钙离子对重组创伤弧菌溶细胞素诱导THP-1细胞损伤的影响机制

目的 研究重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)诱导人单核细胞白血病细胞(THP-1)的凋亡机制及其Ca2+的变化.方法 采用CCK-8法、激光共聚焦显微镜结合Fluo 3/AM法、流式细胞术结合AnnexinV -PI标记等检测rVvhA对THP-1细胞的影响,并观察胞内Ca2+浓度变化.结 果rVvhA可诱导THP-1细胞发生凋亡并引起细胞内Ca2+浓度升高,细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM处理组胞内钙离子升高幅度远高于细胞外钙离子螯合剂EGTA处理组.结论 rVvhA具有诱导THP-1细胞凋亡的生物学活性,并能引起细胞内Ca2+浓度升高,升高的Ca2+主要源于胞外钙离子内流.     

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对人Caco-2细胞IL-8基因表达和IL-8分泌的影响

目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人肠上皮细胞(human intestinalepithelial cell,Caco-2)IL-8基因表达的影响.方法 IPTG诱导、表达、纯化、复性及Western blot鉴定rVvhA表达和纯化情况;CCK-8法检测rVvhA对Caco-2的细胞毒性作用;RT-PCR检测rVvhA诱导Caco-2细胞IL-8基因的表达情况;ELISA检测Caco-2细胞培养上清IL-8的分泌情况.结果 Ni~(2+)-NTA亲和层析柱对rVvhA进行纯化后纯度可达95%以上;CCK-8结果显示rVvhA活性蛋白显著降低了Caco-2细胞的存活率,有效浓度为1.5 HU/ml(P<0.05);RT-PCR结果显示,0.6 HU/ml rVvhA30 minllp可诱导Caco-2细胞IL-8 mRNA基因表达上调;ELISA结果显示,Caco-2细胞经rVvhA作用后,培养液上清中IL-8多肽的表达时相在4 h.RT-PCR与ELISA结果皆显示,IL-8基因的转录及IL-8表达皆具有时间-剂量依赖性.结论 rVvhA在转录水平上能诱导人Caco-2细胞IL-8 mRNA表达,促进IL-8的合成,在创伤弧菌引起的过度炎症反应和败血症的发生、发展中可能具有重要意义.     

血小板活化在儿童呼吸道感染发病中的意义

目的 :探讨血小板活化在儿童呼吸道感染发病中的作用。方法 :利用放射免疫法及双抗体夹心免疫放射法分别测定 5 3例呼吸道感染 (包括 3 1例病毒感染和 2 2例细菌感染 )者、3 2例正常对照者全血中血小板 (PLT)数量及血浆中血栓烷B2 (TXB2 )和α 颗粒膜蛋白 (GMP 14 0 )的表达情况。结果 :两病患组全血PLT数量、血浆GMP 14 0 、TXB2 浓度与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;两病患组之间 ,PLT数量、血浆GMP 14 0 浓度差异具显著性 (P <0 .0 5 ) ;而血浆TXB2 浓度差异无显著性 ;呼吸道感染合并发热者与不伴有发热者差异具显著性 (P <0 .0 5 )。所有实验对象血浆GMP 14 0 浓度与PLT数量相关 (r=0 .697、P <0 .0 1) ,血浆TXB2 浓度与PLT数量相关性也具统计学意义 (r=0 .486、P <0 .0 1)。结论 :儿童呼吸道感染时存在血小板的异常活化 ,其活化程度与全血中PLT数量有一定的相关性。血小板可能通过其活化产物参与并且影响儿童呼吸道感染发病     

RPA-LFD技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性的应用

目的 基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术结合侧向流动试纸条(LFD),建立可快速检测结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药的方法,并初步评价其临床应用价值。方法 采用比例法对182株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测。建立RPA-LFD技术,检测182株菌株中利福平耐药决定区(RRDR)常见突变位点rpoB 531、526和516的突变情况,同时使用PCR测序进行验证。用SPSS 24.0分析,以比例法为金标准,评价RPA-LFD对利福平耐药的检测效率。结果 以比例法药敏结果为金标准,RPA-LFD检测利福平耐药的灵敏度为84.2%,特异度为100.0%,Kappa检验显示Kappa值为0.880,两种方法检测结果具有高度一致性。同样以比例法为金标准,以DNA测序结果判断利福平耐药性的灵敏度为91.2%,特异度为100.0%,Kappa值为0.935。结论 RPA-LFD技术用于结核分枝杆菌利福平耐药性的检测具有好的灵敏度、很高的特异度,且检测时间短,具有一定的临床应用价值。     

规范病原学诊断路径促进感染性眼病精准医疗

感染性眼病是临床常见的眼部疾病,尤其是在发展中国家,其发病率较高。在我国,由角膜感染引起的角膜盲发病率仅次于白内障。因感染原因和部位的不同,其临床表现和预后也不一。轻微的眼部感染仅引起眼部不适症状,如眼红、眼痒和异物感等,而严重感染会引起角膜溃疡、化脓、穿孔以及眼内炎等,从而影响患者视力,严重者甚至有失明和眼球摘除的风险。因此,对眼部感染性疾病进行规范化诊治尤为重要。临床上需要临床医师和检验医师运用各种检查方法和检测技术对眼部感染性疾病进行快速的病原学诊断,同时结合特征性的临床体征,才能实现对疾病的精准治疗。然而,由于眼部组织结构的特殊性,综合医院检验科技术人员对眼部标本特点不熟悉,眼科医师缺少实验室基本技能的培训等原因,导致感染性眼病的病原学诊断成为难点,尤其是眼部样本的采集和预处理成为最大的困扰。随着各种眼部特殊检查设备以及实验室新技术的引入,加快了病原学诊断的发展步伐,从而更好地为感染性眼病的诊疗提供客观依据。     

微生物数据库标准化在细菌耐药监测网中的应用

WHONET5软件是WHO开发并推荐的用于管理细菌实验结果和数据分析的软件,通过WHONET数据库交换,能促进不同医院或不同地区间细菌耐药性监测工作的协作.目前WHONET的数据录入方法分为两种,一种是将实验室信息系统(LIS)中的细菌实验结果手工录入到WHONET5软件中,此方法优点是在数据录入时,WHONET5会采用已设定的规则对录入的数据进行校验,能及时发现一些罕见耐药表型和检测错误的数据,但人工输入有工作量大并容易造成输入错误的缺点.另一种是数据直接导入,将LIS中的细菌信息直接导入至WHONET数据库中或者通过WHONET附带的BacLink软件将从LIS中导出的细菌信息数据文件转换成WHONET数据库文件.     

钩端螺旋体vwA1和vwA2基因原核表达产物功能的初步研究

目的 构建致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株vwA1和vwA2基因原核表达系统,初步了解目的重组表达产物rVwA1和rVwA2与血小板性出血相关性.方法 采用高保真PCR扩增问号钩体赖株vwA1和vwA2基因并测序,常规方法构建vwA1和vwA2基因原核表达系统.采用SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检查rVwA1和rVwA2表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析柱提纯rVwA1和rVwA2.采用实时荧光定量RT-PCR检测问号钩体赖株感染人脐静脉内皮细胞株HUVEC前后vwAl-mRNA和vwA2-mRNA水平变化.采用流式细胞术检测rVwA1与人血小板膜糖蛋白结合能力.采用酶切试验及SDS-PAGE观察人血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13水解rVwA2的情况.结果 所克隆的钩体vwA1和vwA2基因与报道的相应基因比较,其核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％.所构建的vwA1和vwA2基因原核表达系统能分别表达可溶性rVwA1和rVwA2.问号钩体赖株感染HUVEC 8 h后,钩体vwAl-mRNA和vwA2-mRNA水平均显著上调(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,钩体rVwA1与人血小板结合率为60.8％.人ADAMTS13可水解重组人vWF-A2( rhvWF-A2),但不能水解钩体rVwA2.结论 vwA1和vwA2基因可能在钩体感染中发挥作用,其中vwA1基因产物功能与钩体病出血密切相关.     

基于高通量测序分析入境羊毛微生物群落结构特征

目的 通过高通量测序的方法了解来自5个国家5批入境羊毛表面携带的致病菌和微生物群落结构特征,为国境卫生以及传染病预防提供有效的数据支撑。方法 通过浸泡搅拌震荡的方法收集5批羊毛样本表面的总细菌并提取DNA,采用Illumina Miseq高通量测序的方法,主要分析比较5批羊毛样本的α-多样性指数、微生物群落结构以及致病菌。结果 α-多样性指数的结果表明5批羊毛表面微生物群落结构的多样性具有明显差异,其中德国样本的多样性最高,法国样本的多样性最低,美国、阿根廷、比利时则介于之间。主成分分析结果表明德国和比利时样本的微生物组成相似度较高且与其他3个国家之间的微生物群落结构组成有明显差异。微生物群落结构的16S绝对定量结果表明在微生物总量绝对丰度层面美国>阿根廷>德国>比利时>法国,阿根廷、德国、比利时3个国家的羊毛表面微生物以变形菌门(Proteobacteria)为主,厚壁菌门(Firmicutes)其次,而美国、法国以厚壁菌门(Firmicutes)为主,变形菌门(Proteobacteria)其次。在种属水平上,5批羊毛样本均检测出鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)、肠沙门菌(Salmonella enterica)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)等临床常见的条件致病菌,其中美国样本中肠沙门菌的丰度最高,比利时样本的肠沙门菌的丰度最低。结论 根据测序的结果得出羊毛表面病原体含量较多且疫情复杂,检测出了肠沙门菌等危害性较大的致病菌,相关部门以及一线从业人员应注意做好生物防护。