GFP-HPVl8 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础.方法 用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-Cl载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定.结果 阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb、618 bp和243 bp附近的片段.DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确.结论 成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD.     

hDaXX与12型腺病毒E1B55KD癌蛋白在体内外的结合反应

目的：研究12型糖尿病(Adenovirus 12,Ad12)E1B 55KD癌蛋白（Ad12E1B 55KD）打破hDaxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白（promyelocytic leukemia protein,PML）在细胞核共定位的机制。方法：构建hDaxx原核细胞表达质粒pQE30/hDaxx，并在大肠杆菌（E.coli）BL21中诱导表达，用镍-氮基三乙酸（Ni-NTA）琼脂糖加以纯化。通过体内外共免疫沉淀反应，Western blot方法研究hDaxx与Ad12E1B55KD直接结合反应。结果：质粒qQE30/hDaxx在E.coli BL21中成功诱导表达了hDaxx,其N端有6个组氨酸分子附着（6His-hDaxx）.Wetern blot结果显示hDaxx在体内外与Ad12E1B 55KD发生直接结合反应。结论：表达并获得纯化的6His-hDaxx,hDaxx能在体内外与Ad12E1B55KD直接结合。     

心脏机械瓣膜置换术后抗凝复查依从性现状及影响因素分析

目的了解心脏机械瓣膜置换术后患者抗凝复查依从性现状及影响因素。方法对92例患者采用电话回访或邮寄方式调查心脏机械瓣膜置换术后华法林抗凝复查依从性现状,采用Logistic回归分析影响因素。结果 92例患者中,复查依从性好有54例(58.70%),复查依从性差有38例(41.30%)。Logistic回归分析显示,复查依从性差的影响因素为学历低、每次复查耗费高、非贵州省人民医院复查及非固定医生复查。结论心脏机械瓣膜置换术后患者抗凝复查依从性一般,由多种因素引起。     

护理本科生创新能力培养的实践教学改革探索

在对基础护理实践教学的各个环节进行分析的基础上，针对护理本科生创新能力培养的要求，从实践教学的各个层面，包括教学观念、培养模式、教学内容、教学方法，以及教学效果的考核评价等，提出改革思路和方法，以使高等护理教学改革广泛开展，从而促进创新型高素质护理人才培养目标的实现。     

脊髓损伤患者主要照顾者照顾负担与积极感受的相关性研究

目的了解脊髓损伤患者主要照顾者照顾负担与积极感受的现状及其相关性。方法以脊髓损伤患者的主要照顾者作为研究对象,采用"Zarit照顾负担量表"和"照顾者积极感受量表"对他们进行问卷调查,分析他们的照顾负担与积极感受及其相关性。结果 120例脊髓损伤患者主要照顾者的照顾负担总分为(38.770±13.050)分,积极感受总分为(26.031±6.447)分,责任负担与生活展望呈显著负相关(P0.01),照顾负担总分与积极感受总分呈负相关(P0.01)。结论脊髓损伤患者照顾者负担处于中度水平,积极感受处于轻偏中度水平。医护人员应全面认识照顾者的照顾感受,对其进行个体化干预,以提高他们的积极感受水平,降低照顾负担,最终提高脊髓损伤患者及其主要照顾者的生活质量。     

GFP-HPV16 E2及其删除突变体融合蛋白在真核细胞中的表达与定位

目的构建人乳头瘤病毒16型E2(HPV16 E2)及其N端(TAD)、C端(DBD)删除突变体与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,观察其在Hela细胞中的表达与定位。方法HPV16 E2基因经PCR扩增后,与pMD-T载体连接,经蓝白斑筛选、PCR、双酶切鉴定及序列分析后,将E2基因亚克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2。PCR扩增TAD、DBD基因片段,将其双酶切后插入pEGFP-C1,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD。将3种质粒转染Hela细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达与定位。结果重组载体经PCR、双酶切鉴定及测序证明插入片段序列正确,且在Hela细胞中能表达目的蛋白;GFP-E2融合蛋白在细胞核与细胞质中都有表达,但主要分布于细胞核;而GFP-DBD融合蛋白仅在细胞核内;GFP-TAD融合蛋白仅在细胞质中。结论构建的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2、pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD均在Hela细胞中表达,并确定了各自在细胞内的定位。     

GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位

目的 研究GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位.方法 PCR扩增HPV16E5基因片段,将其连接到真核表达截体pEGFP-C1,双酶切及测序鉴定,构建表达截体pEGFP-C1/HPV16 E5;将质粒pEGFP-C1/HPV16 E5和pEGFP-C1分别转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下现察GFP-HPV16 E5融合蛋白在HeLa细胞内的表达与定位.结果 GFP 荧光均匀分布在细胞浆和细胞核;GFP-HPV16 E5融合蛋白组荧光分布在细胞浆.结论 GFP-HPV16 E5融合蛋白能在HeLa细胞内表达且定位于细胞浆.     

Daxx与PML在HeLa和Caski细胞株中的定位观察

目的 分析宫颈癌细胞内早幼粒细胞白血病蛋白(PML)和死亡域相关蛋白(Daxx)的定位,为进一步研究高危型HPV16和HPV18的致癌机制奠定试验基础.方法 培养HeLa细胞和Caski细胞,利用间接免疫荧光试验,在激光共聚焦显微镜下观察并分析PML和Daxx在细胞内的定位;分析Caski细胞中Daxx与HPV16 E6蛋白定位.结果在HeLa细胞和Caski细胞,PML红色信号和Daxx绿色信号在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;Daxx绿色信号与PML红色信号重叠时,依然显示各自的绿色信号与红色信号.在Caski细胞,HPV16 E6和Daxx在细胞中分布不均匀,呈区域性聚集;表达红色信号的HPV16 E6与表达绿色信号的Daxx重叠成黄色信号.结论 在Caski细胞和HeLa细胞,PML定位于细胞核的PML-NBs;Daxx在胞核和胞浆呈弥散样均匀分布;两者未发生共定位.Daxx与HPV16 E6蛋白在Caski细胞共定位于胞浆与胞核.     

心脏机械瓣膜置换术后病人抗凝治疗满意度的影响因素研究

目的:调查心脏机械瓣膜置换术(mechanical heart valve replacement,MHVR)术后长期抗凝治疗病人的满意度,并分析其影响因素,为临床治疗提供依据。方法:采用方便抽样的方法选取贵州省某三级甲等医院MHVR术后146例病人为研究对象,采用中文版抗凝治疗满意度量表(Anti-Clot Treatment Scale,ACTS)对其抗凝治疗满意度进行调查,采用单因素、多元逐步回归分析对抗凝治疗满意度的影响因素进行分析。结果:多元逐步回归分析结果显示,影响MHVR术后病人抗凝治疗满意度的因素从大到小依次为出院后并发症发生情况、出院时长、医生能否调华法林剂量、出院后是否再次住院以及每次复查费用,可以解释满意度总变异的58.7%。标准化回归方程为满意度得分=0.262×出院时长-0.347×出院后并发症发生情况+0.239×医生能否调华法林剂量-0.219×出院后是否再次住院-0.130×每次复查费用。结论:对MHVR术后病人进行延续性护理时,应重点加强华法林用药的教育,提高用药依从性,严禁病人随意加量或减量,指导病人观察出血、血栓形成的信号,学会应对措施,同时及时告知医生,减少并发症的发生。     

胃癌患者消化道念珠菌的检出及其生物学特性初探

本文指出,胃癌患者口腔标本念珠菌检出率(52.3％)明显高于其它肿瘤患者(21.5～24.5％)及正常人(4.1％),并在42.1％的胃癌切除标本中分离到念珠菌。来自胃癌患者的念珠菌与正常人口腔菌株和保藏菌株比较,对小白鼠具有更强的毒力,并可在小白鼠体内迅速扩散和侵入各主要器官。这些菌株对二性霉素B、制霉菌素、克念菌素及克霉唑等常用抗真菌药物表现了明显的抗药性。