粒-巨噬系集落刺激因子基因在大肠杆菌中的高效表达

粗-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)是一种重要的造血生长因子,主要是刺激粒细胞和巨噬细胞大量增殖。其临床疗效显著而且副作用小。本文先从正常人外周血细胞中提取总RNA,经逆转录——PCR扩增克隆了GM-CSF之cDNA。以DNA序列分析证实与文献一致。再设计合成一对引物定向改造编码成熟GM-CSF基因的5′端:换成大肠杆菌偏性密码,并避免起始点周围形成强二级结构,把终止密码子换成TAA。将改造后的基因克隆到载体pBV220中,转化受体菌HB101,经42℃诱导高效表达出GM-CSF。表达产物约占全菌蛋白的20％,初步纯化和复性后比活性>1×10~7U/mg。     

用菌体作载体制备抗合成多肽片段的抗体

利用氨基酸合成仪合成蛋白多肽片段作为免疫原制备针对各种大分子的抗血清或单克隆抗体,不但可以避免目标抗原在来源及纯化上的困难,而且可以选择性制备具有预定表位特异性的抗体.在抗原结构与功能的分析研究中极为有用。然而,由于多肽片段分子量小,免疫原性弱,需要与大蛋白分子偶合后才能激发机体产生较高水平的抗体。蛋白载体偶联方法不但成本及技术要求     

大肠杆菌乳糖操纵子片段的核苷酸顺序

DNA顺序分析是遗传工程使用的重要技术之一,在基因表达、结构与功能的研究中是必不可少的。自1975年Sanger创建了第一种快速简便的直读法——“加、减法”以来,DNA顺序测定发展很快,方法也在不断改进。加减法是利用DNA聚合酶在不同条件下具有聚合酶或外切酶活性的特点,能合成长短不一的相差一个碱基对的一系列核酸链的原理进行测定的。这种方法虽然较以前的方法快速简便,但并不十分精确。以后     

抗人白细胞间素-2单克隆抗体的生物学特征及其应用

采用多途径、高效价免疫及强化加强免疫方案,制备了一组生物学特性多样化的抗人自细胞间素-2(IL-2)的单克隆抗体(McAb)。利用人工合成的IL-2多肽片段,夹心排阻ELISA亲和指数测定及中和试验等方法,全面鉴定了这些McAb,利用     

Jurkat细胞克隆化及白细胞介素2高产株的建立

自1978年Gillis等人确定了Jurkat细胞的一些亚系能经有丝分裂原刺激,产生高效价的人白细胞介素Ⅱ(IL-2)以来,许多实验室都利用这一细胞的不同亚系做为人IL-2mRNA提取、基因文库制备及天然IL-2制备纯化的重要来源。引进或建立一株稳     

用微量和弱免疫原性抗原制备多克隆及单克隆抗体的新方法

制备抗血清及单克隆抗体(McAb)时,最重要的是抗原(Ag)诱发所免疫动物的抗体应答强度。企图获得高效价的抗体,不但取决于Ag本身所具有的免疫原性,而且与免疫时所使用的Ag量,免疫途径及佐剂形式有关。通常,当抗原免疫原性较强,可供使用的量又比较充裕时,用常规免疫方法就能获得较满意的抗体滴度。相反,当Ag免疫原性弱,或可供使用的Ag又很微量时,获得良好的免疫效价往往就不容易,常成为工作中极为棘手的问题。在这种情况下,合理有效的免疫方法就显得十分重要。近年来,许多实验室相继摸索出