pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达

目的：构建pEgr-P16重组质粒并检测其在人食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导表达。方法：人P16cDNA基因连接到Egr-1启动子的下游构建成pEgr-P16重组质粒，利用脂质体介导转染人EC9706细胞，用Western blot方法检测不同剂量γ射线照射后被转染细胞中P16的表达。结果：酶切鉴定证实pEgr-P16重组质粒构建正确。被pEgr-P16重组质粒转染的人食管癌EC9706细胞经不同剂量γ射线照射后，P16基因表达均高于未照射组。结论：γ射线可诱导pEgr-P16重组质粒在人EC9706细胞中表达增强。     

乙肝病毒表面蛋白及其抗体复合物对人精子功能的影响

目的：研究乙肝表面蛋白（HBs）与其单克隆抗体（MAb）复合物对人精子功能的影响,探讨乙肝病毒（HBV）损害人精子的可能机制。方法：对HBs-HBsMAb孵育后的精子活力进行分析,采用JC-1染料结合流式细胞术监测人精子线粒体膜电位（MMP）。结果：人精子在体外与25μg/mL的HBs和不同浓度（20、40、80μg/mL）HBsMAb共孵育后,活力好的精子百分比例显著下降（P〈0.01）,MMP也下降。结论：HBV可能通过HBs-HBsMAb对人精子功能产生负面影响。     

pEgr-TNFα基因联合放疗抑制食管癌细胞生长的实验研究

背景与目的研究pEgr-TNFα重组质粒在稳定转染的食管癌细胞中的辐射诱导表达,及其联合放射治疗抑制食管癌细胞生长的效果。材料与方法将脂质体包裹的pEgr-TNFα重组质粒,转染食管癌细胞系EC9706中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞;采用ELISA方法检测0.075Gy和2Gy剂量X射线诱导后TNFα的表达;观察该工种剂量X射线照射后,EC9706细胞的增长情况。结果pEgr-TNFα重组质粒转染EC9706细胞,并获得稳定转染的细胞;大剂量X射线照射和低剂量X射线照射均可诱导TNFα表达增强,为对照组的6~6.3倍(P<0.01);稳定转染的细胞经0.075Gy和2Gy X射线照射,8d后细胞数明显低于未转染细胞组(P<0.01)和稳定转染的假照射组(P<0.01)。结论体外pEgr-TNFα基因-放射联合治疗有明显的抑制食管癌细胞生长的作用。     

丹参诱导人脐血间充质干细胞分化为神经样细胞

目的探讨丹参注射液对人脐血单个核细胞来源的间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的诱导作用。方法利用FACScan流式细胞仪检测MSCs表面抗原CD29、CD44、CD59、CD33,用丹参注射液诱导人脐血原代细胞和脐血来源的间充质干细胞向神经细胞方向分化,并与神经生长因子(NGF)和神经常苷脂(GM1)的诱导作用比较,用免疫细胞化学方法对分化和未分化细胞进行鉴定。结果人脐血原代细胞中MSCs的表耐标记CD29、CD44、CD59阳性率分别为10.7%、37.27%和66.67%,而造血细胞的表面标记CD33阳性率仅为0.33%。人脐血传代细胞(第5代)MSCs的表面标记CD29、CD44、CD59的阳性率分别为40.2%、70.5%和95.4%。原代培养的贴壁细胞形态呈大小不等圆形和条形,用丹参诱导可表达神经细胞的标记。传代培养的间充质干细胞,可维持在未分化状态稳定增殖。用丹参可诱导这种细胞向神经样细胞分化,表达神经干细胞标记nestin,神经元的标记β-Ⅲ类神经微管(β-TubulinⅢ)、神经微丝(NF)和神经胶质细胞的标记胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。与NGF和GMI的诱导作用比较,细胞形态类似,表达相同的神经细胞标记,丹参的诱导速度较快,诱导后细胞表达神经元标记的比例较高。结论人脐血是MSCs的来源之一,丹参可诱导人脐血干细胞分化为神经样细胞,丹参可作为神经诱导剂,人脐血干细胞可作为神经干细胞的来源。     

人精子携带的HBs和HBc基因在早期胚胎细胞中的蛋白表达

背景与目的:探讨由人精子带入受精卵中的HBs和HBc基因能否在早期胚胎细胞中进行蛋白表达.材料与方法:人精子经重组质粒pIRES2-EGFP-HBV转染后,与金黄地鼠去透明带卵母细胞离体受精,选择带绿色荧光的2-细胞胚,用免疫荧光技术检测HBs和HBc基因在胚胎细胞中的蛋白表达,用ELISA方法分别对HBsAg和HBcAg进行半定量和定性分析.结果:在带绿色荧光的2-细胞胚中免疫荧光检测可见清楚的HBsAg和HBcAg阳性信号;ELISA结果表明,单个2-细胞胚内HBsAg的量小于0.064 ng/ml,对HBcAg的检测得到阳性结果.结论:人精子携带到卵内的HBV基因可在早期胚胎细胞中表达表面抗原和核心抗原.     

黄芪和何首乌抗环磷酰胺对胸腺抑制的超微结构研究

文中研究观察了单用黄芪(A)、何首乌(P)和两葑联用(AP)对环磷酰胺引起胸腔抑制性改变的影响。结果环磷酰胺对照组(C)的胸腺呈明显退行性改变。A、P和AP组与C组相比．胸腺细胞多呈圆表或椭圆形，核大胞质少，游离核糖体和线粒体清楚；上皮性网状细胞和巨噬细胞内粗面内质网多呈扁平囊状，线粒体嵴清晰可见；交错突细胞内线粒体发育良好；上皮性网状细胞、巨噬细胞和交错突细胞各自与胸腺细胞形成玫瑰花结也较常见。上述变化在AP组更为明显，与O组比较无明显差异。提示黄芪和何首乌对环磷酰胺所致胸腺抑制性改变有拮抗作用，两药联用效果更佳。     

树突状细胞对LAK细胞抗人鼻咽癌细胞的促进作用

本研究对人血树突状细胞(Dendritic cell,DC)联合LAK(Lymphokine Activated Killer cell,LAK)细胞和IL-2对人鼻咽癌细胞株Hep-2的抗肿瘤活性进行了体外观察。实验分为LAK组、LAK+DC组和LAK+DC+IL-2组;效靶比例分别采用10:1和20:1二种。37℃、5％CO_2、饱湿条件下培养48h后,用中性红摄入比色法检测细胞毒活性。结果:各组的细胞毒活性依次为LAK+DC+IL-2组>LAK+DC组>LAK组(P<0.001),随着效靶比例升高,各组细胞毒活性增强(P<0.01).表明DC和IL-2有协同作用,能增强LAK细胞对Hep-2的细胞毒活性。     

体内诱导人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞分化的实验研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)在小鼠体内向男性生殖细胞分化的可能性。方法HUC-MSCs纯化培养后,经显微注射方法移植到不育小鼠睾丸曲细精管,对体内移植后的细胞行免疫组化、免疫荧光及激光共聚焦,观察其存活、迁移及男性生殖细胞的特异性标记物表达等情况。结果HUCMSC体内移植后免疫组化显示其在睾丸微环境中可以存活至少120 d并发生从管腔到基底膜的迁移;免疫组化、免疫荧光、激光共聚焦证明HUCMSCs移植后在睾丸微环境中可以进一步分化,表达生殖细胞特异性标记物。结论体内外定向诱导HUC-MSCs可能可以向男性生殖细胞方向分化,HUCMSCs将可能为治疗男性不育提供一种新的细胞来源,提供一条新的治疗途径。