单克隆抗体在农药残留免疫分析中的研究及应用

我国每年农药中毒人数高达10余万人，农药残留严重影响人民健康。我国已加入WTO，绿色食品的标准要与国际接轨，所以对水果、蔬菜、食品及环境的质量要求越来越高。既往的农药残留检测多采用包括气相色谱、液相色谱、质谱、薄层层析等方法，不仅需要复杂昂贵的仪器、提取纯化费时、分析方法手续复杂，而且需要专业技术人员操作，很难达到现场检测要求。     

克拉霉素与氟罗沙星对细菌生物被膜的协同抑制作用

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)能产生富有粘附性的由糖蛋白构成的细菌生物被膜(Bacterial biofilm，BBF)。由于生物被膜的屏障作用，抗菌药物不易与细菌直接接触，生物被膜内的细菌常不易被抗生素清除，且细菌代谢率也降低，从而产生耐药性，造成生物被膜细菌感染迁延和难治。     

菜牛加工期间粪便、皮毛和躯体中的EHEC O157流行率

作者对美国中西部的四家大型牛肉加工厂进行了调查,以估计肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7或O157:NM在菜牛加工期间粪便、皮毛及躯体中的流行率。作者于1999年7～8月对每家工厂观察2次,每次在各厂观察3或4批菜牛,每批随机采样35～85头(至少占20％)。粪便及皮毛样本在加工前分别取自327头及357头菜牛;躯体样本取自341     

O157：H7（浙江株）的细胞毒性作用及其意义探讨

目的：用Vero,HeLa,CHO及KMB17细胞测定EHECO157：H7首例浙江株97－1－68菌株的细胞毒性，轴时与其他菌株作比较。方法：采用微量组织培养板的单层细胞培养测定菌体超声裂解液及细菌培养上清液的细胞毒性作用效价。结果：97－1－68菌株对全部4株细胞均无细胞毒性作用，而阳性对照株对Vero,HeLa细胞具有较强的细胞毒性作用。结论：在EHEC O157：H7感染中可能存在流行株和非流行株的“两类菌株”。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养纯化及冻存

目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养及冻存的方法。方法:用密度梯度离心法及贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,并对其形态学特征进行观察,比较两种分离培养法的细胞生长增殖情况。大鼠MSCs在12.5%二甲亚砜(DMSO)保护下放入液氮冻存,6个月后复苏,测其成活率及观察生长增殖情况。结果:用密度梯度离心法及贴壁培养法均能有效地分离大鼠骨髓MSCs,细胞活力好,增殖能力强。大鼠MSCs可用液氮保存,且复苏后细胞生长增殖旺盛,形态无明显的变化。结论:采用密度梯度离心法及贴壁培养法成功地建立了大鼠骨髓MSCs体外分离和培养体系;采用液氮冻存大鼠MSCs的方法十分有效可行。     

不同冻存时间与温度对兔骨髓基质干细胞存活率的影响

目的:以二甲基亚砜作为保护剂,采用慢冻快融法观察不同温度及不同时间冻存的兔骨髓基质干细胞复苏后存活率的变化。方法:实验于2003-09/2005-06在浙江省医学科学院生物工程所完成。①选取清洁级3月龄新西兰大白兔5只,抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液,密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化出兔骨髓基质干细胞,并进行增殖。②取第3代骨髓基质干细胞,经消化后离心重悬,用完全培养液调整细胞浓度为6×109L-1。将质量浓度为250g/L的二甲基亚砜缓慢滴入同体积含骨髓基质干细胞的上述培养液中,混匀,二甲基亚砜的终浓度为125g/L,骨髓基质干细胞的终密度为3×109L-1,1mL/安瓿冻存。③4℃冻存直接将安瓿置4℃冰箱中;-20℃及-60℃冻存,则将安瓿置于有脱脂棉的聚丙烯泡沫盒中,壁厚1.5cm,扎紧密封,各置-20℃及-60℃冰箱过夜,取出后分别直接放于-20℃及-60℃冰箱保存;-196℃液氮冻存,则将置有安瓿的泡沫盒于-60℃冰箱过夜后,取出冻存安瓿直接放于液氮中保存。骨髓基质干细胞分别于4℃、-20℃、-60℃、-196℃条件下进行3d,10d,1,3,8个月以及1年的冻存。④经不同温度及不同时间冻存后,给予复苏。复苏时将冻存安瓿从液氮或冰箱中取出,立即置37℃水浴并轻轻摇动,约1min迅速解冻。含骨髓基质干细胞的冻存液经5倍于冻存液量的完全培养液稀释后,离心重悬,进行骨髓基质干细胞存活率测定。复苏后的骨髓基质干细胞以1×104/cm2用完全培养液再培养,观察骨髓基质干细胞的形态变化及生长活性情况。结果:实验选取3月龄新西兰大白兔5只,全部进入结果分析。①兔骨髓基质干细胞原代培养情况:培养3d时,骨髓基质干细胞数量较少,散在分布,呈短梭形形态。培养1周时细胞形成大量的小集落,细胞变长。此后集落细胞迅速增多,逐渐汇合成片,形态为均一的长梭形,呈旋涡状排列,2周时细胞长成单层。②兔骨髓基质干细胞传代培养情况:刚传代的骨髓基质干细胞呈圆形,数小时后迅速贴壁,重新成为梭形。之后细胞呈长梭形均匀分布生长,形态比原代培养更均一,细胞生长旺盛、增殖迅速。连续传代22代无明显变化。但随传代次数增多,细胞形态出现多样性,逐渐呈老化现象。③不同温度不同冻存时间下复苏后的兔骨髓基质干细胞存活率的比较:兔骨髓基质干细胞液氮保存1年,存活率为79%;-60℃保存1,3,8个月的存活率分别为67%,38%和0%;不宜于4℃及-20℃保存。④复苏后的骨髓基质干细胞再培养情况:复苏后的骨髓基质干细胞细胞形态及生长状况与冻存前无明显差异,呈长梭形生长,增殖旺盛。结论:分离纯化的兔骨髓基质干细胞生长增殖能力强,短期保存可用-60℃冻存,长期需液氮保存,为择期进行骨髓基质干细胞实验和应用提供实验依据。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7毒力因子

本文对肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7产生的志贺样毒素(SLTs)、溶血素(hly)及粘附因子等毒力因子及其致病机理的研究进展作一综述。     

静脉持续滴注垂体后叶素治疗门脉高压上消化道出血

根据第四军医大活伯莱等［'j临床上应用静脉持续滴注垂体后叶素成功控制了肝硬化上销化道出血的报告，我科采用同样方法，治疗同类患者24例，发现确有明显效果。现总结如下：临床资料24例中，男性17例，女性7例，以30～39岁者居多，30岁以下2例，40岁至60岁共11例。病史中都有食欲不振，乏力，肝区不适，恶心，腹胀，腹痛，呕血，柏油样便。脾脏润及6例，腹水9例。肝功能损害，牌功能亢进，超声及CT提示，肝脏缩小，脾大、门牌静脉增粗，压力增高迹象。内窥镜检查，有食道胃底静脉曲张者11例。分析上消化道大出血是门脉高压症常见的开发症…