转基因小鼠中人清道夫受体AI基因的稳定遗传和特异表达

为阐明人清道夫受体AI (hSR-AI)的功能及在动脉粥样硬化发生中的作用,本研究首先构建了含鼠 tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA的表达载体,经酶切及测序鉴定后,用显微注射的方法将制备好的tie-1-hSR-A-BGH poly A片段注入受精卵,将注射后存活的受精卵移入IC R假孕母鼠,产下的仔鼠经聚合酶链反应和Southern blot分析,筛选出整合有外源目的基因的阳性转基因鼠;对小鼠组织RNA行逆转录聚合酶链反应及组织切片免疫组织化学染色,检测人清道夫受体AI在小鼠体内的表达水平及表达部位;光镜及电镜观察转基因鼠血管及其它组织的病理变化.结果发现, 重组Tie-1/hSR-AI质粒中鼠tie-1启动子和人清道夫受体AI cDNA序列正确,显微注射后存活的 561枚受精卵分别移入19只ICR假孕母鼠,有13只受孕,共产下56只仔鼠,存活54只,经过整合检测 ,检出7只阳性鼠,整合效率为13%.在G1、 G2、 G3 代及纯合子转基因鼠中PCR阳性率分别为47.8%、 71.3%、 75.0% 和 100%.5只雄性转基因鼠的主动脉、肾、肝等组织中均有人清道夫受体 AI表达,且主要集中在血管的内皮细胞上;转基因鼠主动脉内皮细胞明显水肿,表面呈多囊状和虫蚀样改变,胞质中有较多水泡,中膜有糖原沉积样灶性病变,平滑肌细胞中亦有水肿 ;血浆甘油三酯水平明显高于非C57BL/6鼠(P<0.05),总胆固醇水平虽不比C57BL/6高,但雄性鼠总胆固醇水平明显高于雌性(P<0.01).这些结果提示,已成功建立了鼠tie-1启动子驱动人清道夫受体AI在血管内皮细胞特异性表达的转基因鼠.外源基因能在子代鼠中稳定遗传.转基因鼠血管出现内膜水样变性及中膜粘液样变性等动脉粥样硬化的早期病理改变,表明人清道夫受体AI转基因鼠可能易感动脉粥样硬化,成为新的动脉粥样硬化模型.     

尼群地平对食饵性家兔动脉粥样硬化的影响Ⅰ.对血浆总胆固醇和主动脉病变的作用

用新西兰白兔观察了尼群地平对实验性动脉粥样硬化的影响。结果发现,尼群地平时食饵性高脂血症影响不大,但可明显抑制其主动脉壁病变,降低主动脉组织胆固醇含量,表明尼群地平具有显著抗动脉粥样硬化作用。     

肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响

探讨大鼠腹腔肥大细胞对平滑肌源性泡沫细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的影响。用大鼠腹腔肥大细胞上清液和氧化型低密度脂蛋白处理平滑肌细胞48h后，逆转录聚合酶链反应检测平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达，免疫细胞化学染色检测平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果发现，与对照组相比，处理组平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达降低，免疫细胞化学染色后，处理组细胞浆内棕色颗粒比对照组少且染色浅。结果提示，肥大细胞在体外抑制平滑肌细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达，并且能协同氧化型低密度脂蛋白对Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达的抑制作用。肥大细胞释放的炎症介质可能参与了动脉粥样斑块纤维帽的重构。     

血小板活化因子受体拮抗剂WEB2086抑制载脂蛋白E基因敲除鼠主动脉粥样硬化斑块内血管新生

目的　观察血小板活化因子受体拮抗剂WEB2 0 86对载脂蛋白E基因敲除鼠斑块内血管新生和斑块面积的影响。方法　8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除鼠普通饲料喂养2 4周,然后随机分为对照组和WEB2 0 86组2组,每组18只。两组均普通饲料,对照组普通饮水,WEB2 0 86组则在普通饮水中加入血小板活化因子受体拮抗剂WEB2 0 86 (43mg/L)。继续喂养8周后,空腹18h采血,安乐死,取材。全自动生物化学分析仪检测血清脂质含量,CD31全层铺片检测斑块内毛细血管密度,含斑块的主动脉环置于matrigel中培养检测斑块新生毛细血管的能力,苏丹Ⅳ染色检测斑块面积。结果　WEB2 0 86对血清脂质无明显影响。WEB2 0 86明显抑制粥样斑块内毛细血管平均密度(34.6 %±10 .2 %比16 .1%±6 .7% ,P <0 .0 1)、明显抑制含斑块的主动脉环在matrigel中新生毛细血管(172 .3±4 0 .6比73.1±2 4 .9,P <0 .0 5 )、显著减小主动脉斑块面积(31.4 %±9.7%比17.5 %±6 .3% ,P <0 .0 1)。结论　WEB2 0 86对血脂无明显影响,但可抑制斑块内血管新生和减小斑块面积。     

血管组织肾素—血管紧张素系统激活对活性氧及一氧化氮生成的影响

目的研究血管组织肾素—血管紧张素系统激活对活性氧及一氧化氮生成的影响。方法采用五指山小型猪10头,分为2组,每组5头,分别喂饲正常或高脂饮食3个月,观察颈总动脉组织胆固醇含量、血管紧张素Ⅱ、活性氧、一氧化氮及总抗氧化能力的变化,并应用chymostatin和氯沙坦分别抑制培养的人脐静脉内皮细胞血管紧张素Ⅱ生成或阻断其与受体结合,测定细胞培养液中活性氧和一氧化氮含量。结果高脂血症猪血管组织内膜与中膜胆固醇含量较对照组增加了108%±25%,血管紧张素Ⅱ含量增加了115%±20%,活性氧含量增加了144%±28%,一氧化氮减少了51%±5%,血管组织总抗氧化能力降低56%±5%(P均<0.01)。人脐静脉内皮细胞培养液中加入血管紧张素Ⅰ10 nmol/L,培养液中血管紧张素Ⅱ增加11倍,活性氧生成显著增加,一氧化氮则显著减少(P均<0.01)。人脐静脉内皮细胞培养液中加入血管紧张素Ⅰ10 nmol/L和Chymostatin 100或500μmol/L,血管紧张素Ⅱ的生成分别降低了61%±6%和65%±7%,同时活性氧生成减少,一氧化氮生成增加(P<0.01);人脐静脉内皮细胞培养液中加入氯沙坦,在血管紧张素Ⅱ生成不减少的情况下,活性氧与一氧化氮生成量与对照组相近。结论高胆固醇血症能使猪血管组织肾素—血管紧张素系统活化,导致活性氧生成增多,一氧化氮减少,这一作用可能由血管紧张素Ⅱ的I型受体介导。     

贵州小香猪颈总动脉球囊损伤致动脉粥样硬化血管重构

目的　研究球囊损伤引起动脉粥样硬化血管重构及其机制。方法　采用贵州小香猪 10头 ,均用球囊损伤右侧颈总动脉内膜 ,喂饲正常饮食 (n =5 )或高脂饮食 (n =5 ) 12个月。血管样本分为四组 :正常对照组、拉伤对照组、高脂组和高脂拉伤组。采用计算机图像分析系统测定血管重构的相关指标 ,观察血管组织的病理变化 ,并检测血管组织生化指标的变化。结果　除正常对照组外 ,其余三组均出现内膜增厚及病理性血管重构 ,尤以高脂拉伤组的变化最为显著。其最大内膜厚度及内膜面积分别由 0增大到 1.2 0± 0 .0 7mm和 2 .0 9± 0 .10mm2 (P <0 .0 1) ;而外弹力膜围绕面积由 15 .2 1± 0 .4 2mm2 减少到 9.94± 0 .32mm2 ,内弹力膜围绕面积由 11.38± 0 .2 2mm2减少到 6 .14± 0 .16mm2 ,管腔最小直径由 3.6 4± 0 .10mm2 减少到 1.5 0± 0 .0 5mm2 (P <0 .0 1) ,管腔面积减少达6 4 % ;血管紧张素Ⅱ、内皮素 1和白细胞介素 6也均显著增高 ,分别为正常对照组的 3.4、4 .5和 3.2倍 (P <0 .0 1)。结论　单纯内膜损伤及高脂血症均可引起或 (和 )加速血管重构 ,血管紧张素Ⅱ、内皮素、一氧化氮、白细胞介素 6及血管组织的炎症在血管重构中可能起着重要作用     

尼群地平对离体冠状动脉的作用

尼群地平对食饵性兔动脉粥样硬化的影响──Ⅲ、对血清、主动脉壁和心肌钙含量的影响涂玉林，杨小毅，万载阳，周元芳（衡阳医学院心血管病研究所，衡阳４２１００１）Ｃａ２＋作为细胞内钙离子信息系统的重要组成成分之一，在生理生化以及疾病的发生发展过程中起着重要作...     

一种评价猪冠状动脉内皮细胞完整性的新方法

血管内皮细胞通过释放内皮细胞源性收缩和舒张因子调节血管平滑肌细胞的舒缩活动,经典上在离体血管实验中常采用乙酰胆碱作为检验血管内皮细胞完整性的工具药。最近我们在离体猪冠状动脉环上观察到不论内皮是否完整,乙酰胆碱均呈剂量依赖性收缩反应,但三磷酸腺苷则可诱发内皮依赖性松弛反应,在此基础上我们建立了以三磷酸腺苷为工具药评价猪冠状动脉内皮细胞完整性的新方法。     

不同剂量尼群地平对实验性动脉粥样硬化的影响

我们在取得硝苯吡啶抗动脉粥样硬化(AS)的结果之后,观察了另一个新型钙通道阻断剂-尼群地平(nitrendipine)对实验性 AS 兔的影响,并观察了两种不同剂量作用的关系。实验选用新西兰白兔40只,观察两周后随机分为4组,每组10只。第一组为正常组(普通饮食,100g/day);第二组为高脂组(普通饮食基础上加入1%胆固醇),第三组为小剂量尼群地平组(高脂饮食基础上,皮