应用新型假包膜糖蛋白提高慢病毒感染人T细胞效率的研究

目的 利用基因工程方法构建一种新型假包膜糖蛋白表达载体来提高慢病毒感染人T细胞的效率。方法 采用分子克隆技术构建CD5-scFv-VSV-G质粒;慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装慢病毒并感染Jurkat细胞,流式细胞术检测转导率并计算其滴度;慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装慢病毒感染健康人T细胞获得嵌合抗原受体T细胞。结果 与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒能够提高感染率1.5倍(10%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对Jurkat细胞的感染率为63.1%),而在293T细胞中,不同比例CD5-scFv-VSV-G慢病毒的感染率都低于野生型WT VSV-G慢病毒。当感染复数(MOI)=5时,与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒能够提高感染率1.6倍(33%的CD5-scFv-VSV-G慢病毒对CD3⁺T细胞的感染率为44.1%);当MOI=10时,与野生型WT VSV-G慢病毒比较,CD5-scFv-VSV-G慢病毒也能够提高感染率1.5倍(33%的CD5-scFv-VSV-G慢...     

大脑前部和后部皮质萎缩患者认知功能变化及神经心理学特点

目的了解前部及后部皮质脑萎缩对认知功能的影响,探讨前后部皮质脑萎缩患者神经心理学特点。方法收集头颅磁共振成像(MRI)检查表现为大脑前部皮质萎缩组11例、大脑后部皮质萎缩组12例,选用简易智能精神状态评估(MMSE)量表、蒙特利尔认知评估(Mo CA)量表、日常生活活动能力(ADL)量表及韦氏智力量表中的图画填充测验、木块图测验、数字广度测验对受试者的认知功能进行测试,评估不同大脑皮质区域萎缩后认知功能损害的特点。结果大脑后部皮质萎缩组Mo CA、MMSE总分均显著低于大脑前部皮质萎缩组(P0.05),大脑后部皮质萎缩组ADL总分略高于前部皮质萎缩组,但差异无统计学意义(P0.05)。大脑后部皮质萎缩组视空间测试中的评分显著低于大脑前部皮质萎缩组(P0.05);而注意力、计算力测试中的评分则显著高于大脑前部皮质萎缩组(P0.05)。在图画填充测试中大脑后部皮质萎缩组评分显著低于大脑前部皮质萎缩组(P0.05)。结论大脑前部皮质萎缩以注意力和计算力损害较为突出。大脑后部皮质萎缩以突出的视觉空间损害为特征,此外还合并有短时记忆、注意、定向、知觉及抽象思维等方面的认知功能损害。     

2型糖尿病肾病患者血清NF-κB、MDA水平及其与肾功能的关系探讨

目的 探讨2型糖尿病肾病(T2DN)患者血清核因子-κB(NF-κB)、丙二醛(MDA)水平及其与肾功能的关系.方法 选取2018年3月—2019年10月徐州市中心医院收治的初诊T2DN患者96例作为DN组,同期该院单纯2型糖尿病患者52例为DM组,另选取同期该院体检健康者52例作为NC组.比较3组血清NF-κB和MD...     

慢病毒介导RNA干扰沉默Fas 基因在脐带间充质干细胞中的表达

目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质
干细胞（UC-MSCs）株,为下一步使用低表达Fas 基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法以人Fas 基因
mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获
得重组慢病毒,通过感染293T 细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染
UC-MSCs,应用Real time- PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况。结果经酶切以及基因测
序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×108 TU/ml。Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas
表达水平较对照组显著降低。结论慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达。
     

淫羊藿苷对NB4白血病细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:选取处于对数生长期的 NB4细胞,随机分为空白对照组和不同浓度(4、8、16、32和64 μmol·L^-1)ICA组,采用MTT法检测作用不同时间(24、48和72h)后各组 NB4细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞24h时细胞周期进程及48h时凋亡情况,采用Western blotting法检测各组NB4细胞48h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果:细胞培养不同时间(24、48和72h)后,各ICA组细胞增殖抑制率高于空白对照组(P<0.05),随ICA浓度增加和作用时间延长,细胞增殖抑制率升高(P<0.05)。各浓度ICA(4、8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞48 h后细胞凋亡率分别为(6.52±4.12)%、(10.07±2.36)%、(15.41±3.64)%、(25.18±1.24)%和(29.41±1.43)%,与空白对照组[(2.39±1.87)%]比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。各浓度ICA(8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞24 h后 S期NB4细胞百分率降低,G₁期细胞百分率升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting 检测,与空白对照组比较,各浓度ICA组NB4细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:ICA通过抑制Bcl-2蛋白表达水平和上调Bax蛋白表达水平诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株凋亡。     

参蛭通脉汤治疗缺血性心肌病心力衰竭气虚血瘀证疗效观察

目的 观察参蛭通脉汤应用于缺血性心肌病(ICM)心力衰竭气虚血瘀证患者的治疗效果。方法 将我院收治的81例ICM心力衰竭气虚血瘀患者按照随机数字表法分为单一组40例和联合组41例,单一组给予沙库巴曲缬沙坦(诺欣妥)治疗,联合组在单一组的治疗基础上予以参蛭通脉汤治疗,观察两组临床疗效、心功能、血清学指标、心衰症状。结果 治疗后,联合组总有效率高于单一组(P<0.05);两组左室舒张末期内径(LVEDD)、心输出量(CO)、每搏输出量(SV)以及左室射血分数(LVEF)均上升,且联合组上述指标高于单一组(P<0.05);两组内皮素-1(ET-1)、氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、生长激素表达基因2蛋白(ST2)水平均下降,且联合组上述指标高于单一组(P<0.05);治疗后联合组呼吸困难、肺啰音、胸片、肝大、浮肿、颈静脉症状评分均低于单一组(P<0.05)。结论 参蛭通脉汤治疗ICM心力衰竭气虚血瘀证患者可调节血清学指标,改善心功能,进而提高治疗效果。     

COPD急性加重期患者治疗前后血清4-HNE水平的变化

目的 综合评估不同分组COPD急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructivepulmonary disease,AECOPD)患者治疗前后血清4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平的变化,探讨4-HNE水平在COPD不同情况下的作用.方法 收集2013年1月至2015年5月山西医科大学附属山西大医院住院的40例AECOPD患者为研究对象,其中男36例,女4例,平均年龄(67±9)岁.所有患者按4种方式分组:①肺功能Ⅰ-Ⅱ级组和肺功能Ⅲ-Ⅳ级组;②B组(低风险多症状组)和D组(高风险多症状组);③合并心血管疾病组和无心血管疾病组;④嗜酸粒细胞≤2％组和嗜酸粒细胞＞2％组.另设健康对照组50例,与AECOPD组患者性别、年龄相匹配.采用酶联免疫吸附试验测定各组患者血清中4-HNE水平.结果 ①与健康对照组(9.4±3.0)mg/L比较,AECOPD患者治疗前(18.5±5.2) mg/L和治疗后(19.0±5.1) mg/L血清4-HNE水平均明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).②AECOPD名组治疗前后及各亚组间治疗前比较血清4-HNE水平差异均无统计学意义(P＞0.05).③肺功能Ⅰ-Ⅱ级组和肺功能Ⅲ-Ⅳ级组及B组和D组治疗后血清4-HNE水平下降的比例分别为43.8％和50.0％及46.7％和54.5％,差异均无统计学意义(P＞0.05).④合并心血管疾病组和无心血管疾病组及嗜酸粒细胞≤2％组和嗜酸粒细胞＞2％组,治疗后血清4-HNE水平下降的比例分别为25.0％和66.7％及73.3％和32.0％,差异均有统计学意义(P＜0.05).⑤AECOPD患者治疗前后血清4-HNE水平与FEV1％pred差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AECOPD患者系统性氧化应激反应增强,合并心血管疾病及外周血嗜酸粒细胞＞2％的AECOPD患者治疗后仍持续存在较高的系统性氧化应激反应,4-HNE水平可能成为COPD不同情况下的生物标志物,并为COPD提供新的治疗靶点.     

徐氏疏肝和胃汤治疗肝胃不和型慢性萎缩性胃炎60例疗效观察

目的:观察徐氏疏肝和胃汤治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效.方法:选择中医辨证属肝胃不和型慢性萎缩性胃炎患者60例,治疗组30例给予徐氏疏肝和胃汤(柴胡、枳壳、白芍、香附等),对照组30例予胃乐宁片,疗程为6个月,观察治疗前后临床疗效.结果:治疗组与对照组的总有效率分别为90.0％、76.7％,2组比较有统计学意义(P＜0.05).结论:徐氏疏肝和胃汤治疗萎缩性胃炎肝胃不和型有较好的临床疗效.     

血清SOD、MDA、NO在波动性高血糖糖尿病大鼠中的表达

目的 观察血糖波动对糖尿病大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)表达水平的影响.方法 SD大鼠60只,随机分成正常饲料喂养组(正常组,n=20)和高糖高脂饲料喂养模型组(模型组,n=40),模型组SD大鼠6周后用小剂量链尿佐菌素(STZ)建立SD大鼠糖尿病模型,之后随机分为持续高血糖组(MS组,n=20)和血糖波动组(MF组,n=20),MF组错时腹腔注射葡萄糖、胰岛素,制备糖尿病血糖波动大鼠模型,正常组和MS组均同时腹腔注射等量生理盐水.测定各组大鼠血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平.结果 (1)MS和MF组TG、LDL-C均明显高于正常组(P＜0.01),而HDL-C均显著低于正常组(P＜0.01);(2)与正常组比较,MS组和MF组SOD、MDA、NO值均有统计学差异(P均＜0.05),MF组SOD、MDA、NO水平高于MS组(P＜0.05).结论 2型糖尿病大鼠体内存在血管内皮损伤和氧化应激;持续高血糖可以损伤血管内皮细胞;血糖的剧烈波动较持续性高血糖引起SOD、MDA、NO变化更为显著,可能导致更为严重的血管内皮细胞损伤.