广州地区52例传染性非典型肺炎患者血清检测分析

2002年11月16日我国广东省佛山市发现第一例传染性非典型肺炎(严重急性呼吸综合征，SARS)患者，其传播途径主要通过近距离空气飞沫和密切接触传播，传染性极强。本研究采用军事医学科学院微生物流行病研究所从一例北京SARS患者的肺组织中分离的新型冠状病毒感染Vero E6细胞制成抗原片，对2月份收集的广州地区52例SARS患者血清进行了间接免疫荧光检测(IFA)及分析，以期为SARS的实验室诊断提供参考。     

结肠癌患者外周血VEGF-C和CK20 mRNA的表达与淋巴转移的关系

目的探讨结肠癌患者外周血VEGF-C mRNA和CK20 mRNA的表达与淋巴转移的关系。方法应用RT-PCR检测80例结肠癌患者、30例结肠良性肿瘤患者、30例健康人外周血VEGF-C mRNA和CK20 mRNA的表达。结果 VEGF-C mRNA在结肠癌患者外周血的阳性表达率为52.5%,在结肠良性肿瘤、健康人的表达率分别为10.0%、0,其中有淋巴结转移的结肠癌患者的阳性表达明显高于无淋巴结转移的阳性表达(P<0.05)。CK20 mRNA在结肠癌患者外周血的阳性表达率为60.0%,在结肠良性肿瘤、健康人的表达率均为0,其中有淋巴结转移的结肠癌患者的阳性表达明显高于无淋巴结转移的阳性表达(P<0.05)。结论结肠癌患者外周血VEGF-C mRNA和CK20 mRNA的表达与淋巴转移相关。     

临床实验室检测新型冠状病毒感染防控预案的制定及疫情后时代应对策略的思考

2019年底爆发的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）肺炎疫情在国内已经得到有效遏制,但感染已呈全球扩散之势。结合《2019 新型冠状病毒肺炎临床实验室生物安全防护指南（试行第二版）》和《2019 新型冠状病毒肺炎临床实验室生物安全防护专家共识》,我们制定了临床实验室检测新冠感染防控预案并对其执行现状和暴露出的问题进行了分析,认为在应对重大疫情时大部分临床实验室（包括临床基因扩增实验室）的设计布局不合理,不能达到相应的生物安全防护要求,无法开展相应的病原学及血清学检测;实验室人员的生物安全防护意识严重弱化;医院发热门诊检验室的检测能力不足,其功能和地位急需加强;而军队人员聚集程度高,其临床实验室设备自动化程度低,甚至没有相应的生物安全柜和足够的个人防护用品,无法满足军队遂行多样化及海外重大任务的需要。针对这些问题和现状,我们也提出相应的对策和建议供大家参考：临床实验室可以参照P2实验室的标准来规范设计布局和人员管理;而发热门诊检验室的检测能力和人员配备需要加强,有条件时可以配备单独的临床基因扩增实验室;对于不达标的临床基因扩增实验室,可按照相应的生物安全防护要求进行改建和升级;军队医疗系统的临床实验室除了加强人员的生物安全防护外,更要保证医疗物资和生物安全装备的供给充足,并尽可能常规配置生物安全柜等设备。     

HCV基因分型检测Oligo芯片的制备

目的 研制丙型肝炎病毒（HCV）基因分型寡核苷酸（Oligo）芯片并进行杂交验证。方法 分别对BLAST检索所得的HCV4个亚型型特异序列逐一进行分析，设计长度均一的60mer Oligo探针，用芯片点样仪将设计好的探针打印到玻片上制备成基因芯片。结果 杂交结果显示，Oligo芯片检测HCV各基因亚型的效果较佳。结论 制备的长链Oligo分型芯片检测敏感性、特异性均为满意，为下一步集合更多种肝炎病毒的联合检测与分型打下基础。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,并用琼脂双向扩散法检测效价,ELISA、Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果获到了重组表达的抗原蛋白,表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1∶16。结论恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶（GDH）与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白，测定重组蛋白的免疫活性。方法：采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫（海南株）GDH基因，双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达，重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清，并用琼脂双向扩散法检测效价，ELISA、Westernblotting检测重组抗原的免疫活性。结果：获到了重组表达的抗原蛋白，表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应，并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答，免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1：16。结论：恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

恶性疟原虫海南株（FCC1／HN）谷氨酸脱氢酶基因的克隆及序列分析

目的 了解恶性疟原虫海南株（FCC1/HN）谷氨酸脱氢酶（GDH）基因全编码区核苷酸序列变异情况。方法 PCR扩增恶性疟原虫海南株（FCC1/HN）GDH基因全编码区,产物经EcoRI SalI酶切后,定向克隆至pGEX-4T-1质粒,采用Sanger双脱氧链末端终止法测序,与其它生物GDH进行同源性分析。结果 成功扩增了恶性疟原虫海南株（FCC1/HN）GDH编码基因,大小为1410bp,无内含子,与Thailand株GDH基因相比,两有2个碱基不同,推导的氨基酸序列完全相同;与蓝氏贾第鞭毛虫,克鲁氏锥虫和梭状芽孢杆菌GDH的同源性分别为57.90%(260/449),56.51%(243/430),42.05%(164/390);与人的GDH-1,GDH-2的同源性分别为29.02%（101/348）,28.73%(100/348)。结论 FCC1/HN株与Thailand株GDH高度同源,疟原虫GDH明显不同于其它生物GDH。     

3种艰难梭菌感染检测方法的比较

目的 评价3种艰难梭菌感染(CDI)检测方法的诊断效能,为CDI寻找合适的诊断方案.方法 收集中国人民解放军广州总医院2016年5月~12月疑似CDI的腹泻患者粪便标本70例,采用3种方法进行检测:(1)培养法;(2)酶联荧光法检测艰难梭菌毒素A/B(CDAB)和谷氨酸脱氢酶(GDH);(3)q-PCR扩增艰难梭菌特异性基因tpi和毒素基因(tcdA/tcdB).以培养法的检测结果作为参考标准,计算3种方法的诊断指标.结果 收集粪便样本70例,分离艰难梭菌13例(18.57%),其中产毒株6例(8.57%).q-PCR法鉴定tpi基因阳性17例,其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率分别为92.31%、91.23%、70.59%、98.11%、91.43%,均高于GDH法(84.62%、84.21%、55.00%、96.00%、84.29%)(χ2=24.881,P<0.001),且q-PCR扩增tcdA/tcdB的敏感度(66.67%)优于CDAB(33.33%)(χ2=35.918,P<0.001).结论 CDAB检测和q-PCR法特异性较高,GDH法具有较好的灵敏度,3者均有较高的阴性预测值.与其他检测方法相比,q-PCR法检测CDI具有时效性强,灵敏度高,特异性好等优势,适用于临床推广.     

广州地区住院患儿血清抗SARS病毒抗体的检测

非典型肺炎即重症急性呼吸道综合征(SARS)曾蔓延到30多个国家和地区，造成感染患者达7000多例，死亡500多人，某些地区病死率高达15％。但感染人群中儿童很少被感染，此现象是否与儿童体内存在抗SARS病毒的抗体有关?特此，我们检测了广州市儿童医院住院的1066例患儿血清抗SARS病毒的抗体，现报告如下。