过表达Sirt6促进脂多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞骨生成

目的:探讨沉默信息调控因子6(silent information regulator 6,Sirt6)在炎症微环境下对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的骨生成作用.方法:利用原代细胞贴壁法培养BMSCs,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激BMSCs产生炎症反应;利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测促炎细胞因子:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6的分泌.实验分为LPS组、LPS+空载体组及LPS+过表达Sirt6组,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测炎性状态下各组中Sirt6的mRNA表达;Western印迹法(Western blot)检测炎性状态下各组中Sirt6蛋白的表达水平;茜素红染色法检测炎性状态下各组BMSCs骨向分化中生成的钙结节.结果:培养出的BMSCs在LPS炎性刺激下可以产生炎性反应;炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均明显升高(P<0.05);成功构建了过表达Sirt6质粒载体并用其转染BMSCs;RT-qPCR和Western blot检测结果显示,LPS+过表达Sirt6组的Sirt6 mRNA和蛋白水平均明显高于LPS组和LPS+空载体组,并且LPS+过表达Sirt6组中成骨相关标志物骨钙素(osteocalcin,OCN)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)呈现高表达;茜素红染色检测结果显示,LPS+过表达Sirt6组中钙结节量也呈现高表达趋势.结论:过表达Sirt6显著抑制了促炎细胞因子的分泌,促进了炎症条件下BMSCs的成骨分化.     

人牙周膜成纤维细胞的细胞培养技术

目的人牙周膜成纤维细胞的细胞培养技术两种方法的比较。方法采用组织块法和酶消化法进行人牙周膜成纤维细胞的原代培养,绘制PDLFs的生长曲线。用Envision免疫组化方法进行细胞来源的鉴定。结论组织块培养方法更适合PDLFs的原代培养。     

氯化镧对牙周炎大鼠龈沟液IL-6及IL-1β表达的影响

目的通过观察牙周炎大鼠龈沟液的IL-1β、IL-6水平的变化探讨氯化镧防治牙周炎的效果。方法将造模成功的SD大鼠64只随机分成4组,即生理盐水冲洗对照组（P组）;0.12%氯己定冲洗组（P1组）;0.1 mmol/L氯化镧溶液冲洗组（P2组）;0.1 mmol/L氯化镧喂养组（P3组）,治疗12周。用酶联免疫吸附法（enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA）检测治疗前后龈沟液中IL-1β以及IL-6的含量,治疗前后自身对照。数据采用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析。结果治疗后P2、P3组龈沟液中IL-1β以及IL-6的含量均有下降,治疗前后对照组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论氯化镧能降低牙周炎大鼠龈沟液中IL-1β以及IL-6的水平。     

神经细胞粘附分子在涎腺腺样囊性癌中的表达及其意义

目的探讨神经细胞粘附分子在腺样囊性癌中的表达及其在腺样囊性癌嗜神经性侵袭中的作用。方法采用Envision免疫细胞组织化学二步法,完成病理切片,作半定量病理分析。结果神经细胞粘附分子在腺样囊性癌不同病理类型中表达无统计学差异;在肿瘤浸润组和神经侵袭组阳性表达率明显高于无浸润组和无神经侵袭组且有统计学差异;在有淋巴结转移组阳性表达率明显高于无淋巴结转移组但无统计学差异。结论神经细胞粘附分子是腺样囊性癌的特异性分子之一,介导腺样囊性癌对周围组织的浸润和对神经的粘附。     

模拟低氧对舌鳞癌SCC-15细胞系中SOX2和OCT4表达的影响

目的：研究模拟低氧条件对舌鳞癌SCC-15细胞系增殖、周期、凋亡及SOX2和OCT4的蛋白、mRNA水平变化的影响。方法：体外培养SCC-15细胞,加入模拟低氧物去铁胺(Desferrioxamine,DFO) 模拟低氧环境,利用CCK-8技术检测SCC-15细胞的增殖效率;利用流式细胞技术检测SCC-15细胞凋亡率和细胞周期;Western blot技术检测常氧(NOX)和低氧(HOX)条件下,HIF-1α SOX2及OCT4的蛋白表达;RT-PCR技术检测常氧(NOX)和低氧(HOX)条件下,HIF-1α SOX2及OCT4mRNA表达。结果：模拟低氧物DFO可以有效模拟低氧状态,低氧条件下24h观察,SCC-15细胞增殖加快,细胞周期主要集中在细胞G1期,S G2期细胞所占比例下降;而SCC-15细胞凋亡率未见显著性变化;Western-Blot结果显示低氧下Hif-α、Sox2、Oct4蛋白的表达明显加强,而且Hif-α、Oct4蛋白的表达高于Sox2,具有显著的统计学意义(p<0.05);RT-PCR结果表达分析显示,正常氧浓度和低氧条件下,Hif-α的mRNA水平均未见显著性差异(p>0.05);Sox2、Oct4mRNA水平在常氧状态下,未见有明显表达,在低氧状态下,则具有显著性表达差异(p<0.05);结论：DFO可以有效模拟低氧环境,低氧可以促进Sox2和Oct4的蛋白和mRNA水平变化。