死精症患者精液细菌学分析

目的 了解致精子死亡的原因及死精症惠者的致病菌分布及药敏情况，为死精症息者的治疗提供科学指导。方法 采用细菌分离培养、药敏纸片抑菌实验进行精液细菌学分析与药敏试验。用细菌培养液做抑制精子动力实验，及应用凝胶分子筛层析技术分离抑制精子活性的大分子物质。结果 100例死精症患者精液标本中分离出12种细菌83株，其中G^＋菌6株，占7．2％；G-菌77株占92，8％，以大肠杆菌、嗜水气单胞菌、催产克雷伯氏菌为主要优势菌；对所选6种抗菌素纸片的药敏试验，以环丙沙星、丁胺卡那霉素抑茼非常显著，头孢三嗪和泰能也有较好的抑菌抑菌作用；凝胶分子筛层析分离结果表明，抑制精子的活性物质为细菌分泌的蛋白质。结论 对死精症的诊治过程中，细菌分离培养非常必要，合理应用抗菌素，以有效的治疗死精症。     

唾液酸酶检测对细菌性阴道炎的诊断价值与临床应用

目的评价唾液酸酶检测对细菌性阴道炎(Bacterial Vaginosis,BV)的诊断价值与临床应用,分析BV与其它阴道疾病的关系.方法以酶反应学原理检测阴道分泌物唾液酸酶的活性,同时以革兰氏染色法找线索细胞及白带常规检查作对照.结果在BV诊断中,唾液酸酶法阳性率为29.3%,革兰氏染色法为24.1%,两者之间有显著差异性(p＜0.05).在滴虫性及念珠菌性阴道炎中,唾液酸酶阳性率分别为90.9%和22.2%.结论在BV诊断中,唾液酸酶法阳性率高于传统革兰氏染色法.虽然唾液酸酶法和其它方法一样存在交叉感染滴虫(6.2%)及念珠菌(7.4%)等病原体的问题,但其简便、快捷、可靠、结果易判读、特异性强,可批量操作,不失为一种临床上可行的好方法.     

葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药及诱导耐药表型与基因型的相关性研究

目的 了解葡萄球菌对大环内酯类抗生素生物耐药表型与基因型的符合情况,分析耐药基因检出与生物耐药诱导的关系,并预测细菌耐药流行趋势,从基因水平指导临床合理用药.方法 用KB纸片法检测本院2004～2005年分离的136株葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,以聚合酶链反应(PCR)法榆测葡萄球菌MsrA、vgb、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、MefA/E、ereA、ereB 10种耐药基因,并将其耐药表型与基因型进行比较.将对红霉素表型敏感而耐药基因阳性的菌株进行诱导,对比诱导前后药敏结果.结果 136株葡萄球菌对红霉素耐药的占80.88%,对红霉素和克林霉素同时耐药占43.38%,结果表明葡萄球菌对大环内酯类有较高的耐药率.耐药基因检测结果表明,共检出MsrA、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、ereB 7种耐药基因,耐药基因检出率为83.82%.其中核糖体甲基化酶基因ermC的阳性率最高,占检测基因的67.54%;其次为Sat4、MsrA、ereB、ermA、ermB、mphA,分别占50.00%、28.95%、22.81%、15.80%、9.65%、1.75%.MRSA、MRCNS、MSSA、MSCNS菌株耐药基因的检出率分别为100.00%,90.78%、73.08%、55.55%.11株对红霉素敏感而耐药基因阳性的菌株经红霉素诱导后有9株转为耐药,诱导阳性率为81.82%.结论 葡萄球菌对大环内酯类抗生素有较高的耐药性,在部分敏感株中检测出耐药基因,经诱导可产生耐药,提示菌株有潜在耐药性,需特别引起临床的重视.临床微生物实验室应同时开展表型及基因型检测,指导临床更加合理使用抗生素.     

淋球菌性菌血症的快速筛查及鉴定

目的探讨16S rDNA检测技术在快速筛查鉴定淋球菌性菌血症中的应用价值.方法选择1例反复规律性发热、畏寒1个月入院的41岁男性菌血症患者,入院前几天开始出现尿急、尿频和尿痛症状,大便正常,贫血消瘦外容,皮肤黏膜稍苍白,无出血点及皮疹,全身浅表淋巴结未及肿大,血尿常规异常,肝肾功能尚可.采用PCR检测菌血症患者外周血病原菌16S rDNA,对其扩增产物进行DNA测序,再将DNA序列结果与GenBank中的已知序列进行同源性比较;同时对外周血病原菌进行分离培养鉴定及药敏实验.结果16S rDNA扩增产物序列与GenBank中的已知序列进行同源性比较后确定为淋病奈瑟菌,同外周血分离培养鉴定结果一致.结论检测淋球菌性菌血症患者外周血16S rDNA具有高效率、高特异性、高灵敏度、快速准确等特点.     

深圳市儿童秋冬季腹泻诺如病毒检测及基因型分析

目的 了解深圳市儿童秋冬季腹泻中诺如病毒（Nov）的感染状况,并对阳性株进行基因型分析.方法 收集深圳地区多家医院2009年9月至2010年1月腹泻患儿粪便标本307份,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法进行诺如病毒核酸扩增,部分阳性标本的PCR产物经纯化、测序,结合GenBank参考株相应核酸序列构建系统进化树并进行基因型分析,采用SimPlot3.5.1对重组株进行分析和鉴定.结果 307份粪便标本中诺如病毒核酸阳性38例,阳性率为12.4％,以6～24个月龄婴幼儿感染为主,占全部病例数的81.6％（31 /38）,感染的发病高峰为10、11月份,占全部病例数的73.7％ （28/38）;26份测序标本中25株属于GⅡ.4型2006b变异体,1株为GⅡ.12/GⅡ.3型重组株.结论 诺如病毒是深圳市儿童秋冬季腹泻的重要病原体,优势流行株为GⅡ.4型2006b变异体,深圳首次检出的诺如病毒重组株为GⅡ.12/GⅡ.3型.     

人巨细胞病毒多肽抗原的免疫原性分析

目的分析人巨细胞病毒多肽抗原的免疫原性强弱,寻求与早期诊断相关的抗原成分。方法应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术对比分析细胞抗原与病毒抗原的差异,确定病毒多肽抗原的存在,利用不同时期免疫动物的多克隆抗体分析病毒多肽抗原的免疫原性。结果SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和多克隆抗体免疫印迹结果表明分子量为65kD和72kD的人巨细胞病毒多肽抗原免疫原性较强,分子量为51kD和58kD的病毒多肽抗原免疫原性较弱,分子量为150kD的抗原免疫原性最弱。结论65kD和72kD的人巨细胞病毒多肽抗原可以应用于病毒感染的临床确诊。     

泌尿生殖道解脲和人型支原体感染及药敏分析

目的：了解本地区泌尿生殖道支原体感染状况及药敏分析。指导临床合理用药。方法：用液体培养的方法分离鉴定解脲支原体和人型支原体并做计数和9种药敏试验。结果：1378例患者支原体培养阳性430例。占31．20％；其中单纯UU377例，占27．4％；单纯NH10例。占0．73％；UU＋NH混合感染43例，占3．12％。泌尿生殖道支原体感染以UU为主，占87．7％；其次为NH占2．3％和UU＋NH占10％。药敏结果显示UU、NH和UU＋NH感染三种模式，均对强力霉素、米诺环素的敏感性强（65～90％），对罗红霉素的敏感性最差（0～6％）；除UU对克拉霉素的敏感性为76％。对其余抗生素敏感性均小于50％以下。结论：米诺环素、强力霉素可以作为目前治疗UU、NH和UU＋NH感染的首选。支原体耐药性的长期监测是指导临床治疗的重要依据，临床医生应根据药敏结果合理选择抗生素。     

葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药及诱导耐药表型与基因型的相关性研究

目的 了解葡萄球菌对大环内酯类抗生素生物耐药表型与基因型的符合情况,分析耐药基因检出与生物耐药诱导的关系,并预测细菌耐药流行趋势,从基因水平指导临床合理用药.方法 用KB纸片法检测本院2004～2005年分离的136株葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,以聚合酶链反应(PCR)法榆测葡萄球菌MsrA、vgb、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、MefA/E、ereA、ereB 10种耐药基因,并将其耐药表型与基因型进行比较.将对红霉素表型敏感而耐药基因阳性的菌株进行诱导,对比诱导前后药敏结果.结果 136株葡萄球菌对红霉素耐药的占80.88%,对红霉素和克林霉素同时耐药占43.38%,结果表明葡萄球菌对大环内酯类有较高的耐药率.耐药基因检测结果表明,共检出MsrA、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、ereB 7种耐药基因,耐药基因检出率为83.82%.其中核糖体甲基化酶基因ermC的阳性率最高,占检测基因的67.54%;其次为Sat4、MsrA、ereB、ermA、ermB、mphA,分别占50.00%、28.95%、22.81%、15.80%、9.65%、1.75%.MRSA、MRCNS、MSSA、MSCNS菌株耐药基因的检出率分别为100.00%,90.78%、73.08%、55.55%.11株对红霉素敏感而耐药基因阳性的菌株经红霉素诱导后有9株转为耐药,诱导阳性率为81.82%.结论 葡萄球菌对大环内酯类抗生素有较高的耐药性,在部分敏感株中检测出耐药基因,经诱导可产生耐药,提示菌株有潜在耐药性,需特别引起临床的重视.临床微生物实验室应同时开展表型及基因型检测,指导临床更加合理使用抗生素.     

引物标记技术的应用与葡萄球菌多重耐药基因检测法的建立

目的 基于多重基因遗传信息表达分析系统(GeXP)技术平台,应用CY5(荧光染料)标记的特异引物代替通用引物,建立一种高通量的葡萄球菌多重耐药基因检测法。方法 设计细菌16S rDNA、耐甲氧西林相关基因(mecA、MecA LGA251)与耐大环内酯类相关基因(ermA、ermB、ermC、sat4、msrA、ereA、ereB、mefA/E)的引物,经“PCR+琼脂糖电泳”筛查2014年1月—2016年12月中山大学附属第八医院129株耐甲氧西林或者耐红霉素葡萄球菌基因,同时优化PCR。用CY5标记上游引物5'端,制作GeXP多重PCR引物。应用多重PCR扩增多重耐药基因核酸,产物经琼脂糖电泳与GeXP毛细管电泳,分析电泳图优化PCR。应用优化后的GeXP多重PCR扩增43株葡萄球菌,验证应用效果。结果 129株葡萄球菌筛出7种基因(16S rDNA、mecA、ermA、ermB、ermC、sat4和msrA)。16S rDNA、mecA、ermA、ermB、ermC和msrA引物特异性好,但不同核酸的sat4基因能扩增出两种不同大小片段。建立的GeXP多重PCR能同时检出所有靶基因。43株葡萄球菌的检测结果与表型检测(VITEKⅡ Compact System)相符;与“PCR+琼脂糖电泳”相比：sat4符合率为97.67%(42/43),无统计学差异(P＞0.05);msrA符合率为95.35%(41/43),无统计学差异(P＞0.05);ermA、mecA、16S rDNA、ermB和ermC符合率均为100%(43/43)。结论 采用CY5标记特异引物应用于GeXP系统检测葡萄球菌多重耐药基因的方法可行,其特异性与敏感性高,若采用更多引物,其检测通量可进一步提高。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型分析

目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)的主要基因型。方法用表型确定的临床分离产ESBL s的肺炎克雷伯菌34株,分别用TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2和CTX-M-9扩增引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果PCR扩增结果显示TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2和CTX-M 9的阳性率分别为47.06%,85.29%,26.47%,32.35%和52.94%,CTX-M型总阳性率为88.24%,序列分析证实扩增为目的产物。结论34株ESBL s肺炎克雷伯菌的主要基因型是CTX-M型和SHV型,且同时携带2种以上基因的菌株占所测菌株的82.35%,需引起临床的高度重视。