维拉帕米对MDR1基因转染的Swiss－3T3细胞的化疗增敏作用

为进一步了解维拉帕米对抗药性逆转作用的待征，在人ＭＤＲ１基因转染的Ｓｗｉｓｓ－３Ｔ３多药抗药性细胞，观察了维拉帕米逆转幅度与阿霉素抗性水平的关系。各个转染细胞与母细胞相比，阿霉素毒性明显降低。非毒性浓度（３Ｕｍｏｌ·Ｌ－１）的维拉帕米对阿霉素毒性的增强作用，在转染细胞均高于母细胞，但逆转幅度与抗性水平成反比。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示，转染细胞基因组中有ＭＤＲ１ｃＤＮＡ整合。转染细胞的阿霉素蓄积障碍可被维拉帕米纠正。讨论了药物主动转运的饱和现象在维拉帕米增强效应中的作用，以及Ｐ－糖蛋白与药物相互作用的方式。     

维拉帕米对MDR1基因转染的Swiss-3T3细胞的化疗增敏作用

为进一步了解维拉帕米对抗药性逆转作用的特征,在人MDR1基因转染的Swiss-3T3多药抗药性细胞,观察了维拉帕米逆转幅度与阿霉素抗性水平的关系。各个转染细胞与母细胞相比,阿霉素毒性明显降低。非毒性浓度(3μmol·L^-1)的维拉帕米对阿霉素毒性的增强作用,在转染细胞均高于母细胞,但逆转幅度与抗性水平成反比。Southern杂交显示,转染细胞基因组中有MDR1 cDNA整合。转染细胞的阿霉素蓄积障碍可被维拉帕米纠正。讨论了药物主动转运的饱和现象在维拉帕米增强效应中的作用,以及P-糖蛋白与药物相互作用的方式。     

Stable overexpression of PML alters regulation of cell cycle progression in HeLa cells

Our previous studies demonstrated that PML is a growth suppressor that suppresses oncogenic transformation of NIH/3T3 cells and rat embryo fibroblasts. PML is a nuclear matrix-associated phosphoprotein whose expression is regulated during the cell cycle. Disruption of PML function by t(15;17) in acute promyelocytic leukemia (APL) plays a critical role in leukemogenesis. To further study the role of PML in the control of cell growth, we have stably overexpressed PML protein in the HeLa cell line. This overexpression of PML significantly reduced the growth rate of HeLa cells and suppressed anchorage-independent growth in soft agar. We consequently investigated several parameters correlated with cell growth and cell cycle progression. We found that, in comparison with the parental HeLa cells, HeLa/PML stable clones showed proportionally more cells in G1 phase, fewer cells in S phase and about the same number in G2/M phase. The HeLa/PML clones showed a significantly longer doubling time as a result of a lengthening of the G1 phase. No effect on apoptosis was found in HeLa cells overexpressing PML. This observation indicates that PML suppresses cell growth by increasing cell cycle duration as a result of G1 elongation. To further understand the mechanism of the effect of PML on HeLa cells, expression of cell cycle-related proteins in HeLa/PML and parental HeLa cells was analyzed. We found that Rb phosphorylation was significantly reduced in PML stable clones. Expression of cyclin E, Cdk2 and p27 proteins was also significantly reduced. These studies indicate that PML affects cell cycle progression by mediating expression of several key proteins that normally control cell cycle progression. These results further extend our current understanding of PML function in human cells and its important role in cell cycle regulation.      

Isoelectric focusing of human von Willebrand factor in urea-agarose gels

An analytical technique has been developed for the isoelectric focusing (IEF) of plasma von Willebrand factor (vWF) in agarose gels containing urea. Under these conditions, vWF freely enters the gel and focuses without artifact. The focused vWF is visualized by staining fixed gels with 125I-labeled affinity-purified heterologous antibody. Utilizing a pH gradient of 5.0-6.5, normal vWF in plasma or purified preparations focuses into at least three bands with apparent isoelectric points (pI) between pH 5.7 and 5.9. A reproducible difference in the IEF pattern of vWF has been established between normal plasmas and those of individuals with variant von Willebrand's disease (vWd) type IIA and type IIB. In type IIA, vWF has a distinctly lower pI than normal. This difference may be related to the presence of smaller vWF multimers in IIA plasma because forms of vWF of corresponding size contained in normal cryoprecipitate supernatant have a similar pI. Type IIB von Willebrand factor has a pI intermediate between normal and IIA. Neuraminidase treatment of plasma samples before IEF results in an increase in pI in normal, type IIA, and type IIB vWF. The data suggest that none of the 16 type IIA and 9 IIB plasmas studied here contain significantly decreased amounts of sialic acid.     

小鼠Leydig细胞中调控类固醇合成时EGF与TGF-β1的相互作用

目的 探讨在纯化的小鼠Leydig细胞的原代培养中,转化生长因子-β1(TGF-β1)和表皮生长因子(EGF)在调控类固醇合成中的相互作用.方法 纯化小鼠睾丸Leydig细胞,并将其分为四组,不加EGF或TGF-β1的空白对照组、仅加入EGF(10ng/ ml; 72h)的EGF组、仅加入TGF-β1(1ng/ml; 48h)的TGF-β1组和加入EGF与TGF-β1的EGF+ TGF-β1组.在不同条件下,通过特定的放射免疫(RIAs)法检测培养基中睾酮和脱氢表雄酮(DHEA)的表达水平. 结果 TGF-β1和EGF分别增强了人绒毛膜促性腺激素 (hCG)刺激睾酮合成的功能,二者的最大浓度效应在促性腺激素的激素作用中是叠加效应.它们的叠加效应来自一种复杂的相互作用,这一相互作用发生在胆固醇底物水平和3β-羟基类固醇脱氢酶/异构酶(3βHSDI)作用的水平. 结论 TGF-β1和EGF对于线粒体胆固醇底物活性的相互抑制效应,伴随着对3βHSDI活性的刺激增加效应,表明这两种生长因子对于促性腺素诱导的睾丸雄激素合成具有叠加效应.     

干扰电治疗仪改善糖尿病神经原性膀胱逼尿肌无力：与电针治疗比较

目的:观察干扰电治疗仪治疗糖尿病神经原性膀胱逼尿肌无力的疗效,并与电针治疗比较。方法:选择2006-01/10佛山市第一人民医院康复科、内分泌科住院的糖尿病神经原性膀胱患者60例。随机分成对照组30例和治疗组30例,所有患者对实验和治疗知情同意。治疗组用日本米拉多公司生产的SD-21V干扰电治疗仪进行治疗,每次治疗25min,1次/d,每周6次,共治疗20次。对照组采用汕头市医用设备厂公司生产的805-AⅡ型电针仪治疗。穴位取双侧三阴交、膀胱俞、次髎,使用疏密波,15Hz,电流强度为耐受量,留针30min,1次/d,每周6次,共治疗20次。治疗前后测定尿流动力学指标、日平均排尿次数及尿量情况。结果:60例患者均进入结果分析。①尿流动力学的变化:治疗组最大膀胱容量、最大尿道闭合压、最大尿流率均大于对照组(P<0.01￣0.001),残余尿少于对照组(P<0.001)。②日平均排尿次数及尿量情况:治疗组日平均排尿次数、日平均单次尿量、日单次最大排尿量均大于对照组(P<0.05￣0.001)。结论:两种方法治疗糖尿病神经原性膀胱逼尿肌无力均有显著作用,干扰电疗法效果更好。     

自体骨髓干细胞移植治疗神经系统损伤和变性疾病42例报告

目的:观察42例神经系统损伤和变性疾病患者经自体骨髓干细胞移植后,其神经系统症状与体征的改善。方法:①选取2005-06/2006-09解放军第四六三医院神经外科收治的神经系统损伤和变性疾病患者42例,对本试验均签署知情同意书。其中各种原因所致脊髓损伤30例,脑血管意外引起的偏瘫4例,老年痴呆2例,小脑疾患引起的共济失调2例,运动神经元变性疾病4例。患者入院后常规检查身体各项指标以评估是否适合行干细胞移植术。②术前患者均于皮下注射粒细胞集落刺激因子进行骨髓干细胞动员,5～12μg/(kg.d),连续4～5d。动员结束后患者在局麻状态下,于髂后上棘采集自体骨髓血约200mL,去除红细胞,密度梯度离心,分离出单个核细胞,再将收获的单个核细胞制成1.5mL细胞悬液(约1×108个细胞)备用。③通过手术或立体定向的方法将干细胞直接移植在神经损伤或变性部位,然后再根据病情经腰穿或静脉途径进行细胞移植,每次给予干细胞量按(2～3)×102个/kg计算,1次/周,共4周。④自体骨髓干细胞移植治疗过程中,为促进干细胞的生长和分化,根据患者病情及个人身体状况给予物理疗法、作业疗法等相应的康复功能锻炼,同时配以针灸、高压氧及药物营养神经和改善微循环治疗。结果:42例神经系统损伤和变性疾病患者均进入结果分析。自体骨髓干细胞移植治疗后1～3个月,17例脊髓损伤患者肢体症状明显改善,尤其是脑损伤后遗症引起的脊髓损伤其肢体症状改善更为显著;2例脑出血和1例脑血栓引起偏瘫的患者其肢体症状改善效果均较好;遗传性共济失调的2例患者疗效均不明显;1例老年痴呆患者其老年痴呆症状得到明显改善,并能在搀扶下行走,与旁人进行正常的交流;运动神经元变性病中1例患者肌萎缩性侧索硬化症改善效果较好,肌张力正常,颤抖减轻及至消失,多发性硬化中2例患者症状减轻。结论:干细胞移植配合功能锻炼等辅助手段对神经系统损伤和变性疾病的治疗效果肯定,有一定的临床应用价值。     

鸭乙肝模型氧化应激反应及金丝桃苷的干预

目的:观察鸭乙肝病毒感染所致稚鸭血清及肝脏氧化应激状态的改变及金丝桃苷的干预作用。方法:实验于2006-03/07在中国医学科学院生物技术研究所以及解放军第三○一医院老年医学研究所进行。①实验分组:44只1日龄北京稚鸭随机分为7组:正常组,模型组,金丝桃苷15,30,60mg/(kg·d)剂量组,拉米夫定50mg/(kg·d)组和恩替卡韦0.25mg/(kg·d)组。其中正常组5只,金丝桃苷15,30,60mg/(kg·d)剂量组各7只,其余各组6只。②实验干预:除正常组外,其余6组每只动物经胫静脉注射鸭乙肝病毒阳性血清0.2mL,第7天开始灌胃给药,2次/d,给药10d,正常组和模型组给予等量生理盐水。停药后第3天处死动物检测相关指标。③实验评估:黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性、非酶促反应法检测谷胱甘肽过氧化物酶活性,硫代巴比妥酸法检测丙二醛含量。结果:纳入稚鸭44只,在模型制备及后期干预中无动物死亡,全部纳入统计分析。与正常组相比,模型组肝匀浆超氧化物岐化酶活性、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛含量显著降低(P<0.01,P<0.05),而血清谷胱甘肽过氧化物酶活力及丙二醛含量显著升高(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,金丝桃苷治疗组肝匀浆超氧化物岐化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛含量显著升高(P<0.01,P<0.05),然而血清谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛含量显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:鸭乙肝病毒感染引起稚鸭肝脏氧化应激损伤,金丝桃苷可有效的逆转肝损伤。     

广州地区健康成年汉族人群身体组成成分调查

目的:了解广州地区健康成年汉族人群身体各组成成分的含量及其分布情况,并分析其年龄变化规律。方法:①收集2002-01/2005-12在暨南大学附属第一医院核医学科接受全身骨密度检查的470名广州地区健康成年汉族居民,其中男97名,女373名,年龄20～87岁。体质量指数均正常,即≥18.5kg/m2,<25kg/m2,且自愿接受检查。按10岁为1个年龄组对各组数据进行分析。②采用双能X射线骨密度仪测量受检者全身骨矿盐含量、全身脂肪含量、瘦组织含量、腰腹部Android区域脂肪含量、髋部Gynoid区域脂肪含量、全身脂肪百分比、腰腹部Android区脂肪百分比、髋部Gynoid区脂肪百分比、Android区与Gynoid区脂肪比值;计算体质量指数[体质量(kg)/身高(m)2]。③组间计量资料差异比较采用t检验。结果:健康成年汉族居民470名均进入结果分析。①男、女性骨矿盐含量、瘦组织含量峰值出现在40～49岁,以后均随年龄增加而逐步下降,到70岁以上年龄段,骨矿盐含量和瘦组织含量分别较40～49岁下降11.4%和6.0%(男性),26.4%和5.6%(女性)。②男、女性全身脂肪含量峰值分别出现在60～69岁和50～69岁,全身脂肪百分比峰值出现在60～69岁。男、女性A/G峰值分别出现在50～69岁和60～69岁,体脂分布均随年龄增长而呈向心化趋势。女性全身脂肪含量及各部分脂肪百分含量均明显高于男性,而男性骨矿盐含量、瘦组织含量高于女性(P<0.05)。结论:40～49岁之前,健康成年汉族人群虽脂肪增长比例较大,但非脂肪组织(骨矿盐含量、瘦组织含量)同样也呈增长趋势;50～69岁,体脂含量逐渐增加,呈向心化趋势,存在性别差异。70岁以后身体脂肪含量下降。     

玻璃化保存工程化组织产品的实验与技术

目的:总结近年来玻璃化保存技术的新进展和多种工程化组织玻璃化保存的实验研究。探讨影响工程化组织低温保存的主要因素、评价指标等,以期指导玻璃化保存工程化组织的实验研究。资料来源:应用计算机检索Medline,EBSCO,ScienceDirect Onsite以及google scholar引擎中1980-02/2006-05关于细胞和组织低温保存的文献,检索词“tissue engineering,engineered tissue,cryopreservation,vitrification,ice-free cryopreservation,vitreous cryopreservation”,检索词被分别组合进行检索,限定文献语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1980-02/2006-05关于细胞和组织低温保存的文献,检索词“组织工程,工程化组织,冻存,玻璃化保存”,限定文献语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选出与研究关系密切的文献。纳入标准:研究对象为动物或人,包括基础与临床研究内容。重点选取与玻璃化保存技术基本原理相关以及具体的工程化构建物玻璃化保存相关的文献。排除标准:关于配子,胚胎和植物,食品等的玻璃化保存文章。资料提炼:共检索到122篇关于细胞和组织低温保存的文献,其中与本实验关系密切的文献17篇,间接相关的文献42篇,最终纳入31篇符合标准的文献。资料综合:组织工程产业化要求长期而稳定的保存包含活细胞的工程化组织产品,以及产品中细胞与材料的黏附。相对于传统的低温冻存技术而言,玻璃化保存因在保存过程中无细胞内外冰晶形成,可以改善复温后的细胞活力,并能保护细胞和支架材料之间的黏附。本文从近年来玻璃化保存技术的新进展和多种工程化组织玻璃化保存的实验研究进行综述,分析了玻璃化保存液要求高浓度,对细胞有非特异毒性损伤,对悬浮单细胞的玻璃化保存能得到较高的细胞存活,而与支架材料结合的种子细胞存活除受到冻存试剂和流程的影响外还受到自身结构的影响。结论:玻璃化保存是较好的生物系统保存方法,可以为工程化组织产品提供可靠的保存,但急需发现新的低毒高效的玻璃化试剂以及优化保存流程。