PCR-RFLP技术用于脓肿分枝杆菌群鉴定的初步研究

目的 探讨PCR-RFLP分子鉴定技术对脓肿分枝杆菌群鉴定的应用价值.方法 收集2009-2010年在福建省肺科医院、北京市朝阳区疾病预防控制中心、北京解放军总医院抗酸染色阳性菌株46株.根据2004年分枝杆菌检验手册临床检验常分离菌鉴定程序,用DNA直接测序方法为对照,以hsp65(441 bp)和rpoB(380 bp)基因的特异片段为分子标识,采用PCR-RFLP对脓肿分枝杆菌群临床分离菌株进行菌种鉴定.结果 接种L-J、PNB和TCH培养基,鉴定为结核分枝杆菌30株,非结核分枝杆菌16株.其中10株非结核分枝杆菌的培养特性和主要生化反应同脓肿分枝杆菌( ATCC 19977)结果一致.经hsp65 PCR-RFLP鉴定,9株菌株的指纹图谱为235和200 bp( BstEⅡ)/145、70、60、55、50和40 bp(HaeⅢ),1株菌株的指纹图谱为235和200 bp(BstEⅡ)/200、70、60和50 bp(HaeⅢ).经rpoB PCR-RFLP鉴定,10株临床菌株的指纹图谱是105、95和80 bp(MspⅠ)/130、100 bp和90 bp( HaeⅢ).DNA测序分析,9株分离株与脓肿分枝杆菌群脓肿亚种hsp65和rpoB基因序列匹配度均为100％;1株分离株与脓肿分枝杆菌群马赛分枝杆菌亚种hsp65和rpoB基因序列匹配度均为100％.结论 PCR-RFLP是一种快速、有效鉴定脓肿分枝杆菌的方法,且hsp65 PCR-RFLP的鉴定效果优于rpoB PCR-RFLP.     

深部真菌感染的实验室诊断研究进展

深部真菌感染一般包括侵袭真皮、皮下组织和内脏器官的深部真菌病,引起深部真菌感染的病原菌主要有念珠菌、曲霉菌、新型隐球菌、卡氏肺孢菌等机会性致病菌,另外还有一些如粗孢子球菌、荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌及巴西副球孢子菌等南美洲和北美洲等地出现的地方性致病菌以及毛霉菌属、镰刀菌属、青霉属和申克孢子丝菌等罕见菌种。随着广谱抗生素、     

2010年湘雅医院细菌耐药性监测

目的了解2010年1月1日～12月31日中南大学湘雅医院临床常见分离病原菌的分布及耐药性。方法采用Vitek 2对临床常见分离病原菌进行鉴定及药敏试验,按CLSI 2010版标准判断结果。用WHONET5.4软件对实验结果进行分析。结果 2010年临床分离的5 011株病原菌中,革兰阳性菌为1 417株,占28.3%,革兰阴性菌为2 684株,占53.6%,真菌910株,占18.2%。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林菌株的分离率分别为60.4%(142/235)和55.6%(262/471)。未出现对万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁耐药的葡萄球菌,分离到3株对万古霉素耐药的屎肠球菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的检出率分别为77.6%(470/606)和58.4%(211/361),肠杆菌科细菌对头孢哌酮/舒巴坦和碳青霉烯类仍具有较高的敏感性,耐药率分别为0.9%～15.8%和0.5%～10.1%。铜绿假单胞菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为15.8%和17.3%,鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为49.4%和29.7%。发现几株泛耐药菌株,其中铜绿假单胞菌3株,不动杆菌属3株。结论该院临床分离病原菌耐药状况较为严重,应加强细菌耐药监测,密切关注其耐药性变迁,为临床经验用药提供实验依据。     

变性高效液相色谱对CTX-M型超广谱β内酰胺酶基因分型研究

Objective To investigate the genotype distribution of CTX-M-type extended-spectrum β-1actamase(ESBLs) by denaturing high-performance liquid chromatography(DHPLC) in Hunan Province and the accuracy of DHPLC assay. Methods The blaCTX-M genes of standard strains and clinical ESBLs-producing Enterobacteriaceae were amplified by multiplex PCR followed by DHPLC and genotype determination. 25 isolates randomly selected were sequenced to assess the accuracy of DHPLC method. Results Among 142 ESBLs-producing isolates, 109 isolates carried blaCTX-M gene (76. 8% ). Four different CTX-M genotypes were detected by DHPLC, including CTX-M-3 (33 isolates), CTX-M-15 (19 isolates), CTX-M-14 (52 isolates) and CTX-M-9 (5 isolates). The DHPLC typing of 25 isolates suggested that 24 isolates were verified uniformly by the sequencing, but one CTX-M-15 isolate typed by DHPLC was shown to be CTX-M-82 by sequencing. Conclusion DHPLC is a powerful tool for genotyping of the resistance gene and is worth being applied in the clinical and scientific research with accurate, rapid and economic advantages.     

从临床标本中分离出的病原性细菌的分布及耐药性分析

目的 了解中南大学湘雅医院2012年临床分离病原菌分布及耐药性变迁,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 采用全自动微生物鉴定及药敏系统对临床标本分离的病原性细菌进行鉴定及药敏试验,所有实验数据用WHONET 5.6软件进行分析.结果 该院2012年共分离非重复病原菌7 227株,结果显示革兰阴性菌占63.7％(4 607/7 227),革兰阳性菌占36.3％(2 620/7 227).革兰阴性菌中分离最多的依次为大肠埃希菌(20.2％)、肺炎克雷伯菌(17.6％)以及鲍曼不动杆菌(16.7％);革兰阳性菌以凝固酶阴性葡萄球菌(30.3％)以及金黄色葡萄球菌(26.1％)的分离为最多.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检出率分别为69.8％和48.6％,肠杆菌科细菌对亚胺培南的耐药率低于4.0％.金黄色葡萄球菌(SA)和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)中耐甲氧西林菌株的检出率分别为45.1％和80.7％,未检出对万古霉素和利奈唑胺耐药株;MRSA中对复方新诺明的敏感率为78.8％,MRCNS中对利福平的敏感率为79.3％.粪肠球菌对所测试抗菌药物的敏感性均显著高于屎肠球菌,两者对万古霉素的耐药率分别为0.9％和1.0％,并均检出少量对VA中介的菌株.铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为35.9％和68.6％,发现多株泛耐药非发酵菌.结论 临床分离病原菌仍以革兰氏阴性杆菌为主,细菌耐药现象十分严重;耐甲氧西林葡萄球菌及产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分离率高,泛耐药非发酵革兰阴性杆菌有增加趋势;应加强细菌耐药监测,指导临床合理使用抗菌药物.     

3种品牌POCT血糖仪与生化分析仪己糖激酶法检测血糖的比对

目的以己糖激酶法检测血糖作为参比方法,评价3种品牌各10台POCT血糖仪的正确度和精密度。方法采集血糖浓度分布于2.8~22.2 mmol/L的5份静脉血,平均分成2份,一份用AU680全自动生化仪平行检测2次,取其均值作为靶值,另一份用POCT血糖仪重复检测10次,取其均值与靶值比对,评价其正确度。选取低值约4.5 mmol/L的L样品、高值约10.0 mmol/L的H样品,用POCT血糖仪重复测定20次,评价其精密度。结果 A品牌血糖仪检测L样品的标准差(s)为0.20~0.49 mmol/L,变异系数(CV)为3.41%~8.48%,精密度合格比为9/10;检测H样品的s为0.35~0.59 mmol/L,CV为3.35%~5.30%,精密度10台均合格;与靶值比对,1台合格率为80%,另9台合格率为20%~40%,正确度合格比为1/10。B品牌血糖仪检测L样品的s为0.36~0.54 mmol/L,CV为9.23%~13.74%,精密度合格比为2/10;检测H样品的s为0.19~0.46 mmol/L,CV为1.90%~4.64%,10台均合格;与靶值比对,2台合格率为80%,另8台合格率为100%,10台的正确度均合格。C品牌血糖仪检测L样品的s为0.17~0.42 mmol/L,CV为3.66%~9.12%,10台均合格;检测H样品的s为0.24~0.34 mmol/L,CV为2.53%~3.82%,精密度10台均合格;与靶值比对,10台的合格率均为100%,正确度均合格。结论 A品牌血糖仪的正确度、B品牌血糖仪的精密度在此次比对中未通过,不能投入医疗机构使用。C品牌血糖仪的精密度和正确度性能均优秀。临床科室在选择血糖仪时,需考虑其所采用的检测方法。     

172株奇异变形杆菌和68株普通变形杆菌临床分布及其耐药性

目的对某院临床分离的奇异变形杆菌和普通变形杆菌进行分析,检测常用抗菌药物对其的体外活性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对该院2011年1月1日-2013年6月30日临床分离的172株奇异变形杆菌和68株普通变形杆菌进行分析,采用纸片扩散法进行药敏试验;WHONET 5.4软件进行数据分析。结果奇异变形杆菌标本主要来源为创面分泌物（26.74%）、痰液（22.68%）和尿液（18.61%）;普通变形杆菌主要来源为创面分泌物（48.53%）、尿液（17.65%）和痰液（11.77%）。奇异变形杆菌对氨苄西林、复方磺胺甲口恶唑耐药率均＞45.00%;普通变形杆菌对头孢唑林、复方磺胺甲口恶唑耐药率高,分别为86.76%、41.18%;奇异变形杆菌和普通变形杆菌对哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、碳青霉烯类（厄他培南、美罗培南）、阿米卡星的耐药率均＜20.00%。结论奇异变形杆菌和普通变形杆菌对于哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、厄他培南、美罗培南、阿米卡星敏感率高,上述抗菌药物可作为临床治疗相关感染的经验用药。     

鲍曼不动杆菌PER型超广谱β 内酰胺酶耐药基因研究

目的探讨某院产PER型超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）鲍曼不动杆菌分子流行病学特点及耐药机制。方法选取该院2009年1-5月临床分离的非重复鲍曼不动杆菌129株,采用K B纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）扩增PER基因并测序,肠杆菌科基因间重复一致序列（ERIC） PCR进行同源性分析。结果78株鲍曼不动杆菌携带PER 1型基因,阳性率60.47%（78/129）。PER 1阳性鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为46.15%、44.87%、38.46%、10.26%和8.97%,对其余10种抗菌药物的耐药率均＞60%;PER 1阳性菌株对头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率明显高于PER 1阴性菌株（均P＜0.05）。78株PER 1阳性菌株包括7型,分别为A型（1株）、B型（1株）、C型（55株）、D型（18株）、E型（1株）、F型（1株）、G型（1株）,C和D型为主要克隆型。结论C和D型PER 1阳性鲍曼不动杆菌为该院最主要的流行株。产PER 1型ESBLs鲍曼不动杆菌呈多重耐药,米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦可作为该院鲍曼不动杆菌感染治疗的最佳选药。     

实时荧光定量PCR对艰难梭菌感染诊断价值的meta分析

目的系统评价实时荧光定量PCR(real-time PCR)对艰难梭菌感染的诊断价值。方法制定原始文献的纳入、排除标准及检索策略,检索有关real-time PCR诊断粪便中艰难梭菌感染且同时采用细胞培养毒素中和试验(CCCNA)或厌氧产毒培养(TC)作为诊断金标准的文献,采用诊断准确性研究的质量评价工具QUADAS进行质量评价,并用Meta DiSc 1.4软件进行meta分析。结果纳入研究文献共42篇,异质性检验提示无阈值效应,但存在其他原因导致的非阈值性异质性。real-time PCR诊断粪便艰难梭菌感染的合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比及诊断优势比(95%CI)分别为0.925(0.913,0.936)、0.965(0.962,0.969)、28.385(23.394,34.441)、0.093(0.076,0.115)和378.15(282.17,506.77)。ROC曲线下面积(AUCSROC)和Q*指数分别为0.987 8和0.953 2,漏斗图显示无发表偏倚,meta回归结果显示各个影响因素中以发表年份和样本含量为主要异质性来源,对发表年份和样本含量进行亚组分析,发现2010年之后的诊断效能大于2010年之前,样本量大于200的诊断效能大于样本量小于200者。结论通过对real-time PCR对艰难梭菌感染的诊断价值进行meta分析,发现realtime PCR具有较高的敏感性、特异性、阳性似然比及阴性似然比。因其快速准确,可广泛应用于临床。     

2011年湘雅医院临床分离病原菌分布及耐药性分析

目的了解2011年中南大学湘雅医院临床常见分离菌的分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用全自动微生物鉴定系统Vitek-2对临床分离病原菌进行鉴定及药敏试验,用WHONET5.4软件对实验结果进行分析。结果 2011年湘雅医院共分离菌株7 272株,其中革兰阳性菌2 85株,占28.67%;革兰阴性菌4 109株,占56.51%;真菌1 078株,占14.82%。葡萄菌属中耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRSCN)的检出率分别为51.37%和68.16%,未检出对万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺耐药株;屎肠球菌和粪肠球菌对万古霉素的耐药率分别均为3.91%和3.83%;大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率分别为78.30%和63.10%,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物仍高度敏感(耐药率<6.00%),首次监测到泛耐药肠杆菌科细菌;与2010年相比,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中泛耐药株数显著增加。结论临床分离病原菌以革兰阴性杆菌为主;分离菌株耐药性十分严重;泛耐药肠杆菌科细菌的出现及泛耐药非发酵革兰阴性杆菌的增加,应引起临床高度重视,并及时采取防控措施。