转化生长因子β的临床应用及其前景

转化生长因子β是多功能的细胞因子，参与了体内多种病理和生理过程，并在创伤愈合，免疫抑制等方面具有重要的临床应用前景。局部或全身应用的ＴＧＦβ已被用于软组织修复，骨修复和缺血损伤修复，全身应用的ＴＧＦβ还可用于自身免疫疾病的防治；而ＴＧＦβ拮抗剂则可望应用于慢性炎性纤维化，艾滋病和其他疾病。     

拟TGF-β样多肽对于成骨细胞作用的研究

目的：了解合成的拟TGF—β样多肽P18对于成骨细胞株MC3T3-E1的增殖及分化的影响。方法：MTT法观察P18对于培养MC3T3-E1细胞株的增殖的影响,竞争性半定量RT—PCR了解其对I型胶原表达的作用,并观察了其对于成骨细胞碱性磷酸酶活性的作用。结果：P18增加成骨细胞株MC3T3-E1的I型胶原的表达,但对于碱性磷酸酶活性无明显影响,多肽对于MC3T3-E1细胞增殖的影响依培养条件不同而异。结论：P18对于成骨细胞的作用与TGF-β类似,由于其还具有HA结合活性,在HA骨修复材料的改进以及种植体涂层修饰方面有着广阔的应用前景。     

TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的 观察TGFβ1正、反义基因转染^60Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1、mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法 采用脂质体介导法进行基因稳定转染,转染细胞经PCR,DNA dot blot鉴定和RNA dot blot分析。结果 选择5Gy照射细胞,采用Lipofect AMINEuqf TGFβ1正、反义基因表达载体pMAM-TTGFβ1pMAMneo-AntiTGFβ1转入HELF,转染细胞经G418抗性筛选出来,在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性,且可用neo基因转导的PCR引物扩增出276bp的阳性片段。对提取的RNA地高辛标记的TGFβ1探针和α1（Ⅰ）寡核苷酸探针经RNA dot blot分析表明,转染pMAMneo-AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平下降,而转染pMAMneo-TGFβ1的细胞其TGFβ1 mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA,前者表达水平比未转染细胞低,后者则略高。结论 TGFβ1反义基因转染^60Co γ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1 mRNA含量水平减少,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低。     

北京生物工程研究所(张兆山);北京基础医学研究所(龙建银、王会信)TGF β1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性.方法通过支气管插管与滴注的方式进行.结果检测分析表明,转基因后1.5 d,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性;第5.5天,PCR扩增67%(2/3)阳性.RNA dot blot分析表明,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1 mRNA含量降低.转染35 d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高(P＜0.01),但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低(均为P＜0.01).用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达.结论由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法,它可以减缓肺纤维化的发生;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径.     

细胞生长抑制测定TGF-β1生物活性

目的：选择检测转化生长因子β１（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ β１,ＴＧＦ－β１）的灵敏可靠的方法。方法：用水貂肺上皮细胞（ＣＣＬ－６４）作为抑制细胞,结合＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ法,对照标准含量之ＴＧＦ－β１,分别对上述方法性能进行了比较。结果：＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法较ＴＭＭ法灵敏度,稳定性好。结论：＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＴＧＦ－β１活性,简便实用,经济可靠,适于推广     

基因转移人TGF-β1在NIH/3T3细胞中表达鉴定

目的：研究转移人转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）在真核细胞系中蛋白表达。方法：借助真核质粒表达载体,将人ＴＧＦ－β１转移入小鼠成纤维细胞株（ＮＨ／３Ｔ３）细胞中,经Ｇ４１８筛选,克隆扩增,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ、ＰＣＲ、ＰＴ－ＰＧＲ鉴定,并经水貂肺上皮细胞（ＣＣＬ－６４）生长抑制法,对克隆细胞分泌ＴＧＦ－β１蛋白进行活性检测。结果：证实了重组人ＴＧＦ－β１基因在ＮＩ     

人转化生长因子β1基因在pET表达系统中的表达

目的：研究人转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）成熟肽基因在大肠杆菌中的表达。方法：利用ｐＥＴ－３ｂ载体，分别从宿主、培养基、诱导时间及转录终止子的距离等方面对ＴＧＦβ１的表达进行了优化。结果：ＴＧＦβ１在大肠杆菌中获得一定程度的表达，并存在于包涵体中。结论：利用ｐＥＴ表达系统，可使ＴＧＦβ１基因在大肠杆菌胞内获得表达。     

TGFβ1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的　探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性。方法　通过支气管插管与滴注的方式进行。结果　检测分析表明 ,转基因后 1 5d ,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性 ;第 5 5天 ,PCR扩增 6 7% (2 3)阳性。RNAdotblot分析表明 ,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1mRNA含量降低。转染 35d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明 ,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高 (P <0 0 1) ,但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低 (均为P <0 .0 1)。用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠 ,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达。结论　由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法 ,它可以减缓肺纤维化的发生 ;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法 ,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径。