猫人参化学成分研究

目的 对猫人参Actinidia valvata根的化学成分进行研究.方法 采用硅胶柱色谱法进行分离纯化,根据理化性质和光谱方法鉴定化合物的结构.结果 从猫人参根乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离鉴定了10个化合物,结构鉴定为2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅰ)、2β,3β,23-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(毛花猕猴桃酸B)(Ⅱ)、2α,3β,19,23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅲ)、2α,3β,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅳ)、积雪草酸(Ⅴ),3β-(反式-P-香豆素酰基)-2α,24-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅵ)、3β-(反式-P-香豆素酰基)-2α,23-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(Ⅶ)、熊果酸(Ⅷ)、β-谷甾醇(Ⅸ)、胡萝卜苷(Ⅹ).结论 以上化合物均系首次从该植物中分离得到.     

厚朴种质资源评价与利用研究

目的:选择优良种质资源,为厚朴品质改良的研究提供依据,以满足中药现代化、产业化和国际化的要求。方法:收集7省13个厚朴主产区种源的种子,在浙江景宁同一地点种植,于7年生时采样,用高效液相色谱法(HPLC)测定有效成分。结果:不同种源厚朴酚类含量存在极显著的差异,同一种源内个体间的差异更大。结论:湖北五峰、鹤峰和恩施3个种源厚朴质量明显优于其它种源,厚朴酚、和厚朴酚、厚朴酚类总量都很高,推广应用这3个优良种源,是当前提高厚朴质量最有效的途径。厚朴种源内个体间酚类含量存在巨大差异,离中药现代化、国际化“质量稳定、可控”的要求,仍然存在较大的差距,但这种差异可为厚朴选育种提供物质基础和巨大潜力。建议在育种工作中加强对优良单株的选择。     

铁皮石斛WRKY5基因的克隆与表达分析

目的克隆铁皮石斛Do WRKY5基因,并对生物信息学和表达模式进行分析。方法通过转录组测序和RT-PCR方法相结合首次从铁皮石斛中克隆到一个WRKY基因,利用生物信息学工具对其进行分析,并利用荧光定量PCR分析其在铁皮石斛中的组织表达模式及在低温胁迫、脱落酸(ABA)胁迫和蔗糖渗透胁迫下的表达模式。结果获得长1 336 bp的Do WRKY5基因转录因子c DNA全长序列,开放阅读框为834 bp,编码277个氨基酸残基,含有一个WRKY基因保守结构域和一个C2H2锌指结构域,属于WRKY基因家族的第II类成员。q RT-PCR分析表明,Do WRKY5基因在铁皮石斛根、茎、叶中均有表达,但在叶中的表达量最高。在不同低温和4℃不同时间诱导处理后,该基因表达量均显著升高,并且该基因在ABA胁迫和蔗糖渗透胁迫下均可被诱导表达。结论 Do WRKY5基因在铁皮石斛应答低温胁迫等多种非生物胁迫中可能起重要的调控作用,为进一步研究铁皮石斛的抗寒机制和抗寒性品种的选育提供基础。     

11个铁皮石斛杂交家系鲜花的挥发性成分分析

目的:为了对铁皮石斛主栽品种森山1号和11个杂交家系鲜花进行挥发性成分分析,并鉴定香气成分组成,比较不同家系铁皮石斛花的挥发性成分差异,同时也能够为进一步完善铁皮石斛新品种选育提供技术支持。方法:采用顶空固相微萃取(solid phase micro-extraction,HS-SPME)技术和气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对铁皮石斛花中挥发性成分进行提取分析,将检测到的不同家系铁皮石斛花成分组成及含量通过SPSS 18.0软件进行聚类分析,分析亲缘关系的远近。结果:铁皮石斛花挥发性成分主要以萜类、脂肪族、芳香族化合物为主,各类型成分在不同品种及家系中的分布存在着一定差异。聚类分析结果基于亲缘关系较近的家系在性状及挥发性成分组成上都较为接近,11个家系铁皮石斛按亲缘关系被分为3类。结论:固相微萃取技术在保证充分检测物质含量的基础上,将挥发性物质的流失降低到最小,简便精准。同时利用铁皮石斛鲜花挥发性成分组成和亲缘关系聚类可为铁皮石斛杂交选育及品系评价提供理论参考。     

铁皮石斛花中花色成分抗氧化性和稳定性研究

为了阐明铁皮石斛花中花色成分的抗氧化活性及其稳定性,该实验选取10个铁皮石斛家系的花为材料,采用紫外-可见分光光度法测定铁皮石斛全花及唇瓣提取液中的花色苷、类胡萝卜素和类黄酮的含量,以及清除DPPH自由基(DPPH·),超氧阴离子自由基(·O_2~-)和羟基自由基(·OH)的能力,并分析Cu~(2+),Mg~(2+),Al~(3+),K~+等金属离子和食品添加剂对铁皮石斛花中花色苷稳定性的影响。结果表明,铁皮石斛花中含有丰富的花色苷,类胡萝卜素和类黄酮等花色相关成分,这些成分在不同家系及不同部位中的分布存在一定差异,其中唇瓣中花色苷(1 330.9μg·g~(-1))含量显著高于全花样本(696.3μg·g~(-1)),且类胡萝卜素含量与花色苷含量呈显著正相关;铁皮石斛花提取液清除3种自由基的能力都与花色苷含量呈显著正相关,相关系数分别为0.384,0.415,0.455,说明花色苷类成分是铁皮石斛花中主要的抗氧化物质。金属离子Cu~(2+),Mg~(2+),Al~(3+),K~+使铁皮石斛花提取液吸光度增大,具有增色作用;甜味剂葡萄糖对铁皮石斛花中花色苷有护色作用,而抗坏血酸对铁皮石斛花中花色苷有明显的破坏作用。     

厚朴原植物现行分类法的商榷

系统生物学和种源试验结果表明 ,厚朴种内叶片先端从凹缺成 2裂到圆钝小凸尖状存在连续变异 ,树叶和芽鳞的毛被、以及厚朴酚类含量、同功酶酶谱种内变异也均存在连续变异 ,这些性状之间存在密切的相关性 ,趋势一致。综合这些性状聚类分析结果与居群的地理分布 ,笔者在全国第四届天然药物资源学术研讨会上提出了厚朴种内按叶形和地理区域划分为小凸尖型、中间型和凹叶型 3个地理宗。本文根据专家建议首次发表了厚朴种内叶片先端从凹缺成 2裂到圆钝小凸尖的连续变异图 ,以及闽浙等中间型厚朴居群内的树叶形态的变异。闽浙等中间型居群厚朴 ,不仅不同植株上叶片先端凹缺 2裂与圆钝小凸尖状并存 ,而且在同一植株上、甚至同一植株同一枝条上叶片先端也有凹缺2裂与圆钝小凸尖状并存现象 ,根据现行分类学难以确定是厚朴还是凹叶厚朴 ,从而进一步证明现行分类学存在的缺陷和中间型厚朴的存在。RAPD技术得到的DNA指纹给出了遗传学上的支持。     

多花黄精遗传多样性和遗传变异规律研究

目的揭示多花黄精遗传多样性及地理分布特征。方法采用ISSR分子标记技术,对来自浙江、安徽、江西、福建、湖南、湖北6省20个种源118株多花黄精进行综合分析。结果 16条引物共扩增出130条清晰条带,其中多态性条带123条,平均多态百分率(PPL)为94.62%,种源内遗传多样性在33.85%～60.00%,平均Nei's基因多样度(H_e)为0.1838,Shannon信息指数(I)为0.267 4,遗传分化系数(G_(st))为0.529 3。UPGMA聚类分析显示,同一种源的种质基本上聚在一起,说明种源间的遗传分化大于种源内不同个体间的基因遗传分化;在遗传相似系数值等于0.61时可将118份种质聚为武夷山脉、武陵山脉和罗霄山脉、大别山脉、洞宫山脉和天目山脉4类。结论多花黄精具有丰富的遗传多样性,遗传变异与山脉密切相关,山脉之间的平原、水域隔离可能是导致群体间遗传分化的主要原因之一。研究结果对黄精种质资源保护、品种选育具有重要的理论价值与现实意义。     

厚朴酚类物质含量层次变异规律研究

目的:揭示厚朴种源间、家系间及家系内个体间酚类物质含量的变化规律,为厚朴良种选育提供依据。方法:以广西资源、湖北五峰及浙江景宁等3个厚朴主要产区种源的半同胞家系子代为材料,采用HPLC测定厚朴酚与和厚朴酚含量。结果:厚朴酚含量、和厚朴酚含量、酚类物质总量种源间均存在极显著差异,均为湖北五峰种源最高,浙江景宁种源最低;种源内家系间、半同胞家系内单株间厚朴酚含量、和厚朴酚含量、酚类物质总量也存在显著差异,含量高的种源家系间、家系内变异也大,但厚朴酚含量与和厚朴酚的比值差异不显著。结论:厚朴酚类物质含量不仅在种源间存在显著差异,种源内家系间及家系内单株间也存在显著差异,且质量好的种源家系间变异更大,因此,根据厚朴种内酚类物质含量层次变异规律,厚朴良种选育应将种源选择赋于重要地位,建立种源、单株配合选择的遗传改良方法与程序。     

铁皮石斛产业现状及可持续发展的探讨

了解铁皮石斛产业发展现状与特点,为产业可持续发展的提供依据。查阅相关文献,实地调研浙江、云南、广西、安徽、湖南等铁皮石斛生产企业与销售市场,分析存在的主要问题,提出可持续发展的建议。铁皮石斛产业生产布局涉及10余个省区,集中于浙江和云南二个省份,且二地的发展模式不同,云南主要采用公司+农户的生产模式,而浙江以龙头企业自建生产基地为主,集原料生产、加工与销售于一体;产业具有高科技、高投入、高风险、高回报特点;伪品冲击、品种与质量控制技术研发应用滞后以及销售市场窄是目前制约产业可持续发展的关键问题。因此建立铁皮石斛产业科技联盟、加快共性技术研发与集成创新应用、强化产品生产自律与监管以及拓展销售市场是铁皮石斛产业可持续发展的关键。     

人工栽培铁皮石斛多糖含量变异规律

目的:全面了解人工栽培铁皮石斛药材多糖质量分数,以及种质、采收年限等因素与多糖质量分数的关系,为优质铁皮石斛药材培育提供依据.方法:采集浙江铁皮石斛人工设施栽培骨干基地(产量占全国90%以上)11个种质一至三年生(生理年龄)的33个样品,并分别记载其形态特征;采用苯酚-硫酸比色法测定铁皮石斛多糖质量分数.结果:全国铁皮石斛骨干企业生产的二年生铁皮石斛其多糖平均质量分数达34.47%(25.63%～41.65%);不同种质、生理年龄的铁皮石斛多糖质量分数存在显著差异,5号种质多糖质量分数最低,一年生、二年生、三年生多糖质量分数分别为19.77%,25.63%,11.83%,10号种质最高,一年生、二年生、三年生多糖质量分数分别为33.31%,41.35%,28.39%.结论:全国人工栽培骨干基地生产的铁皮石斛,其多糖质量分数普遍高于野生药材,种质与生长年限显著影响多糖质量分数;铁皮石斛品种选育与采收年限的控制可提高多糖质量分数,浙江产区铁皮石斛最佳采收时间为两年生冬季至三年生开花前.