耐多药结核分支杆菌耐药分子机制的研究

目的　研究耐多药结核病 (MDR TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值及鉴定是否含有质粒。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术分析了 4 6株同时耐异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素 (SM)的多耐药临床分离株和 6 2株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。同时对 78株结核分支杆菌临床分离株按碱性溶菌法抽提分离并鉴定是否含有质粒。结果　以结核分支杆菌H37RV为对照 ,6 2株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常 ,其特异性为 10 0 %。KatG基因有 2株图谱异常 ,特异性为 96 8%。rPOB、KatG、rpsL基因突变率分别为 91 3%、6 0 9%、71 7%。结核分支杆菌 30株药物敏感株和 37株同时INH、RFP、SM的多耐药临床分离株均未提取分离与鉴定含有质粒。结论　结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。未发现结核分支杆菌含有质粒及由质粒介导的耐药机制。     

结核分支杆菌热休克蛋白65kD在大肠杆菌中表达

目的 构建能表达结核分支杆菌热休克蛋白65KD的工程菌。方法 设计引物并PCR扩增，目的基因克隆并转化，重组子经酶切和自动测序鉴定，阳性重组子转化表达宿主菌并受化学诱导后表达重组65kd蛋白。结果 65KD蛋白编码基因约1.6kd，重组子单酶切和双酶切证明目的的基因插入载体，3个测序反应覆盖99.1%目的基因；大肠杆菌表达重组65kd蛋白。结论 大肠杆菌表达系统是一种快速、简便获得单一结核分枝杆菌抗原的途径。     

γ-氨基丁酸B受体在CCl4诱导肝纤维化大鼠中的表达

目的:探讨γ-氨基丁酸(GABA)B受体在肝纤维化大鼠中的表达.方法:SD大鼠,腹腔注射50%CCl4制备大鼠肝纤维化模型.从第6周开始,每周1次取大鼠肝组织,得到不同肝纤维化程度的肝脏标本.一部分标本40g/L甲醛固定,常规石蜡包埋,连续4 μm切片,做组织病理学染色(HE、Masson)和免疫组织化学(α-SMA),以确定不同肝纤维化水平.另一部分标本-80℃保存用于提取肝脏RNA,逆转录得到cDNA,设计GABA(B)受体、α-SMA、TGF-β、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的引物,做实时荧光定量PCR,分析GABA(B)受体的表达与大鼠肝纤维化程度的相关性.结果:建模7 wk时,α-SMA、TGF-β、胶原Ⅰ和胶原Ⅲ较6 wk分别增加19.2倍、2.1倍、37.5倍和183.5倍.GABA(B)受体基因表达也明显升高,升高量达到116.2倍.6 wk对照组GABA(B)受体基因表达是模型组的2倍.到12wk初步形成假小叶时,只有α-SMA和胶原Ⅰ增加显著,分别为21.6倍和20.1倍.TGF-β和胶原Ⅲ变化不明显.其他时间点基因表达与6 wk模型相比无明显变化.结论:GABA(B)受体可能参与了肝纤维化的发生.在肝纤维化晚期,细胞外基质的合成主要以胶原Ⅰ为主,胶原Ⅲ次之.α-SMA的表达与肝纤维化水平呈正相关.     

临床护理路径在先天性肥厚性幽门狭窄患儿中的应用效果

目的探讨临床护理路径在先天性肥厚性幽门狭窄患儿围手术期的护理效果。方法将100例先天性肥厚性幽门狭窄患儿随机分为实验组和对照组各50例,实验组采用临床护理路径方法,对照组采用常规护理方法。结果实验组患儿的住院时间、住院费用明显低于对照组,家长对疾病相关知识的掌握情况及满意度均有较大提高,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论临床护理路径应用于先天性肥厚性幽门狭窄患儿,有利于提高医疗护理工作质量,缩短住院时间,降低住院费用,提高病人对护理质量的满意度及健康知识的认知度。     

耐吡嗪酰胺结核分枝杆菌基因突变研究

目的 研究吡嗪酰胺酶编码基因pncA突变与结核分枝杆菌吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)耐药的关系.方法 将临床分离的36株结核分枝杆菌进行常规PZA药敏试验和pncA基因序列分析.采用绝对浓度法进行PZA药敏试验;PCR扩增pncA基因及其上游、下游碱基序列,纯化回收PCR产物克隆到T载体并进行全自动测序.结果 36株临床分离株中25株PZA耐药,11株PZA敏感.5株高耐PZA(PZA浓度为250 μg/ml)临床分离株4株pncA基因突变;20株低耐PZA(PZA浓度为50 μg/ml)6株pncA基因突变;25株耐PZA结核分枝杆菌pncA基因突变率为40.0%.3株PZA敏感临床分离株pncA基因出现突变、其中2株为同义突变.11株耐PZA结核分枝杆菌pncA基因上游调控序列突变,其中5株同时有pncA基因突变;2株PZA敏感结核分枝杆菌pncA基因上游序列突变.结论 pncA基因突变可引起结核分枝杆菌对PZA耐药,但pncA基因突变只是结核分枝杆菌耐PZA的一种机制,可能还存在PZA的其他耐药机制.     

结核分支杆菌耐链霉素耐药基因的检测

目的：探讨结核分支杆菌对链霉素(SM)的耐药分子机制,评估应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）技术检测rpsL基因突变在结核分支杆菌对SM耐药性测定中的应用价值。方法：采用PCR－SSCP方法对71株结核分支杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株,耐SM或含耐SM耐多药株36株）和30例耐SM肺结核病人痰标本的rpsL基因突变进行检测。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rpsL基因PCR扩增产物267bp片段SSCP图谱正常;36株耐SM分离株中,26株rpsL基因SSCP图谱异常,其突变率为72．2％。30例耐SM肺结核病人痰标本有22例PCR扩增阳性,14例SSCP图谱与H37RV株有差异,rpsL突变率为63．6％。结论：rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,PCR－SSCP技术可以快速、准确地检测结核分支杆菌rpsL基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

中医药治疗放射性直肠炎的临床进展

放射性直肠炎(Radiation Proctitis,RP)是腹盆部肿瘤放疗最常见的不良反应之一,本文对近年来中医药治疗放射性直肠炎的临床研究进行综述,认为其病在肠腑,涉及脾胃,久及肝肾,以虚实夹杂为其主要病机,湿、热、火、毒、瘀为其主要病理因素,辨证分型主要可分为湿热内蕴型、寒热错杂型、脾虚湿滞型、脾肾阳虚型、阴虚津亏型,治疗上以补虚泻实为大法,根据寒热虚实之偏重辨证使用中药内服,此外,中药灌肠、针灸、中药热熨、耳穴压豆、中药熏洗等中医疗法同样显示出了一定的临床疗效。     

卡介菌及其衍生制品鉴别实验用BCG DNA国家参考品的研制

目的建立BCG DNA定性用国家参考品,供BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用。方法以紫外分光法检测260nm和280nm的吸光度值,比较A260/280的比值,考量国家参考品BCG DNA的纯度指标;以多重PCR法检测BCG DNA特异性缺失区RD1区是否存在,验证所制备的BCG DNA可作为定性用国家参考品,组织3家实验室对该参考品进行验证;并在不同时间,观察其稳定性。结果所制备的BCG DNA A260/286=1.96〉1.8;BCG DNA国家参考品经多重PCR扩增BCG缺失区RD1的产物为约200bp DNA片段,与卡介菌巴斯德株DNA结果相同,3家实验室的验证结果一致,该制品经37℃4周,4℃3个月、6个月、12个月放置后,PCR结果不变。结论该BCG DNA制品纯度高,稳定,可作为BCG DNA定性用国家参考品,在卡介苗相关制品的质量控制中,做为BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用的国家参考品。