体外诱导人骨髓间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究

目的应用血小板衍生生长因子BB（platelet-derived growthfactor BB,PDGF-BB）,体外诱导人骨髓间充质干细胞（human bone marrowmesenchymal stemcells,hBMSCs）向血管平滑肌细胞表型分化,探讨该方法的可行性及诱导细胞作为组织工程血管平滑肌种子细胞的可行性。方法抽取健康成人志愿者骨髓,经密度梯度离心分离得单个核细胞,PDGF-BB（20ng/ml）诱导hBMSCs向血管平滑肌样细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）分化,观察细胞形态变化。免疫荧光检测细胞内血管平滑肌肌动蛋白α（vascular smooth muscleα-actin,SMα-actin）,血管平滑肌钙结合蛋白（vascular smoothmuscle calponin,SMcalponin）,血管平滑肌肌球蛋白重链（vascular smooth muscle myosin heavy chain,SMMHC）和细胞血管平滑肌钙结合相关蛋白（smooth muscle22α,SM22α）表达情况;反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测诱导后血管平滑肌细胞SMα-actin,SMcalponin,SMMHC和SM22α的mRNA表达。Western印记检测SM22α的表达。流式细胞分析技术（fluorescence activated cell sorter,FACS）分析诱导后细胞内SMα-actin,SMcalponin,SMMHC的表达。结果PDGF-BB20ng/ml诱导后可见单层培养的细胞形态呈“成纤维细胞样”。免疫荧光检测示SMα-actin,SMcalponin,SMMHC,SM22α表达阳性;RT-PCR检测SMα-actin,SMcalponin,SMMHC,SM22α的mRNA阳性表达。Western印迹检测SM22α的表达为阳性。FACS分析表明诱导后,SMα-actin,SMcalponin,SMMHC表达均增高,与未诱导组比较差异有统计学意义（P〈0.05,n=3）。结论人骨髓间充质干细胞在PDGF-BB的诱导下可向血管平滑肌细胞表型分化,有望成为血管组织工程血管平滑肌种子细胞的来源。     

利用ADSCs在生物反应器中构建小口径血管的初步研究

目的 尝试利用人的脂肪基质干细胞(Adipose-derived stromal cell,ADSCs)在生物反应器中构建组织工程化小血管.方法 采用脂肪抽吸术获取人脂肪组织,将脂肪细胞分离、传代培养;对培养的第三代细胞进行脂肪干细胞表型鉴定;同时称取一定量的聚羟基乙酸(PGA)制成片状材料,消毒晾干备用,将细胞接种在PGA材料上,静态培养半天后置于生物反应器中动态培养4周,然后进行初步检测.结果 从形态学观察,细胞伸展呈成纤维细胞样,生长有方向性,5～6 d后可见克隆开始形成.对第三代ADSCs进行检测,结果显示除CD166、CD105有高的表达外,CD14、CD34表达很低.从反应器取出的样品能形成血管样组织,扫描电镜观察:样品基质分泌旺盛.结论 采用组织工程方法,从动态培养的角度可以在体外利用ADSCs构建血管形状的组织,为进一步研究ADSCs在血管组织工程中的应用提供了一种好的方法.