实时荧光定量PCR测定人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因表达

目的 建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达含量的实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR法,探讨其在健康对照者、乙型病毒性肝炎肝硬化患者及原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达状况.方法 设计TRAIL基因的特异性引物和TaqMan-MGB探针,以β-actin基因为内参,RT-PCR扩增目的 片段.胶同收纯化目的 片段,构建克隆载体作为定最模板,在ABI Prism7000型荧光定量分析仪上进行扩增,建立标准曲线;同时检测30名健康对照者、30例PBC患者及25例乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中TRAIL基因的荧光强度和循环阈值,计算样本中TRAIL基因的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA的线性范围为103-106拷贝/ug RNA(r=-0.997);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.3%.低浓度样本批内及批间CV分别为12.5%和14.6%.PBC患者TRAIL mRNA表达量为[(3.3±2.5)×105拷贝ug RNA],高于健康对照组[(0.5±0.2)×105拷贝/ug RNA],两组差异有统计学意义(t=5.994,P<0.01);乙型病毒性肝炎肝硬化患者TRAIL mRNA的表达[(2.1±0.9)×105拷贝/ug RNA]亦高于健康对照组,且差异有统计学意义(t=8.536,P<0.01),而两疾病组间差异无统计学意义(t=1.988,P>0.05).结论 成功建立检测TRAIL mRNA的FQ-RT-PCR法,并初步发现TRAIL mRNA在PBC及乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中表达升高,这将对肝硬化肝损伤机制研究提供新的思路.     

系统性红斑狼疮的分子标志物研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的实验室诊断和病情判断主要依赖于抗核抗体、抗双链DNA(ds DNA)、抗Sm、抗磷脂抗体等自身抗体。但这些自身抗体存在敏感性或特异性差的缺陷,大大限制其临床价值。因此,迫切需要研发一些新技术及新标志物来解决这些问题。随着分子生物学技术的迅速发展,大量新的分子标志物被发现并鉴定,有望为提升SLE临床诊疗水平提供新契机。该文概括性综述了近年来在SLE中新发现的各种分子标志物,包括基因转录、变异谱、表观遗传谱、游离基因分子谱、胞外颗粒表达谱等,并对这些分子标志物的应用前景和存在的问题进行讨论。     

Toll样受体4在强直性脊柱炎患者外周血白细胞中的表达及临床意义初探

目的：探讨Toll样受体4（Toll-likereceptor 4,TLR4）在不同人群外周血白细胞的差异表达及其在强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,As）中的意义。方法：应用流式细胞术检测60例AS患者及40例健康对照外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞TLR4的表达。结果：TLR4在外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞均有表达,以单核细胞表达为主;HLA-B27阳性和阴性AS患者外周血3种细胞TLR4的阳性表达率均明显高于对照组（P〈0．001）,但两者之间并无显著差异。结论：TLR4主要表达于外周血单核细胞,但AS患者外周血3种细胞表达均上调,这种上调与HLA-B27阳性与否无关,提示TLR4信号通路的异常与AS的发病相关。     

抗线粒体抗体在原发性胆汁性肝硬化筛查中的应用

目的探讨临床医生对抗线粒体抗体(AMA)检测的应用情况。方法回顾性分析上海长征医院2011年1月至2015年8月259例AMA阳性患者信息,并在临床医生提出AMA检测要求组与未提出检测要求组之间进行比较。结果 259例AMA阳性患者中,临床医生提出AMA检测要求的181例(占70%),没有提出AMA检测要求的78例(占30%);确诊为原发性胆汁性肝硬化(PBC)的204例(占80%),未确诊PBC的55例(占20%)。临床医生提出AMA检测要求组感染科和消化科送检比例和PBC确诊比例均显著高于未提出AMA检测要求组(P0.01)。在临床医生提出AMA检测要求组中,送检例数由多到少的科室依次为消化科、感染科、肝移植科、风湿免疫科和其他科室;而在临床医生未提出AMA检测要求组中,送检例数由多到少的科室依次为风湿免疫科、肾内科、神经内科、感染科、消化科和其他科室。在临床医生提出AMA检测要求组中,未确诊PBC 18例,未确诊原因包括已诊断为乙型肝炎肝硬化7例,患者不同意肝活检6例,患者失联5例。在临床医生未提出AMA检测要求组中,未确诊PBC 37例,未确诊原因包括实验诊断科未告知临床医生AMA阳性16例,患者不同意肝活检12例,患者失联6例,实验诊断科告知临床医生但后者未安排患者做进一步检查3例。结论消化科和感染科的临床医生对PBC的认识较为深入,较少出现忽视AMA检测的情况;但风湿免疫科、肾内科和神经内科的临床医生对PBC常常忽视AMA的检测,而这些科室AMA阳性并不罕见。     

严重急性呼吸综合征特异性体液免疫规律调查

目的:调查严重急性呼吸综合征患者特异性体液免疫规律。方法:采用间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法检测SARS患者血清中特异性抗体水平。结果:SARS患者血清特异性抗体IgG水平在住院5周内持续升高,第5周达最高值,5周后逐步下降,第6～7周阳性率为100%。特异性抗体IgM水平在住院3周内持续升高,第3周达到最高值,阳性率为70%,第4周逐步下降。抗SARS病毒核蛋白抗体水平在住院第5周达最高值,5周后略有下降,住院5～18周阳性率达100%。结论:SARS患者血清特异性抗体检测对于SARS临床诊断、康复血浆治疗和流行病学调查具有重要价值。     

深圳市福田区孕前妇女生殖健康实验室检查结果分析

目的分析深圳市福田区孕前妇女生殖健康实验室检查结果,旨在有效降低出生缺陷发生率,提高孕育质量。方法对深圳市福田区2013-2016年参加国家免费孕前优生健康检查项目的妇女进行生殖系统检查。结果白带常规检查异常率为13.69%,淋球菌检测阳性率为0.01%,沙眼衣原体抗体检测阳性率为1.03%,梅毒螺旋体筛查阳性率为0.11%。结论生殖健康检查对优生优育具有重要意义,建议育龄妇女孕前应进行生殖健康筛查,避免由生殖道感染导致出生缺陷婴儿的发生,提高出生人口素质。     

病原菌4 944株耐药监测与分析

摘要： 目的 监测和分析2007年我院感染患者的细菌分离、鉴定情况和耐药特点，为临床抗感染治疗提供依据。方法 采用VITEK系统鉴定细菌，Kirby－Bauer琼脂扩散法作体外药敏试验，应用WHONET5.3软件分析2007年我院细菌的分布情况和药敏结果。 结果4944株病原菌中以大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌最常见。亚胺培南与美罗培南对肠杆菌科细菌作用效果较好，但在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中已出现少数耐药菌株，对鲍曼不动杆菌耐药严重,耐药率达45%以上。产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率为72.54%和55.69%。糖肽类抗菌药物对革兰阳性球菌高度敏感。葡萄球菌中MRSA和MRCNS的检出率分别为70.80%和79.60%。结论 2007年我院细菌耐药性呈上升趋势，及时总结和监测病原菌的分离率及耐药性将有助于临床医生合理应用抗菌药物，防止抗生素滥用及新耐药菌株的产生。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在强直性脊柱炎患者血清中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(sTRAIL)在强直性脊柱炎(AS)患者和健康个体血清中的表达及其临床意义。方法应用ELISA法检测60例AS患者和30例健康对照血清sTRAIL的浓度;应用ESR自动化分析仪和特定蛋白分析仪分别测定红细胞沉降率(ESR)和血浆C反应蛋白(CRP);分析HLA-B27阳性和阴性的AS患者血清sTRAIL水平与ESR、CRP的相关性。结果AS患者血清sTRAIL浓度明显高于对照组(P<0.01),且HLA-B27阳性和阴性AS患者均明显高于对照组(P<0.01),但两者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在HLA-B27阳性AS患者中,血清sTRAIL水平与CRP呈明显的相关性而与ESR的相关性并不明显;而HLA-B27阴性AS患者血清sTRAIL与ESR及CRP均无显著相关性。结论血清sTRAIL水平在AS中明显上调,与HLA-B27阳性与否无显著相关性。AS患者血清sTRAIL与ESR无相关性,而与CRP是否具有显著相关性受到HLA-B27阳性与否的影响。总之,血清sTRAIL水平的改变可能与AS的发生和发展密切相关。     

骨科患儿肢体静脉留置针不同固定方法的效果比较

目的自行研制一种新型小儿静脉输液肢体固定装置,通过与传统留置针固定方法进行比较,探讨使用新型固定装置的优越性。方法采用随机分组的方法将300名患儿分为实验组和对照组,实验组应用新型小儿静脉输液肢体固定装置,对照组应用传统留置针固定方法,观察使用新型留置针固定方法较传统固定方法是否能延长留置时间。结果两种不同的留置针固定方法成功率差异有统计学意义(P0.05),应用新型小儿静脉输液肢体固定装置较之传统留置针固定方法成功率提高。结论骨科患儿在使用留置针时,采用新型固定装置可提高静脉穿刺固定的成功率,避免反复穿刺给患儿造成痛苦,并可提高护士工作效率。