以人胚肾培养细胞总Poly(A)~ mRNA为模板反转录合成ds-cDNA的研究

反转录酶合成cDNA常产生不完全的转录产物。为获得全长基因组的cDNA拷贝并提高它在总cDNA中的比例,文献中已提出了一些措施,效果如何尚有争论。我们以人胚肾培养细胞总Poly(A)~ mRNA为模板,参照Maniatis的方法,建立了一个比较简单易行的反转录程序,合成了较长的cDNA拷贝。材料和方法试剂和酶 dATP、dCTP、dGTP、dTTP均为Sigma产品。[~3H]-dTTP(27.2Ci/mmol,0.5mci/ml)上海原子能研究所产品。Oligo(dT)_(12-18),反转录酶(AMVRTase,20BRL单位/μl)为BRL产品。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(500单位/0.11ml)为Boehringer产品。SI酶为Sigma产品。其余试剂     

DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗是当前免疫学和分子生物学中的研究热点之一.本文拟对DNA免疫的原理、应用、发展状况及其存在的问题作一简要介绍.     

聚合酶链式反应(PCR)引物自动设计及分析系统的研制

这是一套在IBM—PC兼容性微机上开发的分子生物学特别是基因体外扩增(PCR)实验辅助设计系统,为当前分子生物技术发展提供有用的支撑技术。本软件系统由2个部分组成,其一是基础软件包括核酸和蛋白质序列数据库及序列分析软件,其二是特异的PCR引物设计程序即PCRDESN(引物质量评价)和PCRDESNA(从靶基因序列中自动检索最适引     

胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)研究进展

胰岛素样生长因子结合蛋白 - 1(IGFBP- 1)参与生长、发育、生殖及血糖等生理过程 ,它是一个多功能蛋白 ,主要通过与 IGF- 1结合发挥作用。在 IGFBP- 1蛋白质结构中 ,N端是与 IGF- 1结合的重要区域 ;中心区决定了IGFBP的特异性 ;C端部分参与了与 IGF- 1结合并与细胞粘附相关。 IGFBP- 1是否磷酸化对其生物学作用有着重要影响。 IGFBP- 1基因转录受到多种转录因子共同调控 ,其中胰岛素是其主要的调控因子。     

CSV—IL—6的构建及其在COS7细胞中的表达

利用基因重组、PCR扩增、定点突变及转译优化等程序,构建了人白细胞介素6重组表达载体CSV-IL-6(1)和CSV-IL-6(2);并利用DEAE-Dextran法转染猴细胞系COS7获得了有生物活性IL-6的暂时性高表达。IL-6ELISA定量测定表达水平:转染后48小时收集的上清CSV-IL-6(1)2573pg/ml,72小时1476pg/ml;CSV-IL-6(2)分别为8261Pg/ml与7101pg/ml。利用IL-6依赖的杂交瘤细胞株7TD1检测转染后48小时收集的培养上清的IL-6生物活性结果为:CSV-IL-6(1)10~4U/ml、3.9×10~9U/mg;CSV-IL-6(2)6.3×10~4U/ml,7.6×10~9U/mg。     

链球菌蛋白G分子生物学研究进展

C和G组链球菌细胞壁中含有一种能与免疫球蛋白结合的蛋白质成分称为链球菌蛋白G(SPG)。近年来此种蛋白已被成功分离、纯化,并应用于免疫学研究。与经典的葡萄球菌蛋白A相比,SPG更易与IgG发生反应,亲和力强,结合谱广,已受到密切关注,国外已从分子生物学对其进行     

人白介素2受体基因的cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达

利用PCR技术扩增白介素2受体(IL2R)a亚单位的编码序列,同高效表达载体pMYvrf重组,经过复杂的基因操作,获得了5株人IL2Ra亚单位的重组克隆菌株。其中pMYIL2R_(104)表达水平达菌体总蛋白的41%。经免疫印迹分析证明具有特异性IL2R的抗原性,其与配基结合刺激T细胞增殖等生物活性正在研究之中。表达产物有可能用于IL2纯化,制备IL2R的单抗,免疫抑制效应及ATL治疗等研究。     

应用mRNA差异显示法检测肝脂素诱导的KG-1细胞凋亡相关基因表达的改变

目的观察肝脂素（heplipin）对KG-1细胞的凋亡诱导作用。比较肝脂素诱导KG-1细胞凋亡前后的基因表达谱，寻找与白血病细胞凋亡相关的基因。方法应用DNA倍体分析和DNA凝胶电泳的方法，证实肝脂素可诱导KG-1细胞凋亡。采用差异显示逆转录聚合酶链反应（DDRT—PCR）的方法寻找肝脂素诱导前与诱导16、20h后的基因表达差异片段，并对其进行克隆分析。结果250μg/ml肝脂素作用KG-1细胞16、20h细胞凋亡率分别为13．5％和30．4％，显著高于未经肝脂素诱导组（1．5％）。肝脂素诱导KG-1细胞凋亡前后存在明显的基因表达差异，Wnt13和ATPase 3基因是肝脂素诱导KG-1细胞凋亡相关下调基因。结论肝脂素诱导KG-1细胞凋亡，其机制是一个多基因参与的过程。肝脂素诱导KG-1细胞凋亡与Wnt13和ATPase 3基因有关。Wnt13基因在多种肿瘤细胞中高表达，在白血病细胞系中被检测到尚属首次。     

长链非编码RNA在变应性鼻炎中的生物学机制研究进展

长链非编码RNA (lncRNA)起初被认为是不具蛋白质编码功能的非编码RNA,随着检测技术的更新迭代,人们对其来源、分类、功能的认识逐渐深入,尤其在免疫调节方面,发现lncRNA起到关键的调节作用.变应性鼻炎(AR)为免疫调节失衡所产生的疾病,研究发现lncRNA与AR的发生发展密切相关.目前的研究以AR相关lncR...     

基质金属蛋白酶9的研究进展

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)属锌依赖性内肽酶家族,是自然界进化中高度保守的一类蛋白酶;其与丝氨酸蛋白酶类、半胱氨酸蛋白酶类共同构成细胞外基质(extracellular matrix,ECM)三大类降解酶。MMPs与ECM相互作用参与并影响机体众多生理活动。