血清人附睾分泌蛋白-4(HE4)时间分辨免疫荧光分析检测试剂的研制

目的利用时间分辨免疫荧光分析技术(TRFIA)建立血清人附睾分泌蛋白-4(HE4)的检测试剂。方法采用双抗体夹心法建立血清HE4-TRFIA检测试剂并对试剂的各项指标进行评价。结果 HE4-TRFIA检测试剂的灵敏度为0.73 pmol/L,测量范围为0.73~1 000 pmol/L,分析内和分析间的精密度分别为4.6%~7.5%和8.3%~14.4%。与CA15-3、CEA、AFP、HBsAg和CA125无交叉反应。317份正常女性血清标本测试结果提示本试剂的正常参考值范围是0~90 pmol/L。与进口的同类试剂检测,检测结果的相关系数R2为0.976。结论本HE4-TRFIA检测试剂各项指标均能达到临床检测要求,可望替代国外同类产品用于临床检测。     

噬菌体抗体库技术

噬菌体抗体库(surface display phage antibody library)技术用PCR扩增出抗体的全套可变区基因,通过噬菌体表面表达技术(surface display),把Fab段或单链抗体(single chain Fv,ScFv)表达在噬菌体表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体。这一技术将表型和基因型联系在一起,使识别抗原的能力和进行再扩增的能力结合在一起,是一极为高效的表达、筛 选体系,使单抗的制备根本改观,在生物技术领域极具潜能。     

人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%;与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

蛋白酶体激活因子PA28γ与肿瘤相关研究进展

蛋白酶体激活因子PA28γ是PA28家族中的一员,结合并活化20S核心蛋白,从而促进蛋白酶体依赖的重要调节蛋白的降解。PA28γ通过影响包括MDM2、SRC-3、MEKK3在内的许多重要因子的代谢从而在肿瘤和一系列相关的疾病中发挥重要的作用。     

登革病毒E蛋白抗原表位研究进展

登革病毒是虫媒病毒的Ｂ组的一个成员，其ＲＮＡ编码３种结构蛋白和７种非结构蛋白。研究发现，病毒抗原中既存在有中和性抗原表位，又有免疫增强抗原表位，本文就登革病毒主要抗原Ｅ蛋白的表位研究进展作了综述。     

高通量药物靶位基因筛选的策略与方法

目的 探讨药物靶位基因高通量筛选的策略与主要方法，为现代药物研究提供新的理念。方法 以国内外有影响的杂志有代表性的文献为依据，重点就药物靶基因在药物研发中的重要性、药物靶基因筛选的几种策略及主要方法进行分析、归纳和综述。结果与结论 人类基因组计划的实施和发展，为生物研究和制药工业提供了大量的基础信息和资料，同时也催生了许多高通量筛选检测技术，给传统制药的“瓶颈”－药靶筛选提供了新的契机。     

胰岛素样生长因子—1的临床应用及其前景

胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）是一种既具有促细胞分化和增殖活性，又具有胰岛素样作用的多肽物质，生理作用广泛，自７０年代从人血清中分离得到以来，经二十余年的研究与开发，重组人ＩＧＦ－１已作为一种生物制剂被用于糖尿病、Ｌａｒｏｎ综合征、骨质疏松症、神经炎等的试验性临床治疗。目前，研究者们又发现ＩＧＦ－１对肾功能衰竭、危重病人、ＡＩＤＳ病及肿瘤等也有较好的治疗作用。     

疟疾流行态势及其防治

疟疾是一种重要的热带虫媒传染病，经多年的防治虽得到了一定的控制，但近几年来，在有些国家和地区又出现了回升趋势，本就疟疾的流行态势及其防治策略作一综述。     

人14-3-3β蛋白的原核表达、抗血清制备及真核表达载体的构建

目的 纯化原核表达的14-3-3β(YWHAB)重组蛋白并制备多抗血清,构建适用于哺乳动物细胞的真核表达载体.方法 将重组蛋白表达载体pET30a(+)/YWHAB转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,镍-四齿螯合剂(Ni-NTA)亲和层析柱纯化重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用ELISA和Western blot方法分别检测抗血清的效价和特异性;应用PCR扩增添加BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点把YWHAB的ORF亚克隆至真核表达载体pEGFP-N1,添加BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点把YWHAB的开放阅读框(ORF)亚克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+),对重组载体进行酶切和PCR鉴定.结果 YwHAB重组蛋白以可溶性形式表达,分子量为32 000,与预期分子量一致;纯化后的重组蛋白纯度达90%以上,ELISA结果显示其抗血清的效价为1:50 000,Western blot结果表明抗血清的特异性较好;酶切和PCR鉴定结果表明真核表达载体pEGFP-N1/YWHAB和pCDNA3.1(+)YWHAB构建成功.结论 通过亲和层析纯化获得人14-3-3β重组蛋白,进而免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,为进一步研究人14-3-3β的功能成功构建了其真核表达载体.     

一种灵敏的干血斑葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光分析法的建立

目的 建立葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶(G6PD)荧光分析方法,用于新生儿足跟干血斑中G6PD酶活性的定量测定.方法 选择于血斑配制基质,优化底物、复溶物和铜试剂组分,建立G6PD荧光分析法定量检测方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价.结果 自制试剂分析灵敏度为0.05 U/g Hb;分析内和分析间精密度分别为4.12%-8.93%、4.75%～9.86%:试剂的cutoff值为2.23 U/g Hb;1 066份样本用该试剂与PerkinElmer(PE)公司同类试剂平行榆测,两种试剂测值具有显著相关性(P=0.000),相关系数为0.960;以PE公司试剂为对照,本试剂的阳性符合率为99.4%,阴性符合率为98.93%.结论 该试剂灵敏度高、操作简便快捷,具有良好的精密度.临床检测性能良好,可以满足临床应用的需要.