重组结核分支杆菌38000蛋白的理化特征与细胞免疫功能

目的：探讨重组38000蛋白在结核病流行病调查和亚单位疫苗研制中的应用前景。方法：等电点测定，肽图分析和圆二色光谱分析研究重组38000蛋白的理化性质；豚鼠皮试，MTT法测外周血单核细胞增殖和巨噬细胞吞噬探讨重组38000蛋白在细胞免疫中所起的作用。结果：重组38000蛋白是酸性蛋白，其等电点为4．67，肽图分析表明其碱性氨基酸的数量与理论一致；重组38000蛋白的二级结构由α－螺旋（32．6％），β-转角（31．6％）和无规则卷曲（35．8％）组成，它能诱发致敏豚鼠产生DTH反应；增强小鼠巨噬细胞吞噬功能；刺激30．8％健康者和25％所试结核病人的外周血单核细胞增殖。结论：重组38000蛋白可能在结核病流调中具有应用前景，并可作为亚单位疫苗候选者之一。     

16S～23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针不同显色方法对结核患者痰标本的检测

目的：评价16S－23rDNA间隔区序列寡核苷酸探针碱性磷酸酶显色与辣根过氧化物酶化学发光学对结核患者痰标本检测的应用价值。方法：采用生物素标记5′端18bp的寡核苷酸探针斑点杂交的碱性磷酸酶显色反 辣根过氧化物酶化学发光检测90例例结核患者和30例非结核患者痰标本,结果：痰标本基因组DNA直接与探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为22．2％,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为33．3％,痰标本经引物PL1、PL2扩增（扩增产物350bp,）与寡核苷酸探针杂交,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为77．8％,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为83．3％,痰标本经引物b扩增（扩增产物250bp)与探针杂交,碱性磷酸酶显色和化学发光检测阳性率分别为75．6％,80．0％,检测的敏感性高于痰涂片。寡核苷酸探针与30例非结核患者痰标本DNA杂交则全为阴性。结论：寡核苷酸探针和250bpPCR扩增产物相结合,经化学发光显色是分枝杆菌检测的一种有效方法。     

脑脊液检测项目在结核性脑膜炎诊断应用中的若干进展

脑脊液检测项目在结核性脑膜炎诊断应用中的若干进展王巍庄玉辉结核性脑膜炎（结脑）仍是威胁人类生命的主要肺外结核病之一，预后的关键在于早期诊断和及时治疗。由于不典型病例增多，脑脊液（ＣＳＦ）的实验室检测十分重要。现就ＣＳＦ检测项目在结脑诊断中应用的若干进...     

结核分支杆菌耐药性分子机理研究的若干进展

结核分支杆菌耐药性分子机理研究的若干进展庄玉辉关于分支杆菌耐药性机理问题迄今有三种观点：（１）细胞膜或壁结构与组成发生变化，使细胞膜通透性改变，药物通透性降低，摄取量减少；（２）质粒或转座子介导的耐药性；（３）药物靶编码基因突变。随着耐多药结核病（Ｍ...     

结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的构建结核分枝杆菌PPE60的GST融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的基因,将目的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。进行质粒的酶切鉴定和序列分析;对重组的大肠杆菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析菌体蛋白,凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况,Western-blot鉴定融合蛋白。结果正确构建了pGEX-PPE60融合表达载体,载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的50%。该融合蛋白能与GST抗体产生阳性反应。结论成功构建了GST-PPE60融合蛋白的表达载体,并能在大肠杆菌中高效表达,为PPE60蛋白的功能研究奠定了基础。     

抗结核分枝杆菌单克隆抗体用于结核杆菌抗原分析、鉴定及检测的研究

目前,结核病仍是严重危胁人类健康的传染病,如何有效控制结核病,并且降低结核病患病率和发病率是我国乃至世界卫生工作中一项迫在眉睫的任务。因此,对于结核病的诊断和治疗的研究仍有许多工作要做。抗结核分枝杆菌单克隆抗体的研制对于结核病的血清学诊断、结核病的治疗以及结核分枝杆菌抗原的分析都有重要的意义。抗结核分枝杆菌单克隆抗体将作为工具被越来越深入及越来越广泛的进行应     

结核杆菌的实验室检查

抗酸分枝杆菌有近百种,其中对人和动物致病性最强的是结核杆菌和麻风分枝杆菌,而人型结核杆菌约占90％。结核杆菌的检出和鉴定对结核病具有确诊意义。1 涂片镜检法和分离培养法1.1 涂片镜检法 常用改良萋尔-纳尔逊抗酸染色法。抗酸杆菌呈红色杆菌(或变异形态)。油镜下,若300视野未发现抗酸杆菌,报告“未发现抗酸杆菌”;300视野发现抗酸杆菌1～2条为可疑,报告抗酸杆菌菌数;100视野发现抗酸杆菌3～9     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血中结核杆菌的临床应用价值

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血中结核杆菌的临床应用价值李国利，庄玉辉，张晓刚，吴雪琼材料与方法：（１）标本来源：痰标本６６份、非抗凝血标本６６份均来源于已确诊的结核科住院患者，其中Ⅱ型肺结核６例，Ⅲ型肺结核（无空洞）３９例，Ⅲ型肺结核（有空洞）＋Ⅳ...     

应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA

由于ＤＮＡ探针杂交反应特异性高 ,国内外研究者已采用ＤＮＡ探针杂交技术检测结核分枝杆菌。但该检测方法敏感性较低 ,通常采用与聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增相结合的方法。但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会。我们在对ＤＮＡ探针与ＰＣＲ结合检测临床标本进行系统研究的基础上 ,发现临床标本简化法处理 ,即ＤＮＡ探针化学发光检测 ,ＤＮＡ损失较少 ,还可提高检测的敏感性 ,现将结果报道如下。材料与方法一、菌种来源受试分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所。二、标本收集结核患者痰标本 2 31份 ,血液标本 85份 ,脑脊液、胸、…