不同剂量C-ski基因转染对兔眼小梁切除术后的影响

目的通过观察兔眼小梁切除术后,不同剂量C-ski基因重组质粒转染对眼压、滤过泡、滤过道炎症细胞、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、肌成纤维细胞的影响,了解C-ski基因对滤过道抗瘢痕化的作用。方法36只新西兰大白兔,随机分为4组,每组9只,分别对兔右眼行小梁切除术,于术毕辅以结膜下注射0.01mol/L的PBS溶液0.1ml(A组)、C-ski基因重组pcDNA3.0质粒100μg(B组)、300μg(C组)和500μg(D组)进行治疗,并于术后第1、3、5、7、14、21、30天观察滤过泡情况并测量双眼眼压,第7、14、30天分批处死家兔(每次每组3只),取右眼制作石蜡切片,分别进行HE、天狼星红、免疫组化染色,观察炎症细胞、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、肌成纤维细胞情况。结果A组与B组的两眼眼压差、滤过泡、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维、炎症和肌成纤维细胞数量在各个时间点差异无统计学意义(P>0.05)。D组双眼眼压差在第7～21天与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅰ型胶原量在第14天后与A组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),C组各项测量指标在各个时间点与B、D组比较,差异均无统计学意义。结论将不同剂量的C-ski基因重...     

血清浓度对TGF—β1刺激成纤维细胞增殖的影响

目的比较低血清浓度（0．4％）和正常血清浓度（10％）培养条件对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响。方法原代大鼠皮肤成纤维细胞分别采用0．4％和10％血清浓度培养，加TGF-β1刺激细胞后，分别用BrdU ELISA法检测细胞增殖情况，噻唑蓝（MTT）比色法制作细胞生长曲线。结果0．4％和10％血清浓度下，250pg／ml TGF-β1均促进成纤维细胞增殖（P〈0．01），并促使生长曲线的峰值提前和增加。而25ng／ml TGF-β1均抑制成纤维细胞增殖（P〈0．05），并导致生长曲线峰值的滞后和降低。结论血清浓度对大小剂量TGF-β1刺激成纤维细胞增殖变化无明显影响。     

Changes of balance between proteinase and their inhibitors in blood of pigs with high-velocity missile wounds

Objective: To study the effect of imbalance between lysosomal enzymes and their inhibitors in blood on disturbance of the local and whole body after trauma.Methods: The dynamic changes of lysosomal enzymes and proteinase inhibitors were studied in 12 pigs with femoral comminuted fractures in both hind limbs caused by high velocity missiles. Four normal pigs served as controls.Results: After injury, the activity of Cathepsin D in arterial plasma increased gradually and reached the highest level at 8 hours, acid phosphatase in serum began to increase at 12 hours and the value of serum elastase did not change significantly. The level of αl-antitrypsin, a proteinase inhibitor in plasma, decreased significantly in the early stage after injury [ 73.5% ±6.4% and 81.0% ±5.1% of the baseline value (1.67 μmol · ml-1 · min-1 ± 0.29 μmol · ml-1 · min-1) at 1 and 2 hours after injury, respectively, P < 0.05 ], then increased gradually and was higher than the baseline value at 12 hours after injury.Conclusi     

神经生长因子及其临床应用进展

神经生长因子(NGF)是至今为止发现的唯一不仅对中枢及外周神经的正常神经细胞有营养因子作用,而且具有调节损伤神经修复机能的生物活性分子。近年来,对其研究方兴未艾。临床医生对此产生了越来越浓厚的兴趣。故本文概要介绍与临床应用有关的     

猪高速投射伤后血液溶酶体酶及蛋白酶抑制物变化的意义

对猪高速投射伤后血液溶酶体酶及蛋白酶抑制物的变化进行观察，并与对照组进行比较。结果显示，致伤后动脉血浆组织蛋白酶逐渐升高，８ｈ达高峰；血清性磷酸酶伤后升高较缓，１２ｈ达高峰；血清弹性蛋白酶与伤前相比无显著改变；血清蛋白酶抑制物α１－抗胰蛋白酶伤后先下降，１２ｈ后回升，并高于伤前水平。对照组各指标未见显著变化。     

大鼠c-ski基因siRNA真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的干扰效果观察

目的构建大鼠c-ski基因的特异性siRNA沉默质粒,并评价其在大鼠皮肤原代成纤维中的干扰效果。方法采用pSUPER质粒构建大鼠c-ski基因siRNA的重组真核表达质粒,转染大鼠皮肤成纤维细胞,采用荧光纤维镜观察转染效率,BrdUELISA法检测转染后细胞增殖情况并作为其干扰效果的初步筛选,定量PCR、免疫组化法检测c-ski基因和蛋白的表达变化。结果构建3个c-SkisiRNA沉默质粒,按照质粒(μg)/脂质体(μl)1∶2.5的比例转染时效率最高,约为53.5%。转染c-SkisiRNA沉默质粒后,细胞增殖降低,且抑制效果与转染剂量成正比。定量PCR、免疫组化法结果显示转染后c-ski基因表达下调51%(P<0.01),蛋白表达明显降低。结论c-Ski沉默质粒构建成功,瞬时转染大鼠皮肤原代成纤维细胞后可以显著抑制c-ski基因和蛋白的表达。     

脑损伤后脑脊液腺苷浓度测定方法的建立

目的建立人脑脊液中腺苷（adenosine,AD）浓度的检测方法。方法收集脑损伤后病人脑脊液,采用ODS反相C18柱检测,以50mmol/L磷酸二氢钠∶甲醇（80∶20）为流动相,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm。结果该方法在检测0.78～15mg/L腺苷浓度有着良好的线性关系（R2=0.9981）,保留时间为4.9min,平均加样回收率为（98.59±0.65）%,日内相对标准偏差小于2.46%,日间相对标准偏差小于3.56%。脑损伤病人脑脊液腺苷含量高于正常腺苷范围。结论本方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简便等优点,可用于脑脊液中腺苷浓度的测定。     

地塞米松抑制U937细胞黏附与吞噬功能的作用机制

目的 探讨地塞米松抑制单核细胞U937黏附和吞噬功能的机制. 方法 检测体外培养的U937在佛波脂(phorbol - 12 - myristate - 13 - acetate,PMA)刺激下分别接受地塞米松和法舒地尔作用后,观察人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)黏附和吞噬能力的变化,并检测ROCK1(rho -associated coiled -coil protein kinase 1,ROCK1)蛋白含量及其活性的变化；同时观察米非司酮和放线菌酮对地塞米松的影响. 结果 地塞米松和法舒地尔均可显著抑制受PMA刺激的U937细胞的黏附率和吞噬效果,并抑制ROCK1活性；米非司酮和放线菌酮并不能影响地塞米松抑制U937细胞的黏附和吞噬作用. 结论 地塞米松能通过抑制U937细胞内ROCK1的活性而干扰其黏附、吞噬功能.     

软X线照射对体外培养大鼠成纤维细胞增殖的影响

目的观察软X射线照射对体外培养的成纤维细胞增殖的影响.方法观察培养的大鼠皮肤成纤维细胞照射后细胞计数的变化、划痕实验和"营救"实验.结果在0.5Gy～8Gy剂量范围内,剂量与成纤维细胞的增长成反比,而且0.5～4Gy剂量的量效关系经回归分析成直线型.0.5Gy、1Gy剂量照射后,在1～3天的增长的幅度明显比3～5天的小,而2Gy曲线在1～5天增长幅度明显低于5～7天.在0.1～0.025Gy的照射范围内成纤维细胞的增殖曲线和空白对照没有差别.划痕实验中对照的长满时间明显比照射的长满时间短,实施了"营救"措施的细胞照射与对照的长满时间没有明显差别.结论照射后成纤维细胞的增长与剂量成依赖关系,并且剂量越大细胞增殖恢复也越慢.照射对细胞的运动也有抑制作用.未照射细胞对照射成纤维细胞的增长有"营救"作用.