碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因研究

目的 探讨碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌β-内酰胺类耐药基因携带情况.方法 收集242株临床分离的粘质沙雷菌,采用Vitek-2 Compact全自动微生物系统对其鉴定并进行药敏试验,筛选出对亚胺培南耐药18株、中介1株;再用K-B法检测19株细菌对厄他培南和美罗培南的药物敏感性,确认均为耐药;采用改良Hodge试验及EDTA协同试验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因blakpc、blanmc、blaimp、blagim、blavim、blaoxa-23及超广谱β-内酰胺酶基因blaveb、blaper、blatem、blashv、blactx-m-1、blactx-m-2、blactx-m-9,阳性结果进行DNA测序,BLAST比对确定基因型.结果 药敏结果显示,19株细菌对美罗培南、厄他培南、氨曲南、环丙沙星、头孢唑林、头孢曲松、头孢噻肟全部耐药,对亚胺培南18株耐药、1株中介;对阿米卡星全部敏感;对庆大霉素敏感率为57.9%;妥布霉素敏感率不到30%;对头孢替坦、头孢他啶、头孢吡肟敏感率均不足20%;左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦敏感率均不足10%;改良Hodge试验阳性18株,阴性1株;EDTA协同试验全部阴性;PCR扩增和DNA测序显示,7株含blakpc-2、6株含blactx-m-14、3株含blashv-11、2株含blashv-12、1株含blaoxa-23基因;19株细菌均未检出blanmc、blaimp、blagim、blavim碳青霉烯酶基因及blaveb、blaper、blatem、blactx-m-1、blactx-m-2超广谱β-内酰胺酶基因.结论 分离的碳青霉烯类耐药粘质沙雷菌,耐药现象较为严重,主要携带blakpc-2型、blactx-m-14型耐药基因.     

呼吸道合胞病毒诱导一氧化氮产生的机制

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时一氧化氮(NO)的水平变化及其产生的调控机制,为临床治疗RSV疾病提供有益的思路。方法以RSV感染人肺上皮细胞A549细胞,并设立不同的感染时间(4h、8h、16h和24h),同时分别给予PDTC(核转录因子NF-κB的特异性抑制剂)或AG(诱导型一氧化氮合酶i NOS的特异性抑制剂)处理。收集各组细胞和细胞培养上清,用Western blot法检测细胞核内活性NF-κBp65蛋白的表达,半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测i NOS mR-NA和蛋白表达,硝酸还原酶法检测细胞培养上清中NO含量。结果RSV感染4h后,核内活性NF-κBp65蛋白、i NOS mR-NA和蛋白、细胞培养上清中NO含量均升高,各指标的变化与正常对照相比,差异均有显著性,并且与RSV感染存在时间依赖关系。加入PDTC后可明显抑制NF-κB活化,同时下调i NOS mRNA和蛋白表达。加入AG后,则明显降低细胞培养上清中NO含量。结论RSV感染可诱导产生大量的NO,其主要受i NOS的调节。NF-κB活化对i NOS基因表达具有重要的正调控作用。提示RSV诱导NO生成可能通过活化NF-κB所致。     

呼吸道合胞病毒诱导前列腺素E2分泌的相关研究进展

呼吸道合胞病毒(RsV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的重要病原体。体内外研究显示,RSV Hr诱导人肺上皮细胞、人脐带血巨噬细胞和树突状细胞分泌前列腺素E2(PGE2);RSV感染小牛、棉鼠和婴幼儿的血清和气道灌洗液中均发现有高水平的PGE2。RSV可能诱导组织中胞质犁磷脂酶A2(cPIA2)发生磷酸化而被激活,激活的cPLA2催化膜磷脂使其释放大量花生明烯酸。在RSV急性感染时,可诱导环加氧酶2(CoX一2)mRNA和蛋白的高水平表达,进而催化花生四烯酸发牛氧化反应,释放大量PGE2。在炎症反应中PGE2可发挥免疫抑制作用,防止过强的细胞免疫;体内高水平的PGE2与RSV复制有着密切关系。对cPLA2或／和Cox一2进行选择性抑制时,可能有利于减轻RSV感染的炎症症状和及时清除病毒。     

呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)合并肺炎克雷伯菌( Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系. 方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数( LI )的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和白细胞介素-1β( IL-1β)含量的变化.结果 与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重, LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB 蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组 LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧. 结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过 TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等.     

皖南地区丙型肝炎病毒基因型研究

目的 探讨安徽南方地区慢性丙型肝炎患者血清ALT水平、HCV RNA定量检测和HCV基因分型的相关性.方法 用速率法和荧光定量PCR法,检测141例安徽南方地区慢性丙型肝炎患者血清ALT水平和HCVRNA定量结果,应用RT-PCR和型特异性引物法对其中50例标本进行基因分型.结果 141例患者的血清ALT与HCV RNA两指标间的相关性采用Spearman等级相关分析显示,rs=0.213,P=0.011<0.05,差异有统计学意义,存在正相关;在50例标本中,HCV基因分型Ⅰ型有45例(95.7%),Ⅱ型2例(4.3%),未分型3例.结论 安徽南方地区丙型肝炎病毒感染以Ⅰ型为主;ALT、HCV RNA和基因型是可靠且重要的治疗反应指标.     

丙肝患者与合并HIV感染者的免疫功能分析

目的：探讨丙型肝芡合并艾滋病病毒（HIV）感染者与丙型肝炎病毒（HCV）单独感染人群的免疫功能差异,分析其可能的机制。方法：以28例丙型肝炎合并HIV感染者和30例单纯HCV感染者为研究对象,采用第三代ELISA夹心法检测抗HCV抗体,荧光定量PCR法定量检测HCVRNA,流式细胞仪计数外周血CD4^＋、CD8^＋细胞,生化分析仪检测肝功能。结果：28例合并感染者中有9例抗HCV抗体阴性。合并感染者HCVRNA病毒载量显著高于单纯HCV感染者,CD4^＋细胞计数显著低于单纯HCV感染者,ALT（54．1U／i。：33．5U／L,P=0．000）、AST（55．2U/L：35．5U/L,P=0．018）均明显高于单独感染组。结论：检测HCVRNA及相关免疫功能对于丙型肝炎合并HIV感染者的治疗、减缓肝病的进展等具有十分重要的意义。     

柴芩感冒药对甲型流感病毒与腺病毒的体外抑制作用

目的研究柴芩感冒药对甲型流感病毒(68-1,H3N2)与腺病毒(AdV7)的体外抑制作用.方法用微量细胞病变抑制法.按Ree d-Muench法计算50%病变抑制的药物浓度(IC50),实验重复3次,并计算治疗指数(TI). 结果柴芩感冒药对甲型流感病毒(68-1,H3N2)和AdV7的I C50分别是(40.5±3.53)、(33.11±3.22) mg/L.TI值分别是 21和26.5;对照西药利巴韦林注射液对甲型流感病毒(68-1,H3N2)和AdV7的IC 50分别是(26.7±1.48) mg/L和(18.17±0.35) mg/L.TI值分别是79和120;对照中药金莲清热颗粒对流感病毒(68-1,H3N2)IC50为35.4.TI值为18;对腺病毒 AdV7的IC50未测到(无效). 结论柴芩感冒药既可抗甲型流感病毒(68-1,H3N2),又可抗腺病毒(AdV7).     

供受者感染乙肝病毒对造血干细胞移植后肝炎复发及愈后的影响

目的分析移植前供、受者感染乙肝病毒对造血干细胞移植后肝炎复发及愈后的影响。方法对上海第一人民医院2006年1～11月移植前供、受者感染乙肝病毒的23例恶性血液病患者,进行移植前后肝功能、乙肝免疫标记物、HBVDNA等检测,并结合临床综合分析。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、γ谷氨酰转肽酶（GGT）采用速率法,血清总胆红素（TBIL）采用终点比色法检测;乙肝病毒血清标志物采用酶免疫测定（EIA）;HBVDNA测定采用聚合酶链反应（PCR）试剂盒。结果①9例HBV感染的自体移植患者移植后3例发生乙型肝炎,其中2例为移植前HBsAg阳性,乙肝发作时3例HBVDNA及肝功能指标均明显增高;②14例HBV感染的供、受者移植后5例患者发生乙型肝炎,HBVDNA及肝功能指标均明显增高;③移植前HBsAg或HBVDNA阳性移植后发生乙肝相关性肝损的几率显著高于阴性组（X^2分别为8.44、9.07,均大于X0.005^2,P〈0.005）;④移植前HBsAg或HBVDNA阳性对移植预后均无影响（X^2分别为2.58、0.24,均小于X0.05^2,P〉0.05）;⑤1例患者异体移植后41d,乙肝合并戊肝,发生急性黄疸性肝炎,第46天重症GVHD死亡。结论移植前HBsAg和HBVDNA阳性均是HBV感染和再激活的高危因素,移植要密切监测免疫标志物和HBVDNA。移植前HBsAg和HBVDNA阳性不影响患者的生存,要注意非常见肝炎的多重感染。     

重组痘苗加强免疫可增加表达HPV-16 E7 DNA疫苗的特异性T细胞前体数

作者把溶酶体相关膜蛋白 1 ( L AMP- 1 )分选信号连接到 1 6型人乳头状瘤病毒的致癌蛋白 E7( HPV- 1 6 E7)抗原上 ,构建了嵌合体 Sig/E7/L AMP- 1 ,发现含此嵌合体的重组痘苗病毒 ( Vac- Sig/E7/LAMP- 1 ,V)和Sig/E7/L AMP- 1 DNA( D)均能诱生强烈的抗肿瘤免疫。为了确定这两种嵌合体的联合能否进一步增强免疫应答 ,作者将雌性C5 7BL/6小鼠分成 7组 ,每组为 5只 ,分别腹腔内接种 1× 1 0 7PFU V和 /或用基因枪皮内接种 2 μg D,接种程序分别为 :0和 7天接种两剂 D( D+ D)、1剂 D和 1剂 V( D+ V)、1剂 V和 1剂 D( V+ D)…     

编码RSV G蛋白的质粒DNA可抵抗RSV诱导的气道高反应性

编码呼吸道合胞病毒 ( RSV)全长 G蛋白的 DNA- G疫苗并不能完全防御 RSV感染 ,作者切去 G质粒 DNA 5′端编码 56个氨基酸的跨膜区序列 ,构建了编码 2 4 8个氨基酸的质粒载体 RSV G蛋白 DNA,简称 p ND-G。用质粒 Mega试剂盒纯化后 ,免疫 6周龄BALB/c雌鼠 ,分四组 ,每组 8～ 1 6只 ,尾根部皮内注射。试验组每只 p ND- G50 μg,2和4周后再用同剂量的 p ND- G加强免疫。三个对照组为未免疫鼠、p ND载体骨架、福马林灭活的 RSV( FI- RSV,1 0 7PFU)。同上免疫后4周 ,各组均用 1 0 6PFU A2亚型 RSV鼻内攻击 ,攻击后 4天杀死…