重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达

目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础.方法:采用EcoR I和BamH I双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒.将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞.荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段.(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)p1OO cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒.(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.     

轮叶婆婆纳的抗肿瘤活性二萜成分研究

目的 研究轮叶婆婆纳Veronica sibirica中二萜类成分及其体外抗肿瘤作用.方法 应用现代提取分离和波谱分析方法对轮叶婆婆纳进行提取、分离、纯化和结构鉴定;以SK-N-SH和BEL-7402肿瘤细胞株为研究对象,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从轮叶婆婆纳中分离鉴定了一个新二萜类化合物,鉴定为1,2-去氢隐丹参酮(Ⅰ);其他7个已知化合物:轮叶婆婆纳对醌A(Ⅱ)、轮叶婆婆纳对醌B(Ⅲ)、隐丹参酮(Ⅳ)、弥罗松酚(Ⅴ)、二氢丹参酮Ⅰ(Ⅵ)、丹参酮Ⅰ(Ⅶ)、丹参酮Ⅱa(Ⅷ).体外抗肿瘤活性实验结果显示化合物Ⅱ,Ⅳ～Ⅷ对SK-N-SH肿瘤细胞生长的抑制作用较强,化合物Ⅱ,Ⅳ,Ⅵ,Ⅷ对BEL-7402肿瘤细胞生长的抑制作用较强.结论 轮叶婆婆纳中的二萜类化合物对不同种肿瘤细胞具有细胞毒选择性,有一定的抗癌活性.     

四肽化合物CMS030抗移植排斥作用的实验研究

目的：CMS030是从脾脏提取的四肽化合物,本研究观察CMS030对小鼠皮肤和心肌移植排斥反应的影响。方法：通过体外T淋巴细胞转化实验和混合淋巴细胞反应（MLR）实验,观察CMS030在体外的免疫抑制作用,建立小鼠皮肤移植和心肌移植模型,观察CMS030对小鼠同种移植物存活时间的影响,观察CMS030对移植受体小鼠T淋巴细胞转化和脾细胞分泌IL-2的影响。结果：CMS030在体外能够抑制T淋巴细胞转化和MLR,在体内可以明显延长小鼠皮肤移植物和心肌移植物存活时间,抑制皮肤移植受体小鼠T淋巴细胞转化能力和脾细胞分泌IL-2水平。结论：CMS030通过抑制T淋巴细胞分泌IL-2,抑制T淋巴细胞功能,有效拮抗移植排斥反应。     

促性腺激素及IL-6对卵巢癌细胞株核因子-κB表达的影响

目的:探讨促性腺激素及IL-6对卵巢癌细胞株核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响. 方法:应用不同剂量的人重组促性腺激素及人重组白介素-6(hrIL-6)与卵巢癌细胞株OVCAR-3, Caov-3共培养,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观测其对卵巢癌细胞生长的影响,同时应用RT-PCR和ELISA方法检测卵巢癌细胞NF-κB水平,以分析其信号传导途径. 结果:促性腺激素对卵巢癌细胞株具有促增殖作用,分别增加35%～202%(P＜0.05);67.7%～192%(P＜0.01),并使细胞内NF-κB亚单位表达增加1.53倍～3.98倍(P＜0.05),与对照组相比差异具有显著性. 在处理组卵巢癌细胞培养液中加入50 mg/L抗IL-6中和性抗体,上述2种卵巢癌细胞株的生长均有所减慢,NF-κB表达下降. 结论:提示促性腺激素对卵巢癌细胞株的促增殖过程可能由IL-6介导,促性腺激素、IL-6及NF-κB共同影响卵巢癌细胞的生长.     

异基因骨髓源间充质干细胞对BXSB小鼠T、B细胞的影响

目的：探讨异基因骨髓源间充质干细胞（Bonemarrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs）对BXSB小鼠T、B细胞增殖、活化及功能成熟等方面的影响。方法：采用。H．TdR掺入法、FACS法、EIJSA等方法检测BMSCs对BXSB小鼠T、B细胞的影响。结果：BALB／c小鼠的BMSCs在不影响BXSB小鼠T细胞诱导活化的基础上抑制其诱导增殖；可降低由ConA诱导的CD4^＋IL^＋细胞的数量，而提高由ConA诱导的CD4^＋IFN-γ^＋细胞数量。对于B细胞，BALB／c小鼠的BMSCs可以抑制其增殖、活化及IgG的分泌。另外，BALB／c小鼠的BMSCs可以抑制BXSB小鼠B细胞上CIMOL的异位表达。结论：异基因BMSCs对自身免疫病小鼠的T、B细胞有一定的调节作用。     

激光扫描共聚焦显微镜在肿瘤研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜是近年来出现的一种新的分子细胞生物学分析仪器,已经广泛应用于生物医学研究的许多领域.简介其基本功能和特点.并从肿瘤组织细胞蛋白的定位和定量、肿瘤细胞亚细胞结构观察、肿瘤受体研究、肿瘤药物分布和肿瘤多耐药机制等角度.综述了近年来激光扫描共聚焦显微镜在肿瘤研究中应用的进展.     

牛血清白蛋白的阳离子化及其在原位免疫复合物型肾炎模型制备中的应用

提高牛血清白蛋白（C-BSA）的等电点，能诱发原位免疫复合物型的肾炎，机制已有证实。C-BSA通过注射进入动物体内可以种植于肾小球的基底膜（GBM），并且与带阴性电荷的GBM发生沉积反应而诱发肾炎。本实验设计并优化了稳定阳离子化牛血清白蛋白的合成方法，并初步验证了应用该产物建立原位复合物型肾炎模型。     

肝移植术后巨细胞病毒感染受者外周血单个核细胞细胞因子mRNA表达的变化

巨细胞病毒(CMV)感染是器官移植术后的一种常见并发症,大部分病例发生在术后3个月之内.CMV感染宿主后,有多种细胞因子参与其发病.Th细胞是重要的T淋巴细胞亚群,能分泌多种细胞因子,调节和增强机体的免疫应答,与CMV感染的急性反应、播散、活化及逃避宿主的免疫清除等致病性密切相关.研究肝移植术后CMV感染受者外周血Th细胞因子,探讨其与CMV感染的关系.     

大鼠脑创伤后IL—1β,TNFα,IL—6水平的变化

目的研究实验性脑创伤后体内白细胞介素１β（ＩＬ－１β）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）、白细胞介素６（ＩＬ－６）三种炎性细胞因子水平的变化。方法利用液压脑创伤装置造成大鼠脑挫伤，利用生物活性法检测脑组织及血浆中细胞因子的含量。结果脑创伤后脑组织中上述三种因子水平有明显增高，外周血中上述因子水平较对照组无明显变化；不同程度脑创伤组间上述三种因子水平无统计学差异。结论ＩＬ－１β、ＴＮＦα、ＩＬ－６三种炎性细胞因子与脑创伤关系密切，其水平变化主要表现在脑组织中     

雷公藤中具有抗癌活性的二萜类化合物

目的研究雷公藤的化学成分及其细胞毒活性。方法用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱分离,制备高效液相色谱纯化,得到单体化合物,用各种有机波谱鉴定化合物结构;以MTT法测试各化合物的抗癌活性。结果分离得到5个萜类化合物,鉴定为雷酚萜L(3-epi-triptobenzeneB,Ⅰ)、雷酚萜B(3β,14-dihydroxy-abieta-8,11,13-triene,triptobenzeneB,Ⅱ)、雷酚萜E(wilforolE,Ⅲ)、雷酚萜酸(triptohairicacid,Ⅳ)、雷酚萜酸甲醚[11-hydroxy-14-methoxy-18(4→3)-abeo-abietan-3,8,11,13-tetraen-18-oic-acid,hypoglicacid,Ⅴ]。结论化合物Ⅰ为新化合物,命名为雷酚萜L(triptobenzeneL),化合物Ⅳ为首次分离得到。细胞毒实验表明各化合物均有一定的抗癌活性。