肠免疫组织对肠上皮细胞生长的影响

肠粘膜免疫组织除了发挥免疫功能外,还能通过分泌多种细胞因子调节肠上皮细胞受损后的再生和修复.其中,在二者间起重要交流作用的细胞因子是IFN-γ,此外IL-2和IL-4也对维持正常的粘膜免疫和肠上皮细胞发挥重要调节作用.这些细胞因子调节上皮细胞增殖和分化的机制之一通过上皮细胞表面受体激活JAKs激酶,随后激活包括转录蛋白STAT家族在内的各种不同的信号蛋白,从而表达细胞因子功能.     

抗CD147人源单链抗体的筛选及生物特性初步鉴定

目的利用噬菌体展示技术筛选特异性抗CD147人源单链抗体(human anti-CD147 sc Fvs)并进行生物特性鉴定。方法以真核表达的CD147蛋白为抗原,采用"酸洗脱法"对库进行4轮富集性筛选、以ELISA法对筛选克隆的结合活性进行测定,以竞争ELISA和Western blot实验对获得的噬菌体抗体和可溶性sc Fv的特异性进行鉴定,通过DNA测序核实特异性sc Fvs的人源性及其亚群,以硫氰酸盐洗脱法对获得的抗体进行相对亲和力分析。结果经过4轮的富集性筛选,共筛出4个与CD147特异性结合的阳性克隆,其中3个获得可溶性表达,竞争抑制及Western blot实验证实其能与CD147特异性结合。DNA序列分析证实3个阳性克隆具有不同的基因型,三者的轻链可变区分别属于V_λⅠ、V_κⅡ、V_λⅢ亚群,重链可变区分别属于V_HⅠ、V_HⅢ、V_HⅢ亚群。硫氰酸盐洗脱法测出13号、15号和168号3个human anti-CD147 sc Fvs的亲和力分别为0.20 mol/L、0.35 mol/L和0.6 mol/L。结论成功从大容量噬菌体抗体库中筛选到特异性human anti-CD147 sc Fvs,为进一步研究该抗体的功能及应用前景奠定了基础。     

N-酰基高丝氨酸内酯半抗原衍生物及其全抗原的合成与鉴定

目的 本研究旨在合成N-酰基高丝氨酸内酯（N-acyl-homoserine lactone,AHL）全抗原,为建立AHL免疫检测新方法 奠定基础.方法 以γ-丁内酯和高丝氨酸内酯为原料,经保护、缩合、脱保护、氧化等一系列反应,获得N-丁酰高丝氨酸内酯、N-己酰高丝氨酸内酯和含有化学交联活性基团的羧基丁酰高丝氨酸内酯半抗原衍生物,用核磁共振氢谱和质谱方法 进行结构确证,并采用活泼酯法合成N-酰基高丝氨酸内酯全抗原.结果 质谱与核磁共振氢谱分析结果 与理论预测相同,表明成功合成目标产物N-丁酰（己酰）高丝氨酸内酯和羧基丁酰高丝氨酸内酯半抗原衍生物;紫外吸收光谱扫描结果 显示半抗原AHL已分别与载体牛血清白蛋白和鸡卵白蛋白交联,成功制备其全抗原.结论 本实验成功合成了N-酰基高丝氨酸内酯半抗原衍生物和全抗原,为制备AHL相应抗体奠定了基础.     

某医院船不同舱室微生物多样性初步研究

目的：应用16S rDNA测序技术分析海军某医院船不同舱室细菌群落结构及其多样性,为医院船潜在感染的监测和控制提供科学依据。方法采用拭子涂抹方法在医院船的12个舱室（ A～L位）共采集样本31份,采用IlluminaHiseq2500高通量测序平台PE250测序策略对样品16S rDNA扩增的V3～V4区域进行测序,并进行物种分类、丰度及多样性等生物信息分析。结果31份样品共产生原始测序数据为1860．64 Mbp,每份样品平均产生54．86 Mbp的clean data序列,各样品检测的Tags数量平均为60000,Unique tags序列数量均值为58364;操作分类单元（ operational taxonomic units , OTU）数量181～2239。在医院船12个舱室中共检测到26个细菌门纲目等类,216个细菌科,414个细菌属。其中在各级水平分布的优势菌群分别为厚壁菌门（Firmicutes）、葡萄球菌科（Staphylo－coccaceae ）和葡萄球菌属（ Staphylococcus）。在属水平,葡萄球菌属在L位和J位分布最多,微球菌属在B位分布最多（27．15％）,不动杆菌属在K位占优势（23．83％）,栖水菌属则主要见于C位。12个舱室两间共有的OTU数量占检测到OTU总数的比例均＜22．3％,其中K位有着最高的Chao指数（4711．55）和Shannon－Wiener指数（8．58）,及最高的Simpson优势度指数（0．9905）。结论医院船菌群构成复杂、多样,以革兰阳性葡萄球菌为优势菌属,并有水生环境中的菌属分布,与陆地医院常见细菌分布存在明显差异,而且各舱室细菌物种丰度及分类也存在明显不同。     

肠免疫组织对肠上皮细胞生长的影响

肠粘膜免疫组织除了发挥免疫功能外,还能通过分泌多种细胞因子调节肠上皮细胞受损后的再生和修复。其中,在二者间起重要交流作用的细胞因子是IFN-γ,此外IL-2和IL-4也对维持正常的粘膜免疫和肠上皮细胞发挥重要调节作用。这些细胞因子调节上皮细胞增殖和分化的机制之一通过上皮细胞表面受体激活JAKs激酶,随后激活包括转录蛋白STAT家族在内的各种不同的信号蛋白,从而表达细胞因子功能。     

天然生物活性N-酰基高丝氨酸内酯小分子抗原的化学合成及其抗体生成初探

目的人工合成N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylated homoserine lactones,N-aHSLs)完全抗原并制备相应单抗,建立N-aHSLs免疫检测的新方法及海洋弧菌N-aHSLs动态监测。方法以月桂酸和高丝氨酸内酯为主要原料,通过多步系列化学反应人工合成N 十二酰高丝氨酸内酯(N-lauroyl-homoserine lactone,N-C12-HSL)及含羧基活性交联基团的半抗原衍生物12-羧基-N-十二酰高丝氨酸内酯（12-carboxyl-N-decanoyl-L-homoserine lactone,12-CD-LHL）,用1H-磁共振、高压/效液相色谱仪和液相色谱 质谱联用方法确证合成产物的结构,并用生物感应法检测合成N-aHSLs的天然生物活性;用N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯法将12-CD-LHL半抗原衍生物连接到载体蛋白;将N-C12-HSL人工完全抗原通过传统单抗制备技术,获得抗N-aHSLs杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法鉴定其特异性和效价。结果质谱、磁共振氢谱分析结果与理论预测相同,成功合成目标产物N-C12-HSL和12-CD-LHL半抗原衍生物;所合成的N-aHSLs能够分别激活生物感应菌株大肠杆菌MG4和紫色色杆菌026并使之显色;紫外吸收光谱扫描结果显示,半抗原已分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白发生偶联,成功制备完全抗原;共获得3株抗N-C12-HSL单抗,均具有良好的免疫反应性。结论N-aHSLs完全抗原和相应的单抗制备为N-aHSLs动态监测和后续研究奠定了基础。     

bFGF基因在中子辐射肠道损伤和修复中的表达和意义

目的研究肠道经中子照后的病变特点、bFGF蛋白和mRNA的表达及意义。方法采用2．5～5．5Gy中子照射230只BALB／C小鼠，于照后6和12h、1～5d、7、10、14、21和28d分批活杀，采用免疫组化和原位杂交等技术研究bFGF基因在肠组织中的表达。结果照射后隐窝细胞见凋亡与坏死，并呈剂量相关性，2．5Gy组肠黏膜见明显损伤及恢复现象。bFGF蛋白和mRNA于正常肠上皮细胞阳性，其mRNA于血管内皮和间质细胞强阳性。2．5Gy照后3d内，bFGF蛋白进行性减少，照后5～10d，绒毛上皮细胞bFGF蛋白明显增加，5d达高峰，14d恢复至正常水平。4．0Gy以上照后4d内，bFGF进行性减少。bFGF mRNA与其蛋白出现相似的变化规律，其高峰见于照后3d，10d基本恢复至正常水平。结论一定剂量的中子辐射可使肠黏膜明显损伤，并呈剂量相关性；中子照射后肠内源性bFGF基因表达参与其损伤及修复的病理过程，可能对其损伤后的修复起促进作用。     

中国海域分离的创伤弧菌的致病性及其对抗生素的敏感性研究

目的：就中国海域分离的创伤弧菌对小鼠的毒力、伤口感染力和对抗生素的敏感性进行实验研究．方法：昆明小鼠腹腔注射创伤弧菌悬液,观察一般状态、白细胞计数和血培养．第5日脱颈处死后解剖取脏器,用甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜观察．在毒力实验中,昆明小鼠致伤后浸泡在含创伤弧菌的人工海水中45～60min,打捞后分笼于层流柜中饲养．于致伤浸泡后不同时间行白细胞计数及血培养,并观察一般状态和伤口炎性反应、定时取伤肢分泌物培养．将伤肢用甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,用光镜检查．用K—B法作创伤弧菌对各种抗生素药物敏感性实验．结果：小鼠注射创伤弧菌悬液后白细胞升高,死亡率为80％,小鼠的血、脾、肺、肝、肾、肠组织及腹腔培养物细菌培养均为阳性,病变部位以肺、肝及肾脏为重,病变性质主要为血液循环障碍,并由此引起不同程度的充血、出血及血停滞现象．海水浸泡伤创伤弧菌感染小鼠死亡率为20％;20％小鼠12h血培养阳性;6,12h及1～3d伤肢培养均为阳性,死亡小鼠及1d后活杀小鼠所有脏器培养均为阳性．感染小鼠的脏器可见到不同程度的炎症反应,以肺和肝脏较为明显,并有脓肿灶形成．结论：中国海域分离的创伤弧菌具有高度致病力,创伤弧菌除对氨苄西林、哌拉西林、氨曲南、磺胺类抗生素的敏感性较低外,对其它抗生素均有很好的抗菌活性．     

中国海域分离的啮氏艾肯菌致病性和抗生素敏感性研究

目的 就中国海域分离的啮氏艾肯菌对小鼠的毒力及伤口感染情况进行研究,并进行抗生素敏感性实验.方法 昆明小鼠腹腔注射啮氏艾肯菌悬液,观察一般状态、白细胞计数和血培养.第5天脱颈处死后解剖取脏器甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜观察;昆明小鼠致伤后浸泡在含啮氏艾肯菌的人工海水中45～60 min,打捞后分笼于层流柜中饲养.于致伤浸泡后不同时间做白细胞计数及血培养,并观察一般状态和伤口炎性反应,定时取伤肢分泌物做细菌培养;实验完毕后伤肢甲醛同定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜检查;用K-B法做啮氏艾肯菌对各种抗生素药物敏感性实验.结果 小鼠注射啮氏艾肯菌液后,白细胞升高,感染12 h后20%小鼠心和肝脏有细菌生长.小鼠感染啮氏艾肯菌后,病变部位以肺、肝及.肾脏为重,病变性质主要是造成血液循环障碍,引起不同程度的充血、出血及血停滞现象.致伤小鼠经含啮氏艾肯菌的海水浸泡后,6、12、24、48、72 h伤肢培养均为阳性,感染后48 h时20%小鼠肠组织细菌培养阳性,其余时间点和其他组织细菌培养均为阴性.伤肢组织可见肌纤维排列疏松、紊乱、断裂,横纹肌间较多炎细胞浸润.啮氏艾肯菌对复方新诺明、哌拉西林、美洛培南、磺胺的敏感性仅为67%,对其他抗生素均表现为敏感.结论 中国海域分离的啮氏艾肯菌具有致病力,啮氏艾肯菌对复方新诺明、哌拉西林、美洛培南、磺胺的敏感性较低,对其他抗生素均表现为敏感.     

抗腐败西瓦菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

目的 制备和鉴定抗腐败西瓦菌单克隆抗体(mAbs),为建立重要海洋细菌快速ELISA检测试剂盒奠定基础.方法 用灭活腐败西瓦菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗腐败西瓦菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用间接ELISA方法筛选、鉴定其与腐败西瓦菌及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价.结果 共获得4株抗腐败西瓦菌的杂交瘤细胞株(02D6、02H12、03G4、03A7),均符合杂交瘤细胞染色体特点,其培养上清效价为10-1～10-2,具有良好的特异性和免疫反应性.结论 研究制备、筛选出抗腐败西瓦菌的特异性抗体,有助于进一步建立重要海洋细菌快速检测试剂盒.