜下胫前肌腱单束重建与双束重建后交叉韧带的临床效果.方法 选择我院后交叉韧带损伤患者41例,回顾性分析经胫骨前外侧隧道单束重建后交叉韧带手术与经胫骨前外、前内侧隧道双束重建后交叉韧带手术的临床资料,比较两组手术时间,手术并发症,术前、术后6个月随访时的膝关节活动度(ROM)、Lysholm评分,并用Kne...     

不同固定方法治疗老年股骨转子间骨折疗效比较

目的评价动力髋螺钉（DHS）、Gamma钉和防旋股骨近端髓内钉（PFNA）治疗老年不稳定股骨转子间骨折的临床疗效。方法对162例股骨转子间骨折患者分别采用DHS、Gamma钉及PFNA治疗。比较3种方式的手术时间、术中术后出血量、手术并发症及术后疗效。结果 162例均获随访,时间1~2年。手术时间及术中出血量3组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。术后3 d引流量：PFNA组与DHS组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。术后18个月内并发症总发生率比较DHS组最高（P〈0.05）;术后疗效比较3组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论与DHS、Gamma钉比较,PFNA手术时间短、出血量少、术后并发症发生率低,在治疗老年不稳定股骨转子间骨折应用中占有优势。     

股骨干骨折术后膝关节僵硬的临床研究

目的分析股骨干骨折术后膝关节僵硬的处理方式及效果。方法 2005年1月至2010年1月我科共治疗26例股骨干骨折术后膝关节僵硬患者,其中男16例,女10例;年龄18-62岁,平均38.6岁。中段骨折10例,下段骨折16例,给予手法及切开松解。观察术后并发症和疗效。结果术后随访6-36个月,平均16个月,按膝关节外科临床评分系统[1]进行疗效评价,优14例,良9例,可2例,差1例,优良率88.5%。2次以上再手术发生率为11.5%。结论根据内固定及骨折愈合情况,选择合适的松解方法及术后功能康复,均可取得较满意的手术效果。     

人转化生长因子β1基因重组腺病毒的构建与鉴定

背景：转化生长因子β1能促进多种细胞的生长增殖,是调控骨髓间充质干细胞向成骨方向定向分化的主要生长因子。目的：利用AdMax系统构建人转化生长因子β1（hTGF-β1）基因的重组腺病毒表达载体。方法：采用PCR方法克隆人转化生长因子β1基因cDNA后,插入线性化表达载体pAV-MCMV-EGFP-3FLAG中,转化E.coliDH5α感受态细胞,构建pAV-MCMV-hTGF-β1重组质粒。结果与结论：含目的基因的重组腺病毒质粒共转染293细胞进行病毒包装、扩增后,经PCR、WesternBlot检测得到转化生长因子β1重组腺病毒,其滴度约为1.25×1010pfu/mL。表明利用AdMax系统成功可构建人转化生长因子β1腺病毒载体,并可满足进一步的转化生长因子β1成骨作用的研究。     

人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒的构建与鉴定

BACKGROUND:Bone morphogenetic protein 2 plays a key role in inducing osteogenesis. It involves in a series of bioprocess, including cell proliferation, determining the differentiation direction of germ line and cell death.  OBJECTIVE: To construct and identify the recombinant adenovirus vectors encoding human bone morphogenetic protein 2 gene by using AdMax system. METHODS:First, human bone morphogenetic protein 2 gene sequencing was amplified by PCR from human cDNA template and then cloned. Second, the recombinant shuttle plasmid was constructed and transformed into Escherichia coli competent cells DH5α. After the positive colonies were identified by colonies PCR and sequencing, the expression vectors were amplified and extracted. Next, the adenovirus expression vectors with target gene and the helper packaging plasmid carrying a majority of adenovirus genes were co-transfeced into 293 cells for virus packaging and amplification. Finally, target genes were detected by PCR, and target protein was detected by Western blot method, as well as infectious titer of the recombinant adenovirus was detected by end point dilution method. RESULTS AND CONCLUSION:Gene fragment of a length of 1 223 bp human bone morphogenetic protein 2 was obtained by PCR. The expression vectors constructed by homologous recombination techniques were identified by PCR cloning and sequencing; the results were correct. After virus packaging and amplification in 293 cells were identified by Western blot and PCR methods, the virus titer of recombinant adenovirus was 5×1013 pfu/L. These results suggest that the recombinant adenovirus vectors carrying human bone morphogenetic protein 2 gene have been constructed successfully.     

采用鞭结式缝合法修复急性跟腱断裂15例

目的:探讨采用鞭结式缝合法修复急性跟腱断裂的效果。方法:2013年1月至2016年1月,试验组采用采用鞭结式缝合法修复急性跟腱断裂15例,另外用改良Kessler缝合法15例作为对照组。结果:鞭结式缝合法与改良Kessler缝合法在切口长度(P=0.078)、术中出血量(P=0.089)、手术时间(P=0.112)、住院时间(P=0.211)和愈合时间(P=0.338),差异都无统计学意义。鞭结式缝合法组术后并发症总发生率与改良Kessler组无明显区别,差异无统计学意义(P=0.121)。两组患者患肢功能均恢复良好,优良率达100%.结论:采用鞭结式缝合法可作为急性跟腱断裂新的治疗策略,操作方便,疗效满意,并发症少。