细粒棘球蚴囊液通过Toll样受体2调节细胞因子分泌的研究

目的探讨细粒棘球蚴囊液(EgCF)是否通过刺激巨噬细胞高表达Toll样受体2(TLR2),进而调节细胞因子的表达。方法培养获得腹腔巨噬细胞,用EgCF刺激小鼠腹腔巨噬细胞,用实时荧光聚合酶链反应检测不同时间点TLR2 mRNA的表达水平,用Western Blot法检测刺激不同时间TLR2信号通路中磷酸化的P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷酸化的核转录因子κB-P65(p-NF-κB-P65)的表达水平。siRNA沉默TLR2后,用EgCF再次刺激腹腔巨噬细胞,用Western Blot法检测p-P38、p-AKT、p-ERK和p-NF-κB-P65的表达水平,用酶联免疫吸附实验法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果巨噬细胞在EgCF刺激后TLR2 mRNA及p-P38、p-AKT、p-ERK、p-NF-κB-P65表达水平均升高。沉默TLR2后,p-P38、p-AKT和p-ERK表达水平均降低,但p-NF-κB-P65无改变。沉默组的IL-6和TNF-α表达水平均较EgCF刺激组升高,IL-10较EgCF刺激组降低。结论EgCF刺激巨噬细胞高表达TLR2,可能通过TLR2介导的信号通路抑制促炎因子TNF-α和IL-6分泌,促进抑炎因子IL-10的分泌。     

内皮祖细胞条件培养基对间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及其机制

目的:探讨小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)条件培养基(CM) 对同源间充质干细胞(MSCs)增殖和成骨分化功能的影响,并阐明其作用机制。方法:小鼠骨髓细胞经差速贴壁法结合专用培养基分别培养扩增MSCs和EPCs,采用流式细胞术(FCM)检测MSCs和EPCs表面标记物,以成骨、成脂和成软骨诱导分化对MSCs进行功能鉴定,以成血管对EPCs进行功能鉴定。将MSCs分为0% EPCs-CM组(对照组,采用LG-DMEM培养)、50% EPCs-CM组(采用50% EPCs-CM+50% LG-DMEM培养)和100% EPCs-CM 组(采用100% EPCs-CM培养)。采用MTT比色法检测各组MSCs的增殖活性;采用茜素红染色检测各组MSCs的成骨分化能力。结果:FCM法检测,第3代MSCs高表达Sca-1、CD29, 低表达CD45、CD11b;经诱导可向成骨、成软骨和成脂方向分化。第3代EPCs 高表达CD34、CD133和VEGFR2;在铺有基质胶的96孔培养板中可形成血管样结构。与对照组比较,50% EPCs-CM组和100% EPCs-CM组MSCs增殖活性明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。茜草色素红染色法检测,培养21 d后50%和100% EPCs-CM组MSCs的钙结节数量和钙盐沉积均高于对照组(P<0.05)。结论:利用差速贴壁法可同时分离MSCs和EPCs,EPCs-CM能促进MSCs 的增殖和成骨分化。     

实时组织弹性成像及血清学指标评估乙型肝炎患者肝纤维化程度及门静脉压力研究

探讨使用实时组织弹性成像（RTE）、天冬氨酸氨基转移酶与血小板比值指数（APRI）及FIB-4指数评估乙型肝炎患者肝纤维化程度及门静脉压力的可行性。方法 选取2014年9月-2015年6月于石河子大学医学院第一附属医院住院的乙型肝炎患者69例,其中31例接受肝组织穿刺,38例接受肝脏切除术。使用RTE测定肝纤维化指数,收集患者血清学指标并计算APRI以及FIB-4指数,肝脏切除术患者术中测定门静脉自由压（FPP）,病理检查进行肝组织纤维化程度分期（肝纤维化Metavir分期）。结果 肝纤维化Metavir分期F0 8例（12%）,F1 21例（30%）,F2 23例（33%）,F3 7例（10%）,F4 10例（15%）。RTE测得肝纤维化指数为1.63～4.02,APRI为0.08～2.10,FIB-4指数为0.33～6.31,Spearman秩相关分析结果显示,肝纤维化指数、APRI、FIB-4指数与肝纤维化Metavir分期均呈正相关（rs=0.582,P＜0.001;rs=0.550,P＜0.001;rs=0.444,P＜0.001）。肝纤维化指数与APRI、肝纤维化指数与FIB-4指数、APRI与FIB-4指数诊断肝纤维化Metavir分期F≥2、F≥3、F=4 ROC曲线下面积比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。手术患者术中测得FPP为13.50～36.50 cm H2O（1 cm H2O=0.098 kPa）,Spearman秩相关分析结果显示,FPP与肝纤维化Metavir分期呈正相关（rs=0.685,P＜0.001）。Pearson相关分析结果显示,肝纤维化指数、APRI、FIB-4与FPP均呈正相关（r=0.596,P＜0.001;r=0.633,P＜0.001;r=0.696,P＜0.001）。将RTE与血清学指标相结合,通过多元线性回归计算得到FPP的预测方程式为：FPP=9.275+2.992×肝纤维化指数+1.064×APRI+1.605×FIB-4指数,r=0.749,P＜0.001。结论 RTE、APRI及FIB-4指数可以在评估乙型肝炎患者肝纤维化程度的同时评估门静脉的压力。     

肝细粒棘球蚴外囊壁钙化相关受体

目的 比较肝细粒棘球蚴病患者钙化外囊壁及非钙化外囊壁上的钙化相关受体BMPRⅡ(骨形态发生蛋白Ⅱ型受体)、IGF1R(胰岛素样生长因子1受体)和ERα(雌激素受体α)的表达差异。方法 钙化外囊壁和非钙化外囊壁茜素红染色,Envision免疫组化法和qRT-PCR分别检测同一细粒棘球蚴病患者钙化外囊壁及非钙化外囊壁上钙化相关受体BMPRⅡ、IGF1R和ERα的表达水平和钙化相关受体的mRNA表达量。结果 与细粒棘球蚴非钙化外囊壁相比较,同一患者钙化外囊壁茜素红染色钙化显著,且差异有统计学意义(χ²=20.369,P<0.01);钙化外囊壁相关受体的表达明显增加,且差异有统计学意义(P<0.05),mRNA表达量明显增高且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 肝细粒棘球蚴病患者钙化外囊壁钙化相关受体表达量较高,钙化相关因子通过与受体BMPRⅡ、IGF1R和ERα等结合,引起细粒棘球蚴外囊壁钙化,外囊壁的钙化可以有效地抑制细粒棘球蚴的生长,在细粒棘球蚴病患者临床治疗过程中发挥着重要作用。     

改良差时贴壁法分离培养鉴定小鼠骨髓间充质干细胞和内皮前体细胞

目的 探索同时从小鼠骨髓分离培养间充质干细胞(MSCs)与内皮前体细胞(EPCs)及对其鉴定的方法。方法 小鼠骨髓细胞经改良差时贴壁法分离,以48h为时间点,48h内贴壁细胞传至3代后行成骨、成软骨、成脂分化诱导实验,流式细胞术（FCM）检测其表面标记;48h后收集未贴壁细胞,传至3代后行血管形成实验,传至5代后行CD31免疫荧光细胞染色实验,FCM检测其表面标记。 结果 第3代48h内贴壁细胞可诱导分化为骨、软骨和脂肪细胞,FCM 检测Sca-1、CD29、CD45、CD11b 阳性率分别为（98.30±0.75）%,（97.47±1.32）%,（1.87±0.15）%,（1.03±0.71）%;第3代48h后贴壁细胞在基质胶上可形成血管样结构,第5代48h后贴壁细胞特异性表面抗原CD31呈阳性表达,FCM检测CD34、CD133、血管内皮生长因子受体（VEGFR2） 阳性率分别为（88.90±1.18）%,（92.73±2.90）%,（87.63±1.79）%。 结论 采用改良差时贴壁法可同时分离培养扩增小鼠骨髓 MSCs和 EPCs,且简便高效稳定可重复。     

PDGF、TNF-α在人肝细粒棘球蚴囊壁周围组织的分层表达

采用原位杂交方法检测血小板衍生生长因子 (PDGF )及肿瘤坏死因子α(TNF α )在 4 0例人肝细粒棘球蚴囊肿周围纤维囊壁中表达。结果显示PDGF、TNF α在肝细粒棘球蚴囊肿周围纤维囊壁中出现特异性分层表达。靠近虫体侧纤维囊壁中 ,PDGF、TNF α阳性细胞率分别为 (9 36 %± 2 13% )、 (10 5 2 %± 2 6 4 % )。靠近肝实质侧纤维囊壁中 ,PDGF、TNF α阳性细胞率分别为 (37 5 1%± 7 4 5 % )、 (2 5 76 %± 5 0 5 % )。PDGF、TNF α在两层中表达的均有显著性差异 (P <0 0 1)。同时 ,靠近肝实质侧纤维囊壁中PDGF与TNF α的表达也有显著性差异 (P <0 0 5 )。提示肝细粒棘球蚴囊肿周围人体纤维囊壁分层 ,PDGF、TNF α与肝实质侧纤维囊壁的形成有密切关系。     

47例囊性肝棘球蚴病合并胆管瘘病解剖特征的临床资料分析

目的 初步探讨囊性肝棘球蚴病合并胆管瘘病的临床分型标准及意义。 方法 回顾性研究2000年1月至2005年3月，收治并行外膜内完整摘除术治疗囊性肝棘球蚴病合并胆管瘘病47例，术中观察胆管瘘不同的解剖特点，术后观察疗效。 结果与结论 47例患者术后恢复顺利，无残腔感染及胆管瘘等并发症。总结胆管瘘不同的解剖特点，初步提出囊性肝棘球蚴病合并胆管瘘病的3个临床分型标准，即：根据囊性肝棘球蚴病发病部位分为中央型及外周型，根据胆管与囊肿解剖关系分为侧瘘型、直入型及贯通型，根据肝棘球蚴囊固态内容物与胆道的关系分为破入胆道型及未破入胆道型。按此标准，可明确地表述囊性肝棘球蚴病合并胆管瘘病的情况，对临床外科具有参考意义。     

体外负压培养对小鼠骨髓间充质干细胞增殖能力和血管内皮生长因子分泌水平的影响

文题释义： 自制负压吸引装置：由一个吸痰机和一个负压可调节吸引器及一个密闭的容器盒组成。手术创面应用负压吸引可促进切口愈合,负压还可以促进间充质干细胞向成骨细胞、表皮细胞分化。 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)：一种胸腺嘧啶核苷酸类似物,在细胞增殖时EDU能够插入正在复制的DNA分子中,利用EDU与染料之间的点击化学(Click Chemistry)反应进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。 背景：如何增强骨髓间充质干细胞增殖活性使其移植后发挥应有的疗效是目前急需解决的问题。 目的：探讨体外负压培养技术对小鼠骨髓间充质干细胞增殖活性及血管内皮生长因子分泌水平的影响。 方法：取第3代骨髓间充质干细胞,给予间歇性负压培养(-6.65,-13.3,-26.6 kPa),2 h/次,1次/12 h,对照组在正常条件下培养。培养12,24,36,48,60 h,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,ELISA检测细胞分泌血管内皮生长因子水平,RT-PCR检测血管内皮生长因子受体mRNA表达。根据上述结果,选择一个最佳负压条件和时间(-26.6 kPa,24 h),将骨髓间充质干细胞分为正常对照组、负压组、负压+血管内皮生长因子受体抑制剂Axitinib组,CCK-8法检测细胞增殖情况,EDU试剂盒检测EDU细胞阳性率,结晶紫染色观察细胞集落形成单位。 结果与结论：①与对照组比较,3个负压干预组骨髓间充质干细胞显著增殖(P < 0.05);②与对照组比较,3个负压干预组细胞分泌血管内皮生长因子水平显著增高(P < 0.05),血管内皮生长因子受体mRNA表达显著增高(P < 0.05);③经血管内皮生长因子受体抑制剂处理后,细胞增殖吸光度值、克隆形成单位数量及EDU阳性细胞率较负压干预组明显降低;④结果表明,体外负压培养可能通过上调血管内皮生长因子分泌水平促进骨髓间充质干细胞增殖。 ORCID: 0000-0002-3897-6629(吴向未);0000-0002-5063-973X(杨雄峰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程