急性丙型肝炎患者病毒株部分基因克隆及其序列分析

目的探讨HCV感染在肝炎发生中的病原学作用。方法对89例急性肝炎进行HCV标志物分析,并从HCVRNA阳性的5例非甲非乙型急性肝炎患者血清中提取HCVRNA,经随机引物逆转录合成cDNA,先以型别特异的PCR法分型,再用巢式PCR扩增部分核心基因区序列,将产物连接p-GEM-T载体,在大肠杆菌中表达后测序分析。结果非甲非乙型急性肝炎中HAV、HBV和HCV阳性分别占47.2%、28.1%和15.7%,HAV和HBV双重感染占14.6%,非甲、非乙和非丙肝炎占9%;HCV分型显示Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅱ/Ⅲ混合型分别占85.8%、7.1%和7.1%;Ⅱ型血清用于序列分析,扩增序列424bp与原设计完全一致。急性肝炎株间核苷酸同源性在98.1%～99.5%。氨基酸同源性在97.6%～99.2%;前者的同源性在Ⅰ型为91.9%,在Ⅱ型为94.3%～95.6%;后者与Ⅰ型、Ⅱ型的同源性在92.3%～95.8%。结论HCV为引起非甲非乙型急性肝炎的主要病毒之一,以Ⅱ型为主,应引起临床重视。     

小鼠病毒性心肌损伤模型制作及cTnⅠ基因扩增与测序分析

目的分析心肌型肌钙蛋白(cTnⅠ)-mRNA在监测病毒性心肌损伤发生与发展过程中的价值.方法于BALB/c小鼠腹腔接种1×108TCID50柯萨奇病毒B3(CVB3)诱发心肌损伤,分别在CVB3感染后第3、6、9、12、15、18和21天采集外周血后处死小鼠,留取鼠心脏作病理组织学检查,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析心肌和外周血中cTnⅠ基因及测序分析扩增片段.结果CVB3感染后,鼠心肌组织及循环血中cTnⅠ-mRNA均表达增加,且与心肌细胞肿胀、炎性细胞浸润、核固缩及碎裂、变性、坏死、钙化等组织学改变相关.cTnⅠ-mRNA基因扩增,心肌组织全数阳性;外周血阳性率在对照组及感染后的第3、6、9、12、15、18和21天分别为0、0、0、16.7%、40%、71.4%、83.3%和87.5%.测序分析证实从心肌组织及外周血中扩增基因片段与原序列完全一致.结论病毒性心肌损伤时cTnⅠ-mRNA上调表达并释放入血,循环血cTnI-mRNA为监测心肌损伤发生与发展的灵敏标志物.