FLAG方案治疗难治或复发急性白血病的临床研究

目的 探讨氟迭拉宾、中剂量阿糖胞苷联合粒细胞集落刺激因子（FLAG方案）治疗难治或复发急性白血病（AL）的疗效和安全性。方法 21例难治或复发急性白血病（难治13例，复发8例）患者（19例急性髓系白血病，2例急性淋巴细胞白血病）给予由中剂量阿糖胞苷组成的FLAG方案治疗，评估其疗效。结果 2个疗程治疗后，21例患者中12例达完全缓解（57％），3例部分缓解（14％），总有效率71％。难治和复发患者，完全缓解率分剐为53％和63％（P〉0．05）。1例异基因造血干细胞移植后复发的患者经FLAG方案化疗1疗程达完全缓解。骨髓抑制是最主要的不良反应，非血液学副作用较轻，无一例治疗相关死亡。结论 中剂量阿糖胞苷组成的FLAG方案治疗难治或复发AL有效，副作用可以耐受，治疗相关病死率低，为常规化疗无效和移植后复发的AL患者提供了治疗选择和接受造血干细胞移植的时机。     

转染外源性FasL的CD34+细胞诱导同种抗原特异性T细胞凋亡的实验研究

为探讨通过Fas/FasL途径选择性去除移植物中成熟T细胞的可能性 ,本研究借助反转录病毒途径 ,以FasL基因转染骨髓CD34+ 细胞 ,与经过富集的T细胞进行单向混合培养 (刺激细胞 /效应细胞比例为 5∶1) ,加入或不加入IFN γ ,IL 2 ,应用原位末端标记法 (TUNEL)和流式细胞术 (FCM)检测培养 5天后的细胞凋亡率 ,并比较两种细胞因子对移植物中CD34+ 细胞的影响。以转染外源FasL的CD34+ 细胞为刺激细胞 ,T细胞凋亡率为 (12 .1±1.5 ) %〔对照组为 (3.2± 1.1) % ,P <0 .0 1〕 ;经IFN γ或IL 2作用后 ,转染细胞诱导T细胞的凋亡率分别上升至(2 0 .1± 2 .3) % ,(17.6± 1.3) % (P <0 .0 1) ;且IL 2对CD34+ 细胞Fas抗原的表达无明显影响。上述结果表明 ,转染外源FasL的骨髓CD34+ 细胞可诱导同种抗原特异性T细胞凋亡 ,IFN γ和IL 2增强上述致细胞凋亡作用 ,且IL 2更有利于临床应用 ;提示该方案可选择性清除移植物中同种抗原特异性T细胞 ,可望为临床上防治移植物抗宿主病 (GVHD)提供新的途径     

多种化疗药对凋亡抑制蛋白Survivin在HL-60细胞中表达的影响

Survivin基因是细胞凋亡抑制蛋白家族的新成员，由于其具有在人类正常组织不表达而在各种肿瘤组织高表达的特性，因此有望成为肿瘤治疗的选择性靶点；有研究还表明survivin的表达与耐药性的发生有关。本研究旨在通过查明HL-60细胞在多种化疗药物作用后mRNA和蛋白的改变，初步探讨survivin和耐药性之间的关系。用合适浓度的柔红霉素（DNR）、米托蒽醌（MIT）和三氧化二砷（As2O3）作用于HL-60细胞，随后用RT-PCR检测给药的第1天和第3天HL-60细胞中survivin mRNA的表达情况，用Western blot检测survivin蛋白的表达情况。结果表明：在给予化疗药的第1天3组HL-60细胞中survivin mRNA表达水平全部降低，其中DNR组下降了10％，MIT组下降40％（P〈0．01），As2O3组下降了25％（P〈0．01）。在给予化疗药的第3天，DNR和MTT组的HL-60细胞中survivin mRNA表达较第1天有明显的升高，分别上升20％（P〈0．05）和65％（P〈0．01）；但给予As2O3组中的survivin mRNA表达仍持续降低，仅为第1天的68％（P〈0．01）。Western blot检测发现，给予DNR和MIT3天后的HL-60细胞中survivin蛋白含量分别升高了14％和11％，而给予As2O3组则下降了82％。结论：在给予化疗药后白血病细胞survivin表达先降低后升高的现象可能与化疗中耐药性的发生有关，而三氧化二砷有着不同的作用机制，这在逆转耐药性上可能发挥重要的作用。     

细胞膜表达的HLA-G诱导免疫耐受性树突状细胞的产生

为了探讨体外诱导免疫耐受性树突状细胞（dendritic cell,DC）产生的方法及其机制,利用人HLA-G1真核表达载体转染K562细胞并与DC共培养后,用流式细胞术检测DC表面CD80、CD86、ILT3和ILT4分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法检测DC对T细胞功能的影响。结果表明,膜表达的HLA-G1分子与树突状细胞作用后,DC表面免疫共刺激分子CD80、CD86表达下调,而抑制性分子ILT3、ILT4表达上调。HLA-G1作用后DC异基因抗原诱导淋巴细胞增殖的活性明显下降。结论：HLA-G1分子可以在体外条件下,下调DC表面免疫共刺激分子水平,促进ILT3、ILT4表达,诱导免疫耐受性树突状细胞产生。     

通过Fas-FasL途径体外清除小鼠同种异体反应性T细胞

目的　通过Fas Fas配体 (FasL)途径清除小鼠同种异体反应性T细胞 (ARTC) ,为减轻异基因骨髓移植 (allo BMT)后的移植物抗宿主病探索新的手段。方法　用磁性细胞分离系统分离BALB c小鼠 (H 2 d)Sca 1+早期造血细胞 (HC) ,然后借助逆转录病毒基因转移技术对其转染外源小鼠FasL(mFasL)cDNA基因 ;扩增 1周后与异基因BAC小鼠 (H 2 d ×b)脾细胞进行单向混合淋巴细胞培养(OWMLC) 6d ,观察处理后的BAC小鼠脾细胞对Na251 CrO4标记的BALB c小鼠脾细胞的杀伤作用。结果　成功分离出BALB c小鼠Sca 1+HC ,纯度为 (89.0± 6 .1) %。BAC小鼠脾细胞与转染外源mFasL的BALB cHC以 1∶5比例共培养 6d后 ,对BALB c源脾细胞杀伤率在不同效、靶比例时均呈显著降低 (P<0 .0 1)。结论　体外反应中 ,转染外源mFasLcDNA并高表达的早期HC可清除针对自身MHC抗原的ARTC。     

脱细胞角膜基质与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化活性人工角膜

目的:观察以脱细胞角膜基质作为支架材料、以骨髓间充质干细胞作为种子细胞复合构建组织工程化人工活性角膜的可行性。方法:实验于2004-09/2005-06在南昌大学江西医学院烧伤研究所完成。①取兔新鲜角膜,浸入1.25g/L胰蛋白酶和0.1g/L乙二胺四乙酸溶液中作用24h,然后浸入1%曲拉通X-100溶液中作用120h,制备成脱细胞角膜基质,进行常规组织学苏木精-伊红染色观察。②采用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化人骨髓间充质干细胞,用含10μg/L表皮生长因子的Dulbecco最低必需培养基进行诱导培养。③将经诱导培养的骨髓间充质干细胞种植于脱细胞角膜基质上,复合构建组织工程化人工活性角膜,观察细胞与材料的黏附、细胞增殖情况。结果:①脱细胞角膜基质主要由胶原纤维组成,未见细胞成分残留。②经表皮生长因子诱导培养的人骨髓间充质干细胞体外增殖良好,24h后贴壁细胞增多,7～10d细胞多为梭形,呈有规则的集束辐射状排列;14～21d左右细胞基本融合。③将人骨髓间充质干细胞种植于脱细胞角膜基质上,细胞铺展和增殖良好。结论:以骨髓间充质干细胞作为种子细胞复合脱细胞角膜基质支架材料可成功构建组织工程化人工活性角膜,有望成为一种修复角膜缺损的新技术方法。     

Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞抑制树突状细胞功能

为了研究Foxp3基因表达与CD4^＋T细胞免疫活性的关系,用逆转录病毒转染Foxp3基因,在幼稚CD4^＋CD25^-T细胞内强制性表达FOXP3蛋白,进而研究转染后的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的免疫共刺激分子和免疫功能的影响,并通过Transwell试验研究转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞的作用是否依赖于细胞之间的直接接触。结果表明：通过逆转录病毒载体转染,成功建立了表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞模型,转染后1周Foxp3阳性表达的T细胞比例为38%。强制性表达Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞可以在体外发挥免疫抑制作用,可以诱导树突状细胞表面免疫共刺激分子CD80和CD86表达水平的下调。体外淋巴细胞增殖试验结果表明,Foxp3转染小鼠CD4^＋CD25^-T细胞可以抑制树突状细胞对异基因淋巴细胞的活化。结论：转染Foxp3的CD4^＋CD25^-T细胞对树突状细胞发挥的作用依赖于细胞之间的直接接触。     

S基因型急性早幼粒细胞白血病一例

患者,女,39岁,因“牙龈出血1月余伴经量增多1月”入院。既往无特殊病史。查体：面色苍白,全身皮肤散布青紫瘀斑,以四肢为重。血常规：WBC1．5×10^9／L,Hb58g/L,PLT23×10^9／L。外周血涂片：有核细胞少,成熟红细胞大小不等,血小板少见。化学染色：POX（＋）,PAS（-）,CE（＋）,ANAE（＋）,＋NaF（不抑制）。骨髓穿刺出现反复干抽,骨髓细胞学结果：（1）骨髓有核细胞增生活跃。     

护齿保健与氟化泡沫在学龄前儿童防龋中的作用

本研究在学龄前儿童牙齿保健护理,预防龋齿方面,将云南省昆明市五华区2008年至2010年3～6岁部分在园幼儿分为未采取任何措施的对照组、保健指导组、使用氟化泡沫组三部分进行处理,经调查发现预防龋齿的效果为:使用氟化泡沫组>保健指导组>未采取任何措施的对照组,在儿童防龋措施中,将护齿保健指导和氟化泡沫防龋技术结合综合使用,用于集体儿童口腔保健,有效且必要。