转录因子KLF4在脂肪细胞分化过程中的表达变化

Kruppel类因子(Kruppel-like factor)KLF家族是一个十分重要的转录调控因子家族,通过调控大量基因的表达,在生长发育、细胞分化、动脉粥样硬化的发病及肿瘤的发展中起重要作用。近年来,陆续发现KLF15、KLF2、KLF5、KLF6等家族成员在脂肪细胞分化过程中均扮演     

多种生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素生成细胞团

目的 探讨体外联合应用激活素A、全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和烟酰胺4种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导分化为胰岛素生成细胞团. 方法 先后以激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子诱导小鼠ESC 14 d后,应用RT-PCR、DTZ染色和免疫荧光检测分化细胞胰岛素表达. 结果 分化细胞可检测到胰岛素mRNA表达,DTZ染色和免疫荧光染色阳性. 结论 体外联合应用激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子能够将小鼠ESC诱导分化为胰岛素生成细胞团.     

人PCK1基因克隆及其表达载体的构建

目的 构建人PCK1基因的真核表达载体.方法 以人内脏脂肪细胞cDNA为模板, 聚合酶链反应(PCR)扩增PCK1基因编码区的全部序列,克隆入pGEM-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)中,并进行双酶切鉴定.结果 PCR扩增的特异性片段长度为1 972 bp,以此构建的pGEM-T-PCK1克隆载体,经限制性内切酶酶切证实载体中带有PCK1基因的目的片段,与GenBank中的人PCK1基因cDNA序列一致.重组质粒pcDNA3.1-PCK1经KpnⅠ/XbaⅠ双酶切后显示5.1 kb和 2 000 bp左右的2个条带,证明PCK1基因已成功克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3.1(+) 中.结论 成功构建了野生型pcDNA3.1-PCK1重组真核表达载体.     

胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响

目的 研究胰淀素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌的影响.方法 应用胶原酶消化和不连续密度梯度离心技术建立离体大鼠胰岛模型,研究不同浓度胰淀素对胰岛素和胰高血糖素分泌的影响.结果 不同浓度的葡萄糖增加胰岛素的分泌,抑制胰高血糖素的分泌,并都呈线性相关.葡萄糖浓度为0、5.6、11.2 mmol/L时,孵育1 h,胰淀素(10-10 ～ 10-5 mol/L)显著抑制胰高血糖素的分泌(P＜0.05),且胰高血糖素的分泌与胰淀素浓度呈负相关(P＜0.01).葡萄糖浓度为5.6 mmol/L时,不同浓度的胰淀素增加胰岛素分泌,而且两者呈正相关(P＜0.05);但葡萄糖浓度为11.2和16.7 mmol/L时,10-5 mol/L胰淀素对胰岛素的分泌有明显抑制作用(P＜0.05).结论 胰淀素对胰高血糖素的分泌有直接抑制作用;在葡萄糖浓度为5.6 mmol/L时,胰淀素能增加胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌;高糖时,高浓度的胰淀素抑制胰岛素分泌.     

单纯餐后高血糖型糖尿病的胰岛素分泌与敏感性

目的 评估单纯餐后高血糖型糖尿病(IPH)的胰岛素分泌与敏感性的特征,并进一步探讨进展为IPH的相关因素.方法 850例受试者按75 g葡萄糖耐量试验分为:糖耐量正常(NGT)557例;单纯糖耐量异常(iIGT)146例;IPH 147例.比较各组的代谢指标及胰岛素分泌和胰岛素敏感性指数.结果 早期相胰岛素分泌和胰岛素敏感性指数从NGT→iIGT→IPH逐渐降低,校正年龄和BMI后差异有统计学意义(P＜0.05).对iIGT和IPH患者作线性回归分析显示早期相胰岛素分泌和胰岛素敏感性指数与2hBG密切相关.结论 初发的IPH有显著的早期相胰岛素分泌缺陷和胰岛素敏感性降低.β细胞胰岛素分泌缺陷和胰岛素抵抗均是从NGT→iIGT→IPH的进展过程中的决定因素.     

Cnb1基因多态性与2型糖尿病相关性研究

目的:研究Cnb1基因的单核苷酸多态性(SNPs)在上海地区人群2型糖尿病(2-DM)患者和正常对照组人群中的基因型频率、等位基因频率分布及其与2-DM的相关性。方法:选取上海地区无亲缘关系的2-DM患者447例及正常对照440名。用稳态模式胰岛素抵抗指数(HOMA-R)及胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)估测外周组织胰岛素敏感度及胰岛β细胞功能。采用等位基因专一性实时PCR技术,对2-DM患者及正常对照组人群Cnb1基因的5个SNP位点rs12329083、rs12465425、rs13029910、rs2861814及rs11692815进行基因分型;并进行统计学分析,研究这些位点与2-DM的相关性。结果:rs13029910的CC基因型频率在2-DM患者组中的含量较对照组显著升高(2.7%比0.7%,P=0.021),CC基因型个体2-DM发病风险增高,Logistic回归分析显示,其OR值(比值比)为4.266(P=0.035)。rs12329083(A/T)、rs12465425(G/T)、rs2861814(C/T)及rs11692815(A/G)位点的基因型频率、等位基因频率在2-DM组与正常对照组中的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:Cnb1基因可能与上海地区人群2-DM的遗传易感性有关,其中rs13029910多态性位点的基因型CC与2-DM发病风险增高相关。     

维生素D缺乏与桥本甲状腺炎及相关因素的研究

目的:评估桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)及相关因素与25-羟维生素D的相关性。方法:选取2017年1月至2019年12月于我院内分泌科住院治疗的HT患者334例,同时选取同期非HT患者300例作为对照组,2组性别构成及年龄差异均无统计学意义(P>0.05),分别收集2组患者的肝功能、肾功能、血糖、血脂、电解质水平,以及甲状腺功能、甲状腺抗体及维生素D水平等相关指标并进行分析。结果:2组患者的维生素D水平及维生素D缺乏率差异均无统计学意义(均P>0.05),但促甲状腺素(thyroid stimulating hormone, TSH)水平及亚临床甲状腺功能减退(甲减)发生率,HT组均显著高于对照组(P<0.05)。女性HT患者的维生素D水平更低且更易出现亚临床甲减(P<0.05)。维生素D不足或缺乏的患者较维生素D正常的HT患者更易出现亚临床甲减(P<0.05)。血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_3)是25-羟维生素D的保护因素[优势比(odds ratio,OR)=0.958,P=0.002],而血清TSH(OR=1.080,P=0.002)、女性(OR=1.167,P=0.001)均为25-羟维生素D的危险因素。结论:维生素D缺乏普遍存在于人群中,尤其女性群体更易出现维生素D缺乏,维生素D降低可导致HT患者TSH水平升高并增加亚临床甲减的发病率。     

Menin对SOX4基因表达调控的初步研究

目的 探讨menin蛋白对SOX4基因表达的调控作用.方法 构建包含SOX4启动子的报告基因载体,利用荧光报告基因系统分析menin对SOX4基因启动子活性的影响,运用Real-time PCR检测SOX4基因在MEN1-/-小鼠mef细胞和野生型mef细胞中的表达差异. 结果 与野生型mef细胞比较,MEN1-/-小鼠mef细胞中SOX4基因启动子活性明显升高;而在MEN1-/-小鼠mef细胞中转入MEN1基因后,SOX4基因启动子活性显著降低.SOX4基因在MEN1-/-小鼠mef细胞中的表达量是在野生型mef细胞中的2.5倍.结论 Menin蛋白可抑制SOX4基因表达.     

TNF-α致脂肪细胞胰岛素抵抗相关基因的克隆和鉴定

目的分离和克隆肿瘤坏死因子α(TNF-α)致3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的相关基因.方法分化成熟的3T3-L1脂肪细胞用TNF-α处理48 h后抽提总RNA,采用mRNA差异显示技术分离和克隆TNF-α引起脂肪细胞IR的基因,再通过半定量RT-PCR证实.结果经mRNA差异显示技术分离和克隆到10个已知基因的cDNA,3个已知表达序列标签(ESTs)片段和1个新的EST片段.半定量RT-PCR证实TNF-α上调3T3-L1脂肪细胞Synip基因和血浆淀粉样蛋白A3(SAA3)基因的表达.结论Synip基因和SAA3基因的表达升高可能与TNF-α致3T3-L1脂肪细胞IR和相关的心血管并发症有关.     

TNF-α致脂肪细胞胰岛素抵抗相关基因的克隆和鉴定

目的分离和克隆肿瘤坏死因子α(TNF—α)致3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的相关基因，方法分化成熟的3T3-L1脂肪细胞用TNF—α处理48h后抽提总RNA，采用mRNA差异显示技术分离和克隆TNF—α引起脂肪细胞IR的基因，再通过半定量RT—PCR证实。结果经mRNA差异显示技术分离和克隆到10个已知基因的cDNA，3个已知表达序列标签(ESTs)片段和1个新的EST片段。半定量RT—PCR证实TNF-α上调3T3-L1脂肪细胞Synip基因和血浆淀粉样蛋白A3(SAA3)基因的表达。结论Synip基因和SAA3基因的表达升高可能与TNF—α致3T3-L1脂肪细胞IR和相关的心血管并发症有关。