大鼠脂肪和骨髓来源间充质干细胞基本生物学特征的比较

目的:分离大鼠脂肪和骨髓来源的间充质干细胞,比较两种间充质干细胞的生物学特征。方法:实验于2003-09/2006-11在广州市第一人民医院、湘雅医院中心实验室完成。取SD大鼠的股骨、胫骨、肱骨及腹股沟处脂肪垫进行骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞的分离。将骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞在含10%血清,1%双抗的低糖DMEM培养基,37℃、体积分数为0.05的CO2条件下进行培养。在细胞达到80%～90%融合时,使用0.25%胰酶消化传代。传代至第3代使用倒置显微镜观察骨髓和脂肪两种不同来源细胞的传代后的形态、贴壁、生长增殖、集落等情况。取消化传3代的两种细胞分别制成单细胞悬液进行细胞贴壁率的检测,贴壁率=贴壁细胞总数/接种细胞总数×100%。取第2代和第5代骨髓间充质干细胞和脂肪间充质干细胞以1×107L-1密度培养。每天同一时间,随机抽取5孔细胞,加入5%噻唑兰20μL/孔,培养4～6h,吸出孔内液体,每孔加150μL二甲基亚砜震荡10min,酶联免疫测定仪测定波长490nm处的吸光度,取5孔吸光度的均值,以时间为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制生长曲线。采用流式细胞仪检测细胞表面CD29、CD34、CD44标记,免疫化学检测细胞CD29、CD34、CD44。结果:①在单位质量骨髓和脂肪组织中获得的间充质干细胞数量相当。两种细胞形态均为条索样,呈成纤维细胞形态。②应用直线相关分析,考察骨髓贴壁率与脂肪贴壁率之间的关系,相关系数r=0.999,决定系数r2=0.997(F=5862.949,P<0.001),两贴壁率之间有直线相关关系,不同的时间点两种细胞的贴壁率相似,并且有同向变化的趋势。③脂肪间充质干细胞的增殖能力与骨髓间充质干细胞相当。④脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞表面表达CD29、CD44,不表达CD34。结论:自大鼠脂肪中可提取出与骨髓间充质干细胞生物学特征类似的脂肪间充质干细胞。     

特定培养基条件下大鼠脂肪间充质干细胞体外定向软骨细胞的分化

目的:体外诱导大鼠脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化,并对分化细胞进行相应鉴定,观察脂肪间充质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:实验于2005-05/2006-05在湘雅医院中心实验室完成。①取大鼠腹股沟脂肪,消化分离脂肪间充质干细胞进行原代培养。②流式细胞仪检测第3代脂肪间充质干细胞表面CD29,CD34,CD44表达。③传3代细胞进行微团培养1d,换用含体积分数为0.01的新生牛血清、10μg/L的转化生长因子β1、6.25mg/L的胰岛素、6.25mg/L的转铁蛋白、1×10-7mol/L的地塞米松、50mg/L的维生素C的高糖DMEM诱导液,为特定培养条件。④在诱导后4,7,14d应用阿尔新兰染色、蕃红O/固绿染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学评价软骨形成情况。⑤反转录-聚合酶链反应在诱导后0和14d检测脂肪间充质干细胞前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA的表达。结果:①脂肪间充质干细胞的形态特征:原代脂肪间充质干细胞呈短梭形、梭形及多角形,3代后呈均一长梭形。②脂肪间充质干细胞的表面标志鉴定:脂肪间充质干细胞表达CD29,CD44,基本不表达CD34。③脂肪间充质干细胞诱导后的形态特征:脂肪间充质干细胞经诱导后,由长梭形转变为三角形、多角形或短梭形,逐渐聚集成结节。④脂肪间充质干细胞诱导后的细胞化学染色结果:诱导后脂肪间充质干细胞胞外基质阿尔新兰染色、蕃红O/固绿染色、和Ⅱ型胶原免疫细胞化学着色阳性。⑤反转录-聚合酶链反应检测结果:反转录-聚合酶链反应检测未诱导脂肪间充质干细胞不表达前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA基因,而诱导后的脂肪间充质干细胞表达前Ⅱ型胶原蛋白和聚集蛋白聚糖mRNA基因。结论:脂肪间充质干细胞在由转化生长因子1、胰岛素、转铁蛋白等组成的特定培养基条件诱导下可以定向软骨细胞分化。     

纳米羟基磷灰石对人骨髓基质干细胞体外成骨活性的影响

目的：观察人骨髓基质干细胞在纳米羟基磷灰石材料上的生长、分化特点以及成骨细胞形态. 方法：实验于2004-03/2005-07在中南大学湘雅医院医学实验室完成.①实验方法：采用密度梯度离心的方法分离人骨髓基质干细胞,加入含体积分数为0.1的新生牛血清的低糖DMEM完全培养基中作原代培养,细胞长至90%汇合时传代,取培养第3代细胞接种于纳米羟基磷灰石（卫生部肝胆肠研究中心纳米课题组提供）表面,并加入含1 mmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10 mmol/L β-甘油磷酸钠的培养基中诱导分化、培养.②观察指标：复合培养第2,4,6,8天后采用MTT法检测细胞增殖情况;复合培养7 d后行钙-钴法成骨细胞染色观察细胞分化情况;培养8 d后应用扫描电子显微镜观察细胞在材料上的生长情况. 结果：MTT法检测出的吸光值随着培养时间的增加而增大（P＜0.05）;经加入特定的成骨诱导体系培养7 d后,附着于材料的骨髓基质干细胞具有典型的成骨细胞形态,经钙-钴法染色后细胞胞浆中可见灰黑色颗粒或块状沉淀的阳性反应,细胞形态也多呈多角形或短矩形;培养8 d后扫描电镜可观察到材料孔隙内有细胞长入. 结论：人骨髓基质干细胞在纳米羟基磷灰石材料上生长良好,提示纳米羟基磷灰石适于骨髓基质干细胞的生长、分化,可作为骨组织工程的细胞外支架材料.     

奥美拉唑肠溶胶囊人体药代动力学和相对生物利用度研究

目的 :研究奥美拉唑肠溶胶囊在健康人体内的药代动力学和相对生物利用度。方法 :采用 HPL C法测定 8名男性健康志愿受试者随机交叉一次口服康恩贝产 (受试品 ,商品名金奥康 )和瑞典产 (参比品 ,商品名洛赛克 )奥美拉唑胶囊各 40 mg的血药浓度 ,进行人体生物利用度研究。结果 :两种胶囊的药—时曲线和药代动力学特征均符合—室开放模型。测得主要药代动力学参数为 :试验胶囊和参比胶囊从胃肠吸收的滞后的时间 (L.T)分别为 1.3 6± 0 .92 h和 0 .90± 0 .42 h;Cmax分别为 0 .2 8±0 .2 0 mg/L 和 0 .3± 0 .2 0 mg/L;;Tmax分别为 3 .69± 1.46h和 2 .44± 0 .74h;AUC分别为 1.71± 1.2 0 mg/L· h和 2 .44±0 .74mg/L· h;消除半衰期分别为 2 .3 4± 0 .61h和 2 .2 2± 0 .70 h;结论 :奥美拉唑试验胶囊的相对生物利用度为 10 2 .5± 16.1%。经统计分析与参比胶囊比较为等效     

Complement activation in thrombotic thrombocytopenic purpura

Summary. Background: Ultra‐large von Willebrand factor and deficiency of its cleaving protease are important factors in the events leading to thrombotic microangiopathy; however, the mechanisms involved are only partly understood. Whereas pathological activation of the alternative complement pathway is linked to atypical hemolytic uremic syndrome, the role of complement activation in thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP) is unknown. The aim of this study was to investigate whether signs of complement activation are characteristic of TTP. Patients and methods: Twenty‐three patients with TTP (18 women, median age 38 years) and 17 healthy controls (13 women, median age 38 years) were included. Complement parameters (C3, Factors H, I, B and total alternative pathway activity) together with complement activation fragments (C3a) or complexes (C1rs‐INH, C3bBbP, sC5b9) were measured by ELISA or RID. ADAMTS13 activity and anti‐ADAMTS13 inhibitory antibodies were measured by the VWF‐FRET73 assay. Results: Increased levels of C3a, and SC5b9 were observed in TTP during acute episodes, as compared with healthy controls. Decreased complement C3 levels indicative of complement consumption occurred in 15% of acute TTP patients. Significant decrease of complement activation products C3a and SC5b9 was observed during plasma exchange (PEX). The sustained presence of anti‐ADAMTS13 inhibitory antibodies in complete remission was associated with increased complement activation. Conclusion: These data document in an observational study the presence of complement activation in TTP. Further investigation is needed to determine its potential pathogenetic significance.     

4-取代17β-羟基在-7α-甲基-4-雌烯-3-酮的合成和抗生育活性

为了寻找抗生育药物,从17β-羟基-7α-甲基-4-雌烯-3-酮经17β-羟基-7α-甲基-4β,5β-环氧雌烷-3-酮合成了七个4-位取代的目标化合物:4,17β-二羟基-7α-甲基-4-雌烯-3-酮及其17-乙酸酯、4-甲氧基-17β-羟基-7α-甲基-4-雌烯-3-酮及其17-乙酸酯、4-氯-17β-羟基-7α-甲基-4-雌烯-3-酮及其17-乙酸酯和4-溴-17β-羟基-7α-甲基-4-雌烯-3-酮。这些化合物均可竞争性地与人蜕膜孕酮受体结合,并能抑制蜕膜细胞的发育,对大鼠具有显著的抗着床活性。     

Adenoid cystic (cylindromatous) carcinoma of the trachea: an ultrastructural study

Adenoid cystic (cylindromatous) carcinoma of the trachea is a rare tumour. The histological features in previously reported cases have been widely variable; only one previous ultrastructural study has been undertaken. Three cases are reported in the present study and the ultrastructural findings are reviewed. The tumours were composed of two types of cells, mature ductal and immature myoepithelial. The cylindromatous stroma appeared as a fibrillar substance which was also found between the undifferentiated myoepithelial cells and appeared to be a product of these cells.