三氧化二砷诱导人鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )体外抑制人鼻咽癌细胞株 (CNE1)增殖及诱导凋亡的作用。方法 :以不同浓度的As2 O3 处理CNE1,用四甲基噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖情况 ,细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量。结果 :As2 O3 明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖 ,其抑瘤作用优于顺铂 (DDP)和 5 -氟尿嘧啶 (5 FU)。As2 O3 作用于细胞后 ,可见典型凋亡细胞的形态学改变 :细胞核固缩 ,染色质凝集 ,核碎裂 ,凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA线条图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。结论 :As2 O3 可明显抑制人鼻咽癌细胞株CNE1的生长和促进细胞凋亡的作用     

重组人血管内皮抑制素对鼻咽癌HNE-1细胞株体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究重组人血管内皮抑制素（rh-Endostatin，Endostar，恩度）对人鼻咽低分化鳞癌HNE-1细胞的增殖、迁移及体外血管生成拟态的影响。方法：用不同浓度恩度（0～50μg／m1）处理HNE-1细胞，MTT法检测HNE-1细胞增殖活性的变化；创伤修复实验检测细胞迁移能力的变化。在Matrigel上接种HNE-1细胞，观察HNE-1细胞能否形成血管网状结构及其特点；体外管状形成抑制试验检测恩度对HNE-1细胞管道形成能力的影响。结果：恩度（1-50μg／m1）组的OD值与对照组比较无明显统计学差异（P〉0．05），但可以显著降低HNE-1细胞的迁移速度（P〈0．01），且与浓度呈负相关（r=-0．983，P〈0．01）。HNE-1细胞在Matrigel上培养能形成血管网状样结构，并能与内皮细胞连接共同构成马赛克样血管网状结构；恩度能抑制HNE。1细胞体外管道形成（P〈0．01），其管状结构数量与恩度浓度呈负相关（r=-0．978，P〈0．01）。结论：HNE-1细胞具有血管生成拟态及与内皮细胞共同形成马赛克血管的能力，恩度能够抑制HNE-1细胞的迁移和体外血管生成拟态形成。     

乳腺癌中miR-221、miR-222表达水平对GATA3和FOXA1蛋白的影响及其作用机制

目的： 探讨乳腺癌中miR-221和miR-222（miR-221/222）表达水平对GATA结合蛋白3（GATA3）和叉头框蛋白A1（FOXA1）表达的影响及其作用机制。方法： 收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2020年1月—2021年5月经手术切除的86例乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织标本,分别采用茎环引物实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组织化学方法检测癌组织和相应癌旁组织中miR-221/222的表达水平及GATA3、FOXA1蛋白的表达水平,分析其与临床病理指标的关系。进一步在5种乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、SKBR3、MDA-MB-231和BT-549）中转染miR-221/222 mimics后,采用qPCR检测各细胞中miR-221/222的表达水平;采用Western blot检测转染后MCF-7细胞中GATA3、FOXA1、雌激素受体-α（ER-α）和钙黏蛋白E（E-cadherin）的表达;用细胞划痕和迁移侵袭实验检测转染后MCF-7细胞修复和迁移侵袭能力。结果： 在乳腺癌组织中,miR-221/222的表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织（P=0.00）。miR-221/222表达水平在FOXA1、GATA3、ER-α及孕激素受体（PR）阴性表达组均显著高于阳性表达组（P<0.01）;在Her-2阳性和高表达Ki-67的乳腺癌中较Her-2阴性和低表达Ki-67组显著升高（P<0.05）;在三阴性和Her-2阳性亚型乳腺癌中显著高于Luminal A和Luminal B1型乳腺癌（P=0.00）;而miR-221/222水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及TNM分期无显著相关关系（P>0.05）。在5种乳腺癌细胞系中,miR-221/222在MCF-7细胞中均低表达。与对照组相比,在MCF-7细胞中瞬时转染miR-221/222 mimics后miR-221/222表达显著升高（P<0.05）,且内源性的GATA3和FOXA1蛋白表达被抑制（P<0.01）,上皮细胞相关分子ER-α和E-cadherin表达显著下降（P<0.01）;划痕修复能力和迁移侵袭能力均显著增强（P<0.01）。结论： miR-221/222可能通过下调GATA3和FOXA1的表达促进乳腺癌的迁移和侵袭。     

血管内皮生长因子在胃癌中的 表达及其临床意义

目的探讨胃癌中人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达与胃癌的发生、发展的关系,及作为分子靶点指导胃癌患者临床用药的意义。方法采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)的方法检测103例胃癌患者HER2及VEGF的状态,同时联合荧光原位杂交的方法检测HER2的状态,并与患者的临床资料进行相关性分析。结果①胃癌中HER2扩增率约为11%(11/103),在阳性病例中IHC与荧光原位杂交(fluorescentin situ hydridization,FISH)方法的符合率为90%,具有相关性(P<0.01);②HER2的扩增与胃癌的病理分级、淋巴结转移与否及Lauren分型相关(P<0.05);③胃癌中VEGF表达阳性率约为24%(25/103),VEGF的阳性表达与肿瘤的浸润深度、病理分级、Lauren分型相关(P<0.05);④HER2的表达与VEGF的表达不相关(P>0.05)。结论 HER2、VEGF的阳性表达与胃癌特别是分化较好的胃管状腺癌的发生、发展密切相关。联合检测HER2及VEGF在胃癌(特别是肠型胃癌)中的表达对了解胃癌的发生、发展,及靶向药物曲妥珠单抗和贝伐单抗的选择具有重要意义。     

血清标志物CYFRA21-1与肿瘤

研究发现细胞角蛋白19片段抗原21-1( CYFRA21-1)含量在多种恶性肿瘤患者血清中特异性升高.作为一种上皮来源性质的肿瘤标志物,血清CYFRA21-1水平检测对于恶性肿瘤的筛查诊断、疗效评估、复发监测和预后判断具有重要的临床应用意义.     

人参皂苷Rg3对人鼻咽癌HNE-1细胞增殖和血管生成的影响

 目的 研究人参皂苷Rg3（ginsenoside Rg3）对人鼻咽低分化鳞癌HNE-1细胞的增殖、迁移及体外血管生成的影响。方法 用不同浓度人参皂苷Rg3处理HNE-1细胞,MTT法检测HNE-1细胞增殖活性;创伤修复实验检测细胞迁移能力;观察HNE-1细胞能否在Matrigel上形成血管网状结构及其特点;体外管道形成抑制试验检测不同浓度人参皂苷Rg3对HNE-1细胞管道形成能力的影响。结果 不同浓度人参皂苷Rg3（50、100、200μg/ml）对HNE-1、CRL-2480细胞均有一定的增殖抑制作用,呈浓度依赖性趋势,无时间依赖性,差异均无统计学意义（P>0.05）;人参皂苷Rg3（25、50、100、200μg/ml）可以显著降低HNE-1细胞迁移速度,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.001）,与浓度呈负相关(r=-0.964;P<0.001);HNE-1细胞在Matrigel上培养能形成血管网状样结构;人参皂苷Rg3能抑制HNE 1 细胞体外管道形成（P<0.01）,其管状结构数量与人参皂苷Rg3浓度呈负相关（r=-0.928;P<0.01）。结论 人参皂苷Rg3有一定的抗HNE-1细胞增殖作用;HNE 1细胞具有血管生成拟态;人参皂苷Rg3能够抑制HNE-1细胞的迁移和体外血管生成拟态的形成。     

C2orf40蛋白在鼻咽癌中的表达及意义

目的 探讨C2orf40蛋白在鼻咽癌组织和细胞中的表达及其与细胞分化、临床病理特征的关系.方法 收集2001年1月至2003年12月在汕头大学医学院附属肿瘤医院诊断为鼻咽癌的122例病理活检组织石蜡标本及其病历资料,另外收集25例慢性鼻咽炎的石蜡标本作为对照.采用免疫组织化学法检测C2orf40蛋白表达情况,同时分析C2orf40表达水平与临床病理特征的关系.体外实验应用Western blotting对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和C666-1进行C2orf40蛋白表达的测定,分析C2orf40表达与细胞分化程度的关系.结果 C2or40在对照组的阳性率为96.0％(24/25),且88.0％为高表达,病例组阳性率为58.2％ (71/122),但82.0％为低表达,二者差异有统计学意义(U=255.500,P＜0.001).C2orf40表达与淋巴结转移分期(N分期)和临床分期呈负相关(r=-0.058,P＜0.001;r=-0.202,P=0.026).C2orf40在高分化鼻咽癌细胞株CNE1中呈高表达,在低分化鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1中呈低表达.结论 C2orf40蛋白表达下调与肿瘤细胞分化、淋巴结转移和临床分期相关,是鼻咽癌发生、发展的分子事件之一,可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点.     

Prohibitin在放射照射诱导鼻咽癌细胞凋亡中的表达及亚细胞定位的变化

目的:探讨放射照射诱导鼻咽癌细胞凋亡中prohibitin(PHB)的表达及亚细胞定位的改变。方法:体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1和CNE-2,应用流式细胞术测定4 Gy X线照射前后CNE-1和CNE-2的凋亡率,Western blot检测照射前后PHB和凋亡相关蛋白Bax与P53表达水平的变化,同时应用免疫荧光染色分析上述蛋白亚细胞定位的改变。结果:X线照射后24 h,CNE-1和CNE-2细胞凋亡率、PHB蛋白表达以及凋亡相关蛋白Bax与P53的表达均较照射前显著增加(P<0.05或P<0.01)。PHB和P53在照射前均主要定位于细胞核,少量分布于胞浆,照射后胞浆荧光强度明显增加,细胞核荧光强度下降,表现为出核转运。Bax在照射前后未发现明显的细胞定位改变。结论:放射照射诱导的鼻咽癌细胞凋亡可能与PHB和P53表达及亚细胞定位改变有关。     

肺癌肿瘤抑制因子1在雌激素受体、孕激素受体不同表达乳腺癌患者中的临床意义

目的分析肺癌肿瘤抑制因子1（tumor suppressor in lung cancer 1,TSLC1）与乳腺癌临床病理和预后关系。方法收集女性乳腺癌组织125例,采用免疫组织化学技术检测TSLC1表达。结果TSLC1主要表达在乳腺癌细胞质,其阳性率为38.4%（48/125）,与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、人类表皮生长因子受体 2（human epidermal growth factor receptor-2,HER-2）表达无关,而与雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）表达相关（P<0.001）。ER+（阳性）患者TSLC1阳性率低于ER-（阴性）患者[28.4%（25/88）与62.2%（23/37）];同样,PR+患者TSLC1阳性率低于PR-患者[24.3%（17/70）与56.4%（31/55）]。Z检验显示在ER+PR-的乳腺癌患者中TSLC1-和TSLC1+患者3年生存率差异有统计学意义（83.3%与14.3%,P=0.007）,总体生存曲线差异有统计学意义（P=0.003）。Cox多因素回归分析,TSLC1不是ER+PR-乳腺癌患者独立的危险预后因素（比值比10.696,95%可信区间0.988～115.843,P=0.051）。结论TSLC1在乳腺癌致病机制中与ER、PR相关,可作为临床ER+PR-乳腺癌患者新的预后指标。     

CEA与CA15-3联合检测在乳腺癌诊断中的临床意义

目的：探讨癌胚抗原（carcinoembryo antigen,CEA）与肿瘤相关糖类抗原15-3（carbohydrate antigen15-3,CA15-3）联合检测在乳腺癌诊断中的应用价值。方法：采用电化学发光方法检测116例乳腺癌患者与94例乳腺良性肿瘤患者血清中CEA与CA15-3水平并进行统计学分析。结果：乳腺癌患者血清中CEA与CA15-3水平明显高于乳腺良性肿瘤对照组（P〈0.01）;二者联合检测诊断敏感性显著提高（P〈0.05）;治疗后CEA与CA15-3含量与治疗前相比显著无明显变化（P〉0.05）。结论：CEA与CA15-3联合检测可提高乳腺癌诊断敏感性,对临床诊断与疗效评价有一定的应用价值。