RNA干扰Survivin基因对Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响

目的:研究RNA干涉Survivin基因表达对人宫颈癌Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:将Sur-vivin SiRNA片段通过脂质体的介导转染宫颈癌Hela细胞系;RT-PCR检测Hela细胞中Survivin mRNA的表达,Western Blot检测Survivin蛋白表达;确定转染成功使干扰组细胞Survivin表达下调后,以流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;细胞计数后绘制生长曲线观察细胞增殖能力变化;MTT法检测细胞对抗肿瘤药物的敏感性变化.结果:与对照组相比,两个Survivin基因干扰组的mRNA和蛋白表达抑制率分别为55%,60%和42%,55%,表达均下降(P<0.05);细胞凋亡率分别为19%和22%,较对照组高(P<0.05);生长曲线显示干扰组的细胞增殖能力下降;同一剂量药物作用下,各组细胞对抗肿瘤药物的敏感性均有提高,其中NVB组和PDD组有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin SiRNA片段转染进入Hela细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达水平均下降,Hela细胞的凋亡率增加,对抗肿瘤药物的敏感性增加.     

保留主动脉瓣根部手术治疗马方综合征的近期疗效CSCD

目的 评价保留主动脉瓣根部手术治疗马方综合征的近期疗效.方法 54例患者,男38例,女16例;年龄20～50岁,平均（31.26±7.80）岁.术前均根据1996年制定的Ghent标准确诊为马方综合征.术前超声心动图示主动脉瓣反流微量5例,少量12例,中量22例,大量15例.根据影像学资料及术中探查,决定是否保留主动脉瓣,其中行Bentall＋二尖瓣成形（MVP）手术2例,Bentall＋二尖瓣置换（MVR）手术4例,Bentall＋全弓＋象鼻手术2例,Bentall手术27例,David＋MVP手术6例,David手术13例.根据术式分为Bentall手术组35例和David手术组19例.随访12～48个月,比较两组手术前、后和不同方案的疗效差异.结果 手术死亡2例,Bentall手术组1例死于术后无法控制的大出血,,David手术组1例死于术后肺部感染、多脏器功能衰竭.52例恢复良好,术后心包及纵隔引流310～820 ml;住院11～29天,平均（16.43±4.38）天.Bentall手术组体外循环（141.09±15.48）min,主动脉阻断（93.82±15.06）min.David手术组体外循环（186.32±23.96）min,主动脉阻断（140.21±22.13）min.术后两种术式的射血分数、左心室径、左心室收缩期末容量、左心室舒张末期容量、短轴缩短率改善与术前相比差异有统计学意义（P〈0.05）,但组间差异无统计学意义（P〉0.05）,术后早期并发症发生比例组间差异无统计学意义,晚期并发症Bentall手术组明显高于David手术组.术后David手术组主动脉瓣反流程度较术前明显减轻（1.37±0.95对2.53±0.84,P〈0.05）.随访期间David手术组1例主动脉瓣重度关闭不全行主动脉瓣置换术;Bentall手术组1例再发腹主动脉夹层手术治疗,6例因华法林抗凝出现出血、栓塞并发症.结论 保留主动脉瓣的根部处理治疗马方综合征的近期疗效满意.     

基因表达的系统分析在基因组转录谱研究中的应用

基因表达的系统分析技术 (SAGE)是一种全面分析基因表达模式的实验方法。该方法的原理是基于分离出每一m RNA所特有的长 9bp～ 14 bp的标签并将其串联起来进行克隆和测序。该方法不仅可以给出我们一个全面的特定细胞或组织的基因表达谱 ,而且还可以通过对两组处于不同环境中的同一类型细胞的基因表达谱进行比较 ,帮助我们发现那些由于环境的变化而表达发生改变的基因。本文拟就这一高通量方法的原理、应用、不足及其改进等方面的研究情况作以综述     

先天性长QT综合征相关HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建及表达

目的在收集的一个先天性长QT综合征（congenital long QT syndrome，LQTS）家系中发现HERG基因A561V突变，探讨HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建方法，并观察其在真核细胞中的表达。方法采用克隆载体快速PCR法构建HERG基因A561V突变体PGEM-HERG-A561V，并应用限制性内切酶法将突变体构建到真核表达载体pcDNA3中，用Superfect转染试剂将野生型pcDNA3-HERG及pcDNA3-HERG-A561V突变体与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染至HEK293细胞，用细胞免疫荧光化学法检测蛋白质表达。结果构建的突变体经DNA直接测序示HERG基因cDNA1682位点碱基C变为T，构建的突变体在HEK293细胞中成功表达，其蛋白质位于细胞浆中及细胞膜上，而野生型基因的蛋白质位于细胞膜上。结论用克隆载体快速PCR法构建并表达了HERG基因A561V突变，为突变基因的进一步功能研究奠定了基础。     

针灸治疗慢性荨麻疹的文献计量学分析与评价

目的对近10年国内外针灸治疗慢性荨麻疹的临床文献进行特征分析,了解该领域研究现状以及发展水平,为临床和科研提供参考。方法采用文献计量学方法,回顾分析国内外2007年1月至2018年6月针灸治疗慢性荨麻疹的相关临床文献,并对上述文献进行定量分析。结果最终共纳入文献245篇,分别发表在94种期刊上;自血疗法、常规针刺、罐法、穴位埋线为常用刺灸方法;两种及其以上治疗方式联合的综合疗法为常用治法;曲池、足三里、血海、膈俞、三阴交为常用腧穴。结论针灸治疗本病临床研究方法学水平偏低,研究设计不严谨,需提供更多高质量的证据予以支持,且需进一步优化治疗方案,改变目前治疗方法繁杂的现状。     

医学研究生遗传学实验改革实践

遗传学实验是医学研究生专业教育的重要组成部分。本次实验改革方案是在原有遗传学实验的基础上,遵循基础性、实用性、前沿性、创新性的一套综合性实验内容,让研究生在学习新技术的过程中,培养系统性的科学思维方式。     

慢病毒介导的融合基因SP-TAT-Apoptin对HepG2细胞的作用

目的:将已构建的SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体包装成感染性慢病毒颗粒,并用病毒颗粒感染肝癌HepG2细胞,测定其诱导凋亡的效率。方法:通过脂质体Li-pofectamine TM2000将SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体与其他包装质粒共同转导入293FT细胞,包装并收集感染性病毒颗粒,用实时定量PCR法测定病毒滴度,免疫荧光法检测重组慢病毒感染的293FT细胞中SP-TAT-Apoptin融合基因的表达,同时通过流式细胞术(FCM)测定慢病毒感染后HepG2细胞的凋亡率。结果:SP-TAT-Apoptin重组慢病毒感染293FT细胞后,用V5抗原单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光化学检测,示SP-TAT-Apoptin融合基因可成功表达于293FT细胞;通过Anexin-VPI法检测示SP-TAT-Apoptin融合基因慢病毒感染肝癌HepG2细胞后可引起细胞凋亡,其凋亡效率明显高于单纯脂质体转染组。结论:成功包装出可表达SP-TAT-Apoptin融合基因且具感染性的慢病毒颗粒,感染HepG2肝癌细胞后可引起其凋亡,为进一步研究融合基因SP-TAT-Apoptin体内治疗效果极其在临床中的应用奠定了基础。     

国际人类基因组单体型图计划

国际人类基因组单体型图计划(theinternationalHapMapproject)是一项旨在构建人类DNA序列中多态位点的常见模式图,即单体型图(简称HapMap),并免费向公众开放全部数据的国际性合作研究计划。HapMap的预期成果将成为研究人员确定对人类健康和疾病以及对药物和环境的反应有影响的相关序列变异的关键信息,并有助于加速相关诊断工具的发展,有效增强科学家对介入治疗的靶点进行选择的能力。     

门静脉高压症脾功能亢进脾巨噬细胞Toll样受体2、4 mRNA表达变化的研究

目的 检测门静脉高压症(PH)脾亢脾和正常脾巨噬细胞(Mφ)中Toll样受体2、4(TLR2、4) mRNA的表达差异,为进一步深入探讨Toll样受体在PH脾亢发生中的作用奠定基础.方法 选取门静脉高压症脾亢患者(均为慢性乙型肝炎患者)的手术切除脾脏(12例)为实验组,外伤性脾破裂患者的手术切除脾脏(4例)为正常对照组.贴壁培养法分离纯化脾脏组织Mφ,荧光定量PCR法对Mφ表面Toll样受体2、4 mRNA的表达进行检测,并将两组结果进行统计学分析比较.结果 与正常脾脏相比,PH脾亢脾Mφ TLR2、4 mRNA的表达水平明显增强(TLR2:2.29±0.55 vs 1.06±0.53,P <0.05;TLR4:2.32±0.41 vs 1.01±0.14,P <0.01).结论 PH脾亢脾Mφ TLR2、4的mRNA表达水平明显升高,与蛋白水平免疫组化的结果一致,进一步支持了"内毒素血症→脾脏Mφ Toll样受体活化→Mφ吞噬破坏血细胞增多"是PH脾亢发生可能机制的观点.