精浆和血清抗苗勒管激素与精液参数的相关性研究

目的探讨精浆和血清抗苗勒管激素(AMH)水平与男性精子数量和活力的相关性。方法选取到广东省中山市博爱医院生殖门诊就诊的、因女性原因不孕的健康男性215例,检测精浆、血清AMH及精液参数(精子的密度、活率、活力及畸形率),测定血清性激素6项。分别以精浆和血清AMH为因变量,采用多重线性回归模型探讨其与精液参数和性激素水平的定量关系。结果 215例研究对象中,总精浆AMH中位数为0.47,四分位数为0.05~3.09pmol/次射精。血清AMH中位数为53.07,四分位数为32.32~72.20pmol/L。经过多重线性回归分析,在矫正年龄和体质量指数后,精浆AMH与精子总数、精液浓度、前向精子活动力、总精子活动力、血清抑制素B呈正相关(P0.05);与精子形态和其他血清性激素相关性比较,差异无统计学意义(P0.05);血清AMH与血清促卵泡激素呈负相关,与血清抑制素B呈正相关(P0.05);与精浆各参数和其他血清性激素相关性比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论精浆AMH个体差异大,与精液浓度、精子总数、精子活力呈正相关,尚未发现血清AMH与其相关。     

干细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子与心肌梗死大鼠体内骨髓间充质干细胞的迁移

背景:外周静脉移植间充质干细胞只有1%～5%的移植细胞能归巢到心肌梗死区域。目的:观察干细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子对骨髓间充质干细胞归巢的影响。方法:采用贴壁培养法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取传至3～5代细胞。建立SD大鼠急性心肌梗死模型,干细胞生长因子组、粒细胞集落刺激因子组、干细胞生长因子+粒细胞集落刺激因子组在骨髓间充质干细胞移植前3d和移植后3d单独或混合皮下注射干细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子,骨髓间充质干细胞组不注射细胞因子。结果与结论:荧光显微镜下观察,骨髓间充质干细胞迁移至心肌梗死组织,骨髓间充质干细胞组、干细胞生长因子组、粒细胞集落刺激因子组迁移至心肌梗死区的骨髓间充质干细胞数量没有明显的区别(P>0.05),干细胞生长因子+粒细胞集落刺激因子组的骨髓间充质干细胞数量明显高于其他3组(P<0.05)。免疫荧光组织化学显示,植入的部分骨髓间充质干细胞表达心肌特异蛋白cTnI。结果说明干细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子两种细胞因子联合应用可以促进骨髓间充质干细胞归巢至心肌梗死区域,在体内微环境的诱导下,骨髓间充质干细胞能够转化为心肌样细胞。     

不明原因复发性流产病人外周血NK细胞的临床意义

目的:探讨不明原因复发性流产(URSA)病人难免流产和成功妊娠后外周血NK细胞的变化及临床意义.方法:选择URSA流产病人44例(URSA流产组)、URSA妊娠病人34例(URSA妊娠组)作为观察组,并选择同期正常妊娠者44例(正常妊娠组)、健康非妊娠者44名(正常非妊娠组)作为对照组.使用流式细胞术检测外周血NK细胞的数量.结果:4组研究对象流产1个月后检测NK细胞占淋巴细胞的比例为(21.18±5.81)％、(16.12±4.1)％、(15.16±3.23)％和(28.16±3.38)％;URSA流产组明显高于URSA妊娠组、正常妊娠组及正常非妊娠组(P<0.01),URSA妊娠组、正常妊娠组及正常非妊娠组之间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论:URSA的发生与NK细胞对胚胎的杀伤增强有关,外周血NK细胞表达水平可作为监测URSA病人的指标.     

高纯度CD3~-CD56~+CD16~+NK细胞体外扩增技术的研究

本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。