穿俊质粒pZH32的构建

The shuttle vector can replicate in both bacteria and eukaryotic cells. We have constructed a shuttle vector pZH32 based on the EB virus. Three component parts of the plasmid come from pSV2gpt, pS189 and pMCi5. An E. coli tyrosine suppressor tRNA gene, supF, was used as a mutagenic target in this plasmid, and a gpt gene was used as a selectable marker gene for transformed cells. This pZH32 based on EBV replicates autonomously in the nuclei of human cells. It has a low background mutation frequency. The plasmid can be used to examine the mutagenic mechanism of potential mutagens and carcinogens in mammalian cells.     

人类线粒体突变与线粒体疾病

线粒体是细胞内唯一存在于细胞核外又带有遗传物质的细胞器，由于这一特殊性，有关其进化和来源的问题曾有过很多争论。但因为与临床的关系过去不很明确，对它的生物学意义并未引起足够的重视。８０年代后随着线粒体的序列和基因组组成的测定，以及发现了线粒体ＤＮＡ（ｍ...     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的　建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法　用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果　提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论　本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。     

甲基磺酸乙酯对原核与真核细胞内的穿梭质粒的诱变研究

近年来,随着分子生物学技术的发展,推动和促进了遗传毒理学研究的发展。80年代中期起从分子水平上利用穿梭质粒进行细胞诱变研究,成为遗传毒理学的一个新领域。穿梭质粒是利用重组DNA技术构建的DNA分子。大肠杆菌——哺乳动物细胞穿梭质粒既可在大肠杆菌中复制,也能在哺乳动物细胞中增殖。利用这种穿梭梭质粒可     

脊髓灰质炎病毒基因组cDNA限制性核酸内切酶谱的电子计算机分析

脊髓灰质炎病毒灭活疫苗和减毒活疫苗在预防该病的流行方面取得了巨大成功。近年来,国外相继开展了脊髓灰质炎病毒基因工程疫苗的研制,获得了一些进展。我们应用电子计算机,参考国外已发表的脊髓灰质炎病毒基因组核酸序列,分析了可能应用的64种限制性核酸内切酶谱,从而为建立自己建株的病毒基因组cDNA克隆以及组装表达VP_1等抗原蛋白的质粒提供了丰富的资料。     

我国医学教育实施ⅡME"基本要求和标准"的前期评估

本文分析了国际医学教育研究所提出的全球医学教育"基本要求和最低标准"在中国是否有推行的政策环境、各个医学院校对教育质量的要求是否有条件使用这个标准,并对此做出了基本评价.     

人纤溶酶原K5基因的结构改造及其在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定

目的 改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD-liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD-liteK5蛋白.方法 以入纤溶酶原K5 cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD-liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEXl-λT中,构建重组原核融合表达载体pGEX-RGDRGD-liteK5;在IPTG诱导下,观察融合蛋白在大肠杆菌Rosetta中的表达情况;利用亲合层析柱纯化表达产物,用Western blot分析鉴定表达产物.结果 PCR扩增得到274 bp的片段,并成功插入pGEX1-λT质粒;含重组质粒的大肠杆菌在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,其分子量为36 kD;获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量约为10 kD的RGDRGD-liteK5蛋白;Western blot证实了表达产物的正确性.结论 成功地改造了人纤溶酶原K5基因,构建了重组融合表达质粒pGEX-RGDRGD-liteK5,并纯化了其表达产物.     

人脑源性神经营养素-6基因的克隆及在原核细胞中的表达

目的 克隆人脑源性神经营养素－6（neurotrophin-6,NT-6)基因，并观察其在大肠杆菌中的表达情况。方法 从流产胎儿大脑皮层提取总RNA，用逆转录聚合酶链反应扩增得到人的NT－6基因cNDA片段；经酶切回收后克隆进pBK-CMV质粒，构建NT－6的表达载体。通过诱导，使NT－6基因在大肠杆菌中表达。结果 分离克隆了人脑源性NT－6基因，含该基因的大肠杆菌在异丙基－β－D－硫代半乳糖苷诱导的情况下，表达了特异性的蛋白质。结论 人脑源性NT－6基因的克隆表达为进一步研究NT－6的结构，功能及临床应用奠定了基础。     

旋毛虫cDNA文库的构建

为了克隆和研究旋毛虫保护性抗原及特异性诊断抗原基因，我们用异硫氰酸胍从旋毛虫肌肉或幼虫中分离总RNA，用PolyATtractmRNA分离系统统化mRNA，以NotIprimeradapter为引物合成双链cDNA，加SalIadapter,与λgt22A在体外进行连接包装并转染大肠杆菌Y1090r－，构建cDNA文库。结果获得5×105个重组噬菌体，重组率在90％以上．     

一种通用的从少量培养液中快速提取细菌染色体DNA的方法

目的　建立一种通用、快速、简便的提取细菌染色体DNA的方法。方法　用丙酮破坏细菌细胞壁膜脂质结构 ,裂解液破除细菌细胞膜 ,释放胞内核酸 ,经酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质及多糖 ,无水乙醇沉淀DNA ,TE缓冲液溶解DNA。结果　提取染色体DNA的琼脂糖电泳图谱 ,对于G 杆菌与经典的CTAB法提取的DNA图谱相同 ,对于G 球菌其效果要明显好于CTAB法。所得DNA能被HindⅢ酶切消化 ,能用于RAPD扩增。结论　这种提取染色体DNA的新方法 ,对于所收集的 8种不同的细菌都有较好的结果 ,是一种通用的细菌染色体DNA提取方法。