脂肪源性干细胞成骨分化过程中成骨相关miRNA的表达模式

背景：miRNA在细胞分化等众多生理病理过程中起重要调控作用,可调节脂肪来源干细胞成骨分化。目的：筛选成骨分化相关miRNA,分析miRNA在脂肪来源干细胞成骨分化过程中的表达模式。方法：从皮下脂肪组织中分离、培养人脂肪来源干细胞。应用基因芯片技术筛选脂肪来源干细胞成骨诱导前后表达差异显著的miRNA,采用RT-PCR技术检测所筛选的miRNA在成骨诱导第7,14,21天上调/下调的相对表达强度,以ELISA试剂盒检测相应时间点成骨相关蛋白的表达情况。结果与结论：①倒置显微镜下观察,传3代后可获得均一性较高的脂肪来源干细胞,一定诱导条件下具有成骨、成脂、成软骨分化能力。②基因芯片技术筛选出成骨分化前后表达差异变化明显的9个miRNA,其中5个上调,4个下调。③成骨诱导第7天,miR-106a表达上调1.58倍（P〈0.05）。第14天时,9个miRNA均表达上调。第21天时,5个miRNA表达上调,4个表达下调。④成骨相关蛋白骨钙素、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨唾液酸蛋白的质量浓度在诱导成骨分化第7天即明显升高,第14天达到峰值,第21天略有下降。     

α干扰素增强骨肉瘤U2OS细胞对足叶乙甙的敏感性

目的探讨α干扰素对人骨肉瘤U20S细胞足叶乙甙敏感性的作用及其机制，为提高骨肉瘤化疗的敏感性探索新的治疗方法。方法应用MTT法测定IFNα和VPl6单用以及联用对U20S细胞的细胞毒作用；Hoeehst33258荧光染色检测药物对U20S细胞凋亡的影响；Westernblot法检测Caspase-3、8、9的表达和活化。结果IFNα在50U／ml、500U／ml、5000U／ml等剂量处理48h、72h、96h对U20S细胞无毒性作用，却明显增强了VPl6（2．5μg／m1）诱导的细胞毒作用；与单药组相比，IFNα（5000U／m1）与VPl6（2．5μg／m1）联用72h后U20S细胞出现更为明显的凋亡特征性形态变化；并且联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、8、9均发生明显断裂活化。结论IFNα能够增强VP16诱导的骨肉瘤U20S细胞毒作用和凋亡，且与Caspase级联活化有关，二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。