脐血移植中移植物抗宿主病低发生机理研究

目的　通过对脐血和外周血免疫功能的比较 ,探讨了脐血移植中移植物抗宿主病(GVHD)低发生率的分子机理。方法　经增殖试验、NK杀伤活性试验及免疫荧光双标记方法研究了 4种血清对T细胞免疫功能的影响。结果　与成人血清相比较 ,脐血血清能降低NK细胞杀伤肿瘤靶细胞的活性 ;同时脐血血清和成人血清都能增加丝裂原特异性T淋巴细胞增殖 ,成人血清在增殖反应中可达到峰值 ,而脐血血清没有达到峰值效应 ,甚至在 0 1的稀释度时仍没有下降 ;成人血清能增加PHA刺激外周血单个核细胞 (PBMC)中的T淋巴细胞HLA DR表达 ,而脐血血清却没有这种效应。结论　血清中所分泌的某些可溶性因子可能在T细胞活化中起重要作用 ,与GVHD发生机理相关联     

识别髓系分化抗原单克隆抗体的制备

骨髓造血细胞在分化发育过程中,其细胞表面表达出分化抗原。如因发育阻滞成为白血病时,往往保留着分化抗原。因此研究分化抗原对于了解正常细胞的分化发育过程以及理解正常细胞和白血病细胞之间的关系都有很大帮助。目前研究白细胞分化抗原主要是采用单克隆抗体。应用单克隆抗体,可     

一种新的造血干细胞标志物AC_(133)

有效选择造血干 祖细胞对于实验研究干 祖细胞移植和基因治疗的临床应用均是非常重要的。常规以ＣＤ3 4 作为早期的造血干细胞表型 ,但ＣＤ+3 4 细胞是一组异质性细胞 ,包括很多亚群。因此有必要进一步特征化造血干细胞表型 ,寻找更为利于体外扩增和体内移植的造血干细胞。 1997年Ｍｉｒａ ｇｌｉａ等首先在Ｂｌｏｏｄ上公布了一种新的造血干 祖细胞标志物ＡＣ1 3 3 ,它有可能代替ＣＤ3 4 作为选择造血干细胞的标志物[1 ,2 ] 。1　ＡＣ1 3 3 的结构ＡＣ1 3 3 是分子量为 12 0ｋＤ的糖蛋白 ,其中含有 2 0ｋＤ左右的糖基。ＡＣ1 3 3 ｃＤＮ…     

125I标记重组人β-神经生长因子在血脑屏障中通透性的研究

目的 研究β-神经生长因子（NGF）在血脑屏障中的通透 性。方法 将重组真核表达载体PcDNA3-β-NGF以脂质体转染COS-7细胞。将细胞培养上清经离子交换树脂层析进行分离纯化，观察纯化蛋白质对PC12细胞突起生长的作用，以^125I标记纯化蛋白南，Wistar大鼠尾静脉注射，以γ测量仪检测脑组织放射性。结果 PC12细胞培养结果示：纯化产物可促使其突起生长；注射后30min，脑组织放射性达高峰。结论 纯化的重组人β-NGF具有良好的生物学活性，且部分通透过高脑屏障。     

空肠弯曲菌在免疫小鼠体内的粘附和定居

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,以下简称空弯菌)能粘附小鼠肠上皮,在小鼠肠道内定居、增殖。肠道粘膜是该菌和宿主相互作用的主要部位之一。空肠弯曲菌的粘附和定居,必须克服肠道内特异和非特异性的免疫防御屏障。我们首次应用体内CFU法分别研究了空弯菌在被动和自动免疫小鼠体内的粘附和定居,并应用改良的组织免疫荧光法初步研究了甲醛处理的空弯菌CJ-S131菌苗诱导小鼠肠粘膜免疫反应的机理,探讨了空弯菌粘附定居和粘膜免疫功能之间的关系。     

人β-NGF基因的体外扩增、克隆及其序列的分析

目的　对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析,为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法　本实验设计并合成一对特异性引物,采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－ 神经生长因子（β－ ＮＧＦ）基因,并和Ｔ４ 载体相连接,经筛选得到人β－ ＮＧＦ克隆,并用Ｓａｎｇｅｒ 双脱氧末端终止法进行序列分析。结果　凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。结论　阳性克隆经序列分析证明克隆基因序列正确     

超低温冻存前后胎儿脐血中NK细胞活性的研究

目的　探讨影响胎儿脐血NK细胞活性的因素。方法　采用台盼蓝染色法检测NK细胞活性 ,脐血MNC用Ficoll分离液离心获得。结果　经液氮 (- 196℃ )冻存后脐血NK活性比冻存前显著提高。结论　提示超低温能解除抑制脐血NK细胞活性的因素     

IL-3体外造血支持效应的初步研究

IL- 3是早期多能生长因子 ,单独或与其它因子配伍 ,可以促进多能干细胞自我更新及定向祖细胞的增殖 [1 ]。骨髓基质细胞不能合成 IL- 3,已为一些学者证实 [2 ]。因此 ,我们在成人骨髓基质细胞支持的培养体系中加入 IL- 3,探讨其对脐血造血细胞增殖分化的作用。1　材料和方法1.1　细胞的采集　脐血采集后使用 Ficoll分离 ,获得脐血MNCs。成人骨髓细胞用 Ficoll分离后 ,制成适当浓度的细胞悬液。1.2　基质细胞的培养　成人骨髓 MNCs按 1× 10 6 / ml悬浮于 5 ml基质 RPMI16 40培养液中 ,培养 3～ 4周 ,形成单层后 ,用γ射线 (15 GY)辐…     

脐血造血干/祖细胞体外扩增的实验研究

目的探讨因子组合FL+TPO+SCF+IL-6对脐血CD34 +细胞的体外扩增效应.方法采用Mini-MACS分离纯化出CD34+细胞, 在无基质接触的液体悬浮培养体系培养,通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪技术、集落形成试验等动态测定细胞扩增情况.结果培养4周后,FL+TPO+SCF+IL-6组细胞总数、集落形成数均比扩增前显著增加(P＜0.05),并且能维持一定比例的CD34+、Th y-1+细胞;SCF+IL-3+IL-6+GM-CSF+EPO组在第2周时集落形成数已降低,第4周时集落形成数、CD34+细胞基本检测不到.结论与经典因子组合SCF+IL-3+IL-6+G M-CSF+EPO相比,因子组合FL+TPO +SCF+IL-6能在较长时间内有效扩增脐血造血干/祖细胞, 是一个优化组合方案.