p38 MAPK及其抑制剂在胰岛素调节GLUT4活性中的作用

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及其抑制剂SB203580在胰岛素调节葡萄糖转运子4(GLUT4)活性机制中的作用。方法:分别测定胰岛素和SB203580孵育条件下骨骼肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平和活性;检测p38 MAPK或SB203580是否与GLUT4直接结合;并测定SB203580对光化学标记细胞膜上的GLUT4的影响。结果:与胰岛素孵育0min时相比,100nmol/L胰岛素使p38 MAPK磷酸化水平增加,最大值为0min时的(2.43±0.21)倍;胰岛素还使p38α和p38βMAPK的活性分别增加了(10.13±0.48)和(7.92±2.17)倍;SB203580可抑制胰岛素的作用;p38 MAPK在体内不与GLUT4直接结合;SB203580仅抑制胰岛素刺激下的GLUT4光化学标记。结论:p38MAPK或SB203580不直接与GLUT4结合;对SB203580敏感的分子参与了胰岛素调节GLUT4活性的作用。     

pEGFP-C2-人类P100蛋白SN和TD片段质粒构建

目的:分别构建含有人类p100蛋白SN片段和TD片段基因的真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD。方法:利用EcoRI和BamHI限制性内切酶对已构建好的质粒PSG5-p100-SN和PSG5-p100-TD进行双酶切以获得目的片段p100-SN和p100-TD基因片段,回收纯化后连接到质粒pEGFP-C2上。结果:通过对重组质粒进行菌落PCR鉴定以及酶切鉴定均能从PCR产物和酶切产物中观察到p100-SN和p100-TD片段。结论:成功构建了可以在真核细胞内表达绿色荧光蛋白和目的蛋白的融合蛋白的重组质粒pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD,可为有关人类p100蛋白功能及作用机制研究奠定基础。     

重组pEGFP-C2-p100质粒构建及表达

目的:将人类p100基因定向连入pEGFP-C2质粒,使p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,为进一步研究p100蛋白的功能及定位奠定实验基础.方法:采用EcoR I和BamH I双酶切方法,从pSG5-p100质粒中获得p100蛋白的cDNA全长;将该cDNA连接入pEGFP-C2质粒.将构建成功的pEGFP-C2-p100质粒转染入HeLa细胞.荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.结果:(1)将该质粒进行双酶切鉴定可见p100片段.(2)转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)p1OO cDNA全长成功载入pEGFP-C2质粒.(2)p100蛋白可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达.     

宁夏南部山区农村居民膳食营养状况的调查和研究

目的通过采取膳食称量和体格检查的方法,对宁夏南部山区农村居民膳食结构和营养水平进行调查分析。方法2006年7~8月采用分层抽样的方法,抽取宁夏南部山区300户农村居民,采用膳食称量法进行了膳食调查并对其家庭中的成年人进行了体格检查;利用SPSS软件对调查数据进行分析处理。结果宁南山区农村居民膳食结构以粮谷类为主,膳食品种单一,动物性食品、奶类及其制品、大豆类食品、鱼虾类等消费量极少;与中国居民膳食营养素推荐摄入量进行比较,热能、硫胺素和维生素C摄入基本满足需要,蛋白质、部分维生素、钙、铁、锌等营养素摄入不足,但脂肪和钠盐摄入量严重超标;蛋白质来源中大豆类及动物性食品提供的优质蛋白不到8%;热能的38%来源与脂肪,超过了标准的上限;三餐热能分配中早餐的数量和质量严重不足,而晚餐的数量却高于标准;体格检查结果,61%的营养正常,11%消瘦,28%的超重。结论宁南山区农村居民的膳食质量仍然较差,许多营养素满足不了人体的需求;膳食结构不尽合理,营养不足与营养过剩并存,慢性非传染性疾病患病率上升已初见端倪。     

产超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究

目的了解我院临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型.方法采用Microscan微生物鉴定仪、微量肉汤稀释法,测定临床分离的肺炎克雷伯菌对21种抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分析超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型.结果肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感,对环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、阿莫西林/舒巴坦、阿米卡星、头孢噻肟和头孢哌酮的耐药率分别为36.6%、38.3%、56.7%、63.4%、81.7%、86.7%、96.6%、98.3%和98.3%,对其他药物的耐药率为100%;60株肺炎克雷伯菌全部扩增出TEM基因,有25株细菌检出CTX-M-Ⅰ群基因,有54株细菌扩增出DHA基因,而PER和MIR(ACT-1)全部为阴性;且有21株肺炎克雷伯菌同时携带CTX-M-Ⅰ群、DHA和TEM基因.结论我院临床分离的肺炎克雷伯菌为多重耐药菌,同时存在CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶和DHA-1型质粒介导的AmpC酶,尚未发现PER型超广谱β-内酰胺酶和MIR型质粒介导的AmpC酶.     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用及对NK细胞杀伤活性的影响

[目的]研究三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用及对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性的影响。[方法]建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,观察YSL对肿瘤生长的抑制作用;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测YSL对正常小鼠及人肝癌BEL-7402荷瘤鼠的NK细胞杀伤活性的影响。[结果]YSL[160μg(/kg·d)]能抑制BEL-7402的生长,肿瘤抑制率为72.23%,且能增强BEL-7402荷瘤裸鼠及正常小鼠NK细胞杀伤活性,与生理盐水组相比均具有显著性差异(P<0.05)。[结论]YSL对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤有抑制作用,并具有增强正常及荷瘤小鼠NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的作用。     

高通量筛选JAK-STAT6信号传导通路抑制剂方法的初步建立

目的构建可用于高通量筛选JAK/STAT6信号传导通路抑制剂的工程细胞株,建立稳定可靠的筛选方法。方法利用基因重组和转染技术,将STAT6特异性识别启动子IgE基因序列和虫荧光素酶报告基因联合插入pCMV质粒,脂质体法转染至HeLa细胞,经潮红霉素B抗性筛选及报告基因检测,得到稳定表达虫荧光素酶的工程细胞株。通过优化溶剂DMSO浓度,IL4作用浓度及孵育时间等筛选条件,建立了可靠的筛选方法,并在此基础上对1600种化合物进行了筛选。结果建立的筛选方法稳定可靠,系统Z′因子达到0.64。通过对1600种化合物的筛选,得到3个抑制效果较理想的化合物并测得其IC50值。结论所建立的高通量筛选方法可用于JAK/STAT6信号传导通路抑制剂的筛选。     

彩色多普勒超声对2型糖尿病患者股动脉形态及血流动力学的研究

目的:应用彩色多普勒超声研究2型糖尿病患者股动脉内-中膜厚度、回声及血流动力学变化,探讨糖尿病与股动脉变化的关系。方法:对31例糖尿病患者及30例正常人的股动脉进行二维及彩色多普勒超声检查,测量股动脉内-中膜厚度及血流动力学变化,计算斑块发生率。结果:(1)糖尿病组股动脉IMT0.80±0.18mm,明显大于对照组0.56±0.10mm(P<0.05);(2)糖尿病组股动脉斑块发生率高于对照组(P<0.05);(3)糖尿病组股动脉Vd小于对照组(P<0.05),RI大于对照组(P<0.05),Vs两组间无显著性差别(P>0.05)。结论:糖尿病患者股动脉内-中膜增厚、斑块发生率增高,Vd减低,RI增高。     

轮叶婆婆纳的抗肿瘤活性二萜成分研究

目的 研究轮叶婆婆纳Veronica sibirica中二萜类成分及其体外抗肿瘤作用.方法 应用现代提取分离和波谱分析方法对轮叶婆婆纳进行提取、分离、纯化和结构鉴定;以SK-N-SH和BEL-7402肿瘤细胞株为研究对象,采用MTT法对化合物进行体外抗肿瘤活性研究.结果 从轮叶婆婆纳中分离鉴定了一个新二萜类化合物,鉴定为1,2-去氢隐丹参酮(Ⅰ);其他7个已知化合物:轮叶婆婆纳对醌A(Ⅱ)、轮叶婆婆纳对醌B(Ⅲ)、隐丹参酮(Ⅳ)、弥罗松酚(Ⅴ)、二氢丹参酮Ⅰ(Ⅵ)、丹参酮Ⅰ(Ⅶ)、丹参酮Ⅱa(Ⅷ).体外抗肿瘤活性实验结果显示化合物Ⅱ,Ⅳ～Ⅷ对SK-N-SH肿瘤细胞生长的抑制作用较强,化合物Ⅱ,Ⅳ,Ⅵ,Ⅷ对BEL-7402肿瘤细胞生长的抑制作用较强.结论 轮叶婆婆纳中的二萜类化合物对不同种肿瘤细胞具有细胞毒选择性,有一定的抗癌活性.     

Changes of interleukin-1 β, tumor necrosis factor α and interleukin-6 in brain and plasma after brain injury in rats

Objective: To study the changes of interleukin-1 β(IL-1β), tumor necrosis factor α (TNFα) and interleukin-6 (IL-6) levels in brain and plasma after brain injury and to assess the relationship between the cytokine levels and injury severity in rats. Methods. A total of 51 male Wistar rats, weighing 280-340g, were anesthetized with chloral hydrate(400 mg/kg body weight) through intraperitoneal injection and fixed on a stereotaxic instrument. Severe brain injury was created in 16 rats (severe injury group) and moderate brain injury in 18 rats (moderate injury group) by a fluid percussion model, and cytokine levels of IL-1β, TNFα and IL-6 were measured with biological assay. And sham operation was made on the other 17 rats (control group). Results: In the control group, the levels of IL-1β,TNFα and IL-6 were hardly detected in the cortex of the rats, but in the ipsilateral cortex of the rats in both injury groups, they increased obviously at 8 hours after injury.The increasing degree of these cytokines had no significant difference between the two injury groups. The levels of IL-6 in the plasma of all the rats increased slightly, whereas the levels of IL-1β and TNFα were undetectable. Conc|usions: The increase of IL-1β, TNFα and IL-6 levels is closely related to brain injury. The increased cytokine levels in the central nervous system are not parallel to those in the peripheral blood. It suggests that inflammatory cytokines play important roles in the secondary neural damage after brain injury.