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目的 探讨新生儿化脓性脑膜炎(以下简称化脑)新的快速诊断方法.方法 2003年8至2006年2月浙江大学医学院附属儿童医院采用脑脊液细菌16S rRNA基因芯片技术对24例临床上疑似化脑患儿脑脊液(CSF)的细菌DNA进行测定,同期进行与CSF细菌培养的对照.结果 (1)49株细菌PCR扩增产物基因芯片杂交结果显示,33株C+菌其G+探针和通用探针均阳性,G-探针阴性;16株G-菌中,G-探针和通用探针均阳性,G+探针阴性,均能与相应特异的探针发生杂交.(2)大肠埃希菌DNA的PCR产物其16S rRNA基因芯片的最小检出量为1pg,约等于10个拷贝教,相当于2个细菌.(3)16S rRNA基因芯片检测24份脑脊液标本发现11份阳性,阳性率为45.83%(11/24),明显高于脑脊液培养的阳性率12.50%(3/24),差异有统计学意义(P<0.01).结论 脑脊液细菌16S rRNA基因芯片检测技术特异性强、敏感性高,需标本量少,是早期快速诊断儿童化脑的可靠方法,具有较大的应用价值.     

荧光定量与芯片杂交快速诊断患儿化脓性脑膜炎

临床确诊化脓性脑膜炎（化脓）主要依赖脑脊液细菌培养，但其耗时较长，阳性率低，难以适应临床早期诊断。为此，我们对疑似化脑患儿行脑脊液细菌DNA荧光定量及芯片杂交检测，并进行脑脊液细菌培养对照，效果较好。     

脑脊液细菌16S rRNA荧光定量聚合酶链反应快速诊断儿童化脓性脑膜炎

临床确诊化脓性脑膜炎（化脑）主要依赖于脑脊液（CSF）细菌培养，但该法耗时较长，阳性率不高，而且确诊前常因有不正规的抗生素治疗使CSF改变更不典型等，给早期诊治带来一定的困难，难以适应临床需要。为快速、可靠地诊断化脑，我们对20例本院疑似化脑患儿进行CSF细菌DNA荧光定量测定，监测其CSF细菌DNA拷贝数、CT值，同期与CSF细菌培养的对照，效果较好，现报道如下。     

新生儿肺炎克雷伯菌败血症与大肠埃希菌败血症临床特点及耐药性的比较

目的 对新生儿肺炎克雷伯菌败血症与大肠埃希菌败血症临床特点及耐药性进行对比分析,为临床早期诊断和合理治疗提供理论依据.方法 对2000年1月至2009年10月在我院新生儿重症监护病房住院治疗并确诊为肺炎克雷伯菌败血症(n=42)和大肠埃希菌败血症患儿(n=50)的病历资料进行回顾性分析,比较其临床特征、实验室检查、治疗转归情况.同时将不同发病日龄肺炎克雷伯菌败血症与大肠埃希菌败血症(发病日龄≤3 d为早发型败血症、发病日龄＞3 d为晚发型败血症)对抗生素的耐药情况进行比较分析.结果 (1)临床特点比较:肺炎克雷伯菌败血症比大肠埃希菌败血症新生儿气促、呼吸暂停的发生率高(61.9%和6.0%,x2=17.34,P＜0.05),在更短的时间内发展至多器官功能障碍综合征和弥漫性血管内凝血[(40±28)h和(89±26)h](t=-3.17,P＜0.05);但并发化脓性脑膜炎比例低(4.8%和30.0%,x2=9.65,P＜0.05).(2)非特异性实验室检查结果:肺炎克雷伯菌败血症与大肠埃希菌败血症相比较,白细胞＞25×109/L(42.9%和22.0%,x2=4.60,P＜0.05)、血小板＜100×109/L(52.4%和18.0%,x2=12.07,P＜0.05)、C反应蛋白＞8 mg/L(95.2%和76.0%,x2=6.55,P＜0.05)的比例较高.(3)抗生素耐药情况:对头孢菌素类抗生素肺炎克雷伯菌耐药率高于大肠埃希菌(81.8%～100.0%和17.2%～63.2%,x2=6.97～11.92,P＜0.05);晚发型肺炎克雷伯菌败血症对阿莫西林/棒酸、头孢哌酮/舒巴坦耐药率高于晚发型大肠埃希菌败血症(75.0%和0.0%,x2=26.67;83.3%和0.0%,x2=12.53,P均＜0.05);对亚胺培南均未发现耐药.晚发型大肠埃希菌败血症与肺炎克雷伯菌败血症产超广谱于内酰胺酶菌株检出率均较早发型高(65.0%和17.8%,x2=11.06;100.0%和30.0%,x2=20.22,P均＜0.05),其中晚发型肺炎克雷伯菌败血症产超广谱β-内酰胺酶菌株检出率高于晚发型大肠埃希菌败血症(100.0%和65.0%,x2=9.16,P＜0.05).(4)病死率:肺炎克雷伯菌败血症病死率高于大肠埃希菌败血症(21.4%和4.0%,x2=6.59,P＜0.05).结论 新生儿肺炎克雷伯菌败血症病情比大肠埃希菌败血症重,可迅速发展至多器官功能障碍综合征和弥漫性血管内凝血,病死率高.肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的产超广谱β-内酰胺酶菌株快速增长,临床应合理使用抗生素.

Abstract：

Objective To compare the clinical characteristics and antibiotics resistance of neonatal sepsis caused by Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli in order to provide guidance for early diagnosis and appropriate treatment. Methods Forty-two newborns with Klebsiella pneumoniae sepsis and 50 newborns with Escherichia coli sepsis in the neonatal intensive care unit of Yuying Children's Hospital of Wenzhou Medical College from January 2000 to October 2009 were enrolled into this study. The clinical data, laboratory examinations and prognosis of these newborns were retrospectively analyzed and compared. The antibiotic resistance data of different onset age of the two diseases were compared. Early-onset sepsis was defined as the age at the onset ≤3 days, and late-onset sepsis was defined as the age at the onset ＞3 days. Results (1) Comparison of clinical characteristics: Klebsiella pneumoniae sepsis caused higher incidence of apnea or gasp compared with Escherichia coli sepsis (61.9% vs 6.0% ,x2= 17. 34, P＜0. 05); the time of developing to multiple organ dysfunction syndrome or disseminated intravascular coagulation of the newborns with Klebsiella pneumoniae sepsis [(40±28) h] was shorter than that of the newborns with Escherichia coli sepsis [(89±26) h] (t= -3.17, P＜0.05); while the incidence of purulent meningitis of Klebsiella pneumoniae sepsis was lower ( 4. 8% vs 30. 0 %, x2 = 9.65, P ＜ 0. 05 ). ( 2 ) Comparison of non-specific laboratory examinations: compared with Escherichia coli sepsis, Klebsiella pneumoniae sepsis caused higher incidence of the leucocyte count ＞ 25 × 109/L (42. 9% vs 22.0%, x2 = 4. 60,P＜0. 05), platelet count ＜ 100 × 109/L (52.4% vs 18.0%, x2 = 12.07, P＜0. 05) and C-reaction protein ＞8 mg/L (95.2% vs 76.0% ,x2 =6. 55, P＜0. 05). (3) Comparison of results of antibiotic resistance: the resistance rate of Klebsiella pneumoniae (81.8%00-100. 0%) to Cephalosporins was higher than that of Escherichia coli (17. 2%-63. 2%) (x2 =6.97-11.92, P＜0. 05); the resistance rates of late-onset sepsis of Klebsiella pneumoniae to Amoxicillin/clavulanic-acid and Cefoperazone/sulbactam were higher than those of Escherichia coli (75.0% vs 0.0%, x2 =26.67, P＜0. 05;83. 3%vs 0. 0%, x2 = 12.53, P＜0. 05 respectively); no resistance to Imipenem were found. The percentages of extended spectrum β-lactamases (ESBLs) positive Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae were obviously higher in neonates with late-onset sepsis than those early-onset ones (65.0% vs 17. 8%,x2 = 11.06, P＜0. 05; 100. 0 % vs 30. 0 %, x2 = 20. 22, P＜0. 05 respectively); and positive ESBLs rate of the late-onset Klebsiella pneumoniae sepsis was higher than that of Escherichia coli sepsis (100. 0% vs 65.0%, x2 =9.16, P＜0. 05). (4) Comparison of mortality rate: the mortality rate of Klebsiella pneumoniae sepsis was higher than that of Escherichia coli sepsis (21.4% vs 4. 0%,x2=6.59, P ＜ 0. 05 ) . Conclusions Compared with Escherichia coli septicemia, Klebsiella pneumoniae septicemia has more severe symptoms, developed to multiple organ dysfunction syndrome or disseminated intravascular coagulation quicker, and has higher mortality rate. The percentage of ESBLs positive Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae increased rapidly. The clinical use of antibiotics should be rationale.     

16S rRNA基因荧光定量PCR与芯片杂交法快速诊断儿童化脓性脑膜炎

目的探索快速诊断儿童化脓性脑膜炎的新技术。方法通过设计细菌16SrRNA基因高度保守区的引物和探针,对疑似化脑的21份脑脊液(CSF)进行荧光定量PCR及基因芯片杂交检测,同时与脑脊液细菌培养结果比较。结果(1)荧光定量PCR发现21份脑脊液标本有8份阳性,阳性率为38.095%(8/21),明显高于脑脊液培养的阳性率19.047%(4/21),差异具有显著意义(P<0.01)。(2)基因芯片杂交结果8份阳性,其中大肠埃希菌探针阳性5份,肠道杆菌科探针阳性2份,金黄色葡萄球菌探针阳性1份;脑脊液培养4份阳性,分别为肺炎克雷伯菌培养阳性1份,阴沟肠杆菌阳性1份,大肠埃希菌阳性2份;基因芯片杂交阳性率为38.095%(8/21),芯片杂交阳性结果与荧光定量PCR大体一致。结论荧光定量PCR结合基因芯片杂交技术检测儿童化脑具有快速、敏感、特异的特点,对儿童化脓性脑膜炎的早期诊断有一定的应用价值。     

19S-IgM-TPELISA对新生儿先天性梅毒诊断价值的研究

目的:采用19S-IgM-TP ELISA方法对可疑新生儿先天性梅毒进行检测,并与TRUST、TP ELISA的检测结果进行比较,探讨19S-IgM-TP ELISA方法在新生儿先天性梅毒的早期诊断和疗效观察中的临床意义。方法:实验组为50例拟诊新生儿先天性梅毒患儿,男23例,女27例;对照组为非梅毒新生儿20例,男10例,女10例。实验组治疗前、后二次静脉采血,分别应用19S-IgM-TP ELISA、TRUST、TP-ELISA方法进行检测,分析三种方法在驱梅治疗前后检测结果;对实验组确诊先天性梅毒患儿行脑脊液生化检测。对实验组13例19S-IgM-TP ELISA阴性的患儿随访1个月,再次进行上述三种方法复查。结果:50例实验组标本中,TRUST法检测36例阳性,阳性率72.00%(36/50);TP-ELISA法阳性49例,阳性率98.00%(49/50);19S-IgM-TP ELISA法阳性37例,阳性率74.00%(37/50);三种检测方法检出阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=13.77,P<0.01)。依临床表现及19S-IgM-TP ELISA检查结果确诊为先天先梅毒为37例。第1个疗程结束时37例新生儿梅毒,死亡1例,其余36例血清学19S-IgM-TP ELISA转阴率为97.22%(35/36),TRUST转阴率为61.11%(22/36),TP-ELISA转阴率2.78%(1/36),三种检测方法转阴率比较,差异有统计学意义(χ2=65.76,P<0.01)。对实验组13例19S-IgM-TP ELISA阴性患儿出院后1月随访复查。12例患儿初次TRUST检查阴性仍为阴性,1例TRUST滴度下降至在1∶1;12例TP-ELISA仍阳性,1例患儿TP-ELISA阴性(原来阴性),19S-IgM-TP ELISA检测13例均阴性。结论:19S-IgM-TPELISA方法其设备需求较低、方法简单易行、观察结果客观、试剂标准化,敏感性高、特异性强,19S-IgM-TP ELISA方法检测可作为新生儿先天性梅毒的早期确诊依据,有助于早期判断新生儿梅毒治疗疗效观察。     

新生儿肾上腺出血15例诊治分析

成熟胎儿肾上腺皮质血管丰富,细胞索被内皮细胞形成的血窦分隔易出血.较之其他年龄,新生儿期更易发生肾上腺出血,且临床症状不典型,极易漏诊、误诊.笔者对15例新生儿肾上腺出血患儿的临床资料作一回顾性分析,旨在探讨肾上腺出血的发病、诊断及预防.     

肠道病毒71型手足口病121例临床分析

摘要：目的　 分析肠道病毒71型（EV71）感染所致手足口病的临床特征。方法　回顾性分析2010 - 05 - 01—2010 - 08 - 31日温州医学院附属育英儿童医院121例EV71感染所致手足口病的住院患儿病例资料。比较重型组和危重型组的临床表现及辅助检查资料。 结果（1）危重型组较重型组患儿高热明显（P = 0.002）、皮疹不典型（P = 0.000）;（2）120例（99.17%）EV71阳性患儿累及神经系统,主要表现有萎靡（84.30%）、频繁呕吐（65.30%）、肢体抖动（60.33%）和睡眠障碍（53.72%）、查体发现膝反射异常（52.07%）;（3）危重型组呕吐、神志不清、肌张力异常、心率异常、血压异常、毛细血管充盈时间（CRT） > 3 s、呼吸急促或呼吸困难、胸片提示有肺部渗出性病变的发生率显著高于重型组（P < 0.01）;（4）51例（42.15%）患儿外周血白细胞总数（WBC） > 12 ×109/L或者 < 4×109/L;52例（42.98%）患儿血糖 > 6 mmol/L,22例（18.18%）肌钙蛋白-I（cTnI）升高,危重型组的这3项指标与重型组比较差异均有统计学意义（P = 0.000）。 结论 EV71感染所致手足口病多累及神经系统,高热、皮疹不典型、频繁呕吐、神志改变、肌张力异常、心率异常、血压异常、毛细血管充盈时间（CRT） > 3 s、呼吸急促或呼吸困难及肺部渗出性病变是手足口病重型患儿进展为危重型的高危因素。     

17例危重患儿脐动脉置管的护理

总结了 17 例危重患儿经脐动脉置管行有创血压监测、动脉血气分析等血标本采集的护理经验,主要包括脐动脉穿刺置管前准备及医护配合、有效的固定方法、护理措施、并发症的观察和预防等,为临床护理脐动脉置管提供借鉴。     

脑脊液细菌16S rRNA荧光定量PCR快速诊断儿童化脓性脑膜炎

目的探讨儿童化脓性脑膜炎(化脑)新的快速诊断方法。 方法2003 08—2005 12采用16SrRNA荧光定量法对浙江大学儿童医院49例临床疑似化脑患儿脑脊液(CSF)的细菌DNA进行测定；监测化脑患儿脑脊液细菌DNA拷贝数，同期进行CSF细菌培养的对照。 结果(1)荧光定量PCR(FQ PCR)检测49份脑脊液标本发现17份阳性，阳性率为34.7%(17/49)，明显高于脑脊液培养的阳性率10.2%(5/49)，差异具有显著性(P<0.01)。(2)对17份FQ PCR阳性标本进一步测定细菌DNA的拷贝数，发现患儿病情与其DNA拷贝数呈正相关，与其Ct值(指每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数)呈负相关，Ct值越低，脑脊液细菌DNA拷贝数越高，患儿的预后越差。(3)FQ PCR、CSF细菌培养同时阳性的仅为5例。(4)对2例脑脊液FQ PCR的产物测序，Ct值17.9的测序提示为大肠埃希菌，符合CSF细菌培养结果；Ct值31.8的，测序未果。 结论荧光定量PCR特异性强、敏感性高，需标本量少，是早期快速诊断儿童化脑的可靠方法，具有较大的应用价值。