生存素siRNA表达质粒对MGC-803细胞增殖的影响

目的:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,观察 RNA干扰沉默生存素基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响．方法:用脂质体介导将生存素siRNA表达质粒转染 MGC-803细胞,通过倒置显微镜观察转染后细胞形态学的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期的变化,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测生存素mRNA的表达水平．结果:生存素siRNA表达质粒转染组MGC-803细胞变圆、浮起,生存素siRNA表达质粒明显下调MGC-803 细胞内生存素mRNA的表达,与空白对照组相比降低了48．2％,阻断细胞周期在G1期(77．4％),显著抑制细胞增殖,siRNA转染组细胞吸光度比空白组显著降低 (24 h:0．272±0．048 vs 0．576±0．018;48 h:0．270±0．060 vs 0．809±0．027;72 h:0．143±0．046 vs 1．015±0．075;均 P<0．01)．转染24,48和72 h后的抑制率分别为53．4％, 66．7％和86.3％．结论:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,可有效下调生存素在MGC-803细胞中的表达,并在体外抑制细胞的增殖．     

血管紧张素转换酶2基因转染对人血管内皮细胞中氧化应激水平的影响

背景血管紧张素转换酶2(ACE2)是迄今为止发现的人类ACE的第一个同源基因,是血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)的主要降解酶,但其在氧化应激中的调控作用尚不清楚.目的探讨重组ACE2基因转染对体外培养人血管内皮细胞中由Ang Ⅱ诱导的NAPDH氧化酶p22phox表达和丙二醛(MDA)水平的影响.方法 克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染人人血管内皮细胞中.分别采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的p22phox的mRNA与蛋白表达情况.采用硫代巴比妥酸比色法测定细胞中MDA含量.结果 AngⅡ(100 nmol/L)和Ang Ⅳ(100 nmol/L)刺激后均可诱导人内皮细胞中p22phox的mRNA及蛋白表达大大增加,伴有细胞中MDA水平升高(n=6,P均<0.01).pACE2基因转染可抑制细胞中由AngⅡ和Ang Ⅳ诱导的p22phox表达,同时伴MDA水平下调(n=5～6,P均<0.01).结论 ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中p22phox的表达,而且降低MDA水平,提示ACE2具有一定的抗氧化效应.通过调节ACE2基因活性和表达,很可能成为氧化应激相关疾病如高血压病防治的重要手段.     

体外诱导大肠癌细胞分化及其碱性磷酸酶活性的变化

目的观察单独和联合使用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和１，２５－二羟维生素Ｄ３对大肠癌细胞株ＬｏＶｏ碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性的变化的影响。方法用不同剂量的ＡＴＲＡ和１，２５－二羟维生素Ｄ３单独或联合在体外作用于ＬｏＶｏ细胞２、４和６天，用脱氧胆酸钠溶解细胞，动力学方法测定ＡＬＰ活性，紫外吸收法测定蛋白质含量。结果单独或联合使用ＡＴＡＲ和１，２５－二羟维生素Ｄ３均可使ＬｏＶｏ细胞的肠型ＡＬＰ活性逐渐升高，而以联合用药效果更好（Ｐ＜０．０５）。结论联合使用Ａ－ＴＲＡ和１，２５－二羟维生素Ｄ３诱导ＬｏＶｏ细胞比单独用药效果更好，对于大肠癌的诊疗具要的指导意义     

畲族人群载脂蛋白B（apoB）基因多态性遗传规律的研究

从江西、浙江、福建三省８个畲族家系３１个个体中抽血提取ＤＮＡ，用ＰＣＲ技术对其ａｐｏＢ基因多态性位点进行扩增。结果表明：所有子代的扩增片段均可从父母的扩增片段中找到来源，子代为纯合子者，其父母的扩增片段中至少有一条相同，纯合子父亲的扩增片段在几个子代中同时出现。实验证明：畲族人群ａｐｏＢ基因的多态性遵循孟德尔定律。     

非淋球菌性尿道炎患者中解脲脲原体的检测

从性病门诊收集145例非淋球菌性尿道炎患者(男性120例,女性25例)泌尿生殖道分泌物,用培养法检测其解脲脲原体(UU)。结果显示UU的阳性率男性为29.16%,女性为48.00％,提示UU是非淋球菌性尿道炎的病原体之一。另外,对于男性患者,急性期取尿道分泌物,慢性者取前列腺液或精液培养,其UU阳性率无显著性差别(P>0.05)。     

芦荟大黄素抑制人口腔癌KB细胞增殖和迁移的双重效应及其机制研究

目的 探讨芦荟大黄素抑制人口腔癌细胞生长和迁移的双重效应及其机制.方法 对人口腔上皮癌KB细胞分别用2.5、5、10、20和40 μmol/L的芦荟大黄素处理,对照组为含0.1%二甲基亚砜的培养液,分别用结晶紫实验和划痕损伤愈合迁移实验分析长效抗增殖作用和抗迁移效应,并用Western blotting方法 检测蛋白激酶Ca和c-myc蛋白水平的变化.结果 芦荟大黄素能长时间抑制KB细胞的生长;划痕损伤愈合迁移实验结果 显示,药物处理3 d后进入划痕区域的细胞数为(6.2±0.2)个/mm2,而对照组为(33.5±0.4)个/mm2,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组细胞抑制蛋白激酶Ca和c-myc的水平较高,经芦荟大黄素处理后,均以剂量依赖方式下降.结论 芦荟大黄素的抗增殖和抗迁移活性与抑制蛋白激酶C信号传导途径有关.     

替米沙坦对高血压大鼠血管前纤维蛋白1及ERK磷酸化水平的影响

目的：探讨替米沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）血管前纤维蛋白1（Profmn-1）及细胞外信号调节激酶（ERK1／2）磷酸化水平的影响。方法：选取10周龄SHR及其同源对照魏-凯氏（WKY）大鼠,给予替米沙坦（5～10mg／kg·d）或安慰剂,为期10周。尾套法测量大鼠尾血压。采用实时定量聚合酶链式反应（PCR）和Western免疫印迹检测治疗后大鼠主动脉组织中Profilin-1mRNA和蛋白及ERK1／2磷酸化水平。结果：与WKY对照组相比,SHR大鼠血压明显升高[（126±3．5）mmHg：（195±6．1）mmHg],伴血管Profilin—1mRNA[（1．0±0．11）;（7．8±0．57）]及ERK硫酸化水平[（1．0±0．11）：（2．43±0．19）]表达明显升高（P均〈0．01）,而经替米沙坦治疗后SHR大鼠血压明显降低[替米沙坦低剂量组（169±6．2）mmHg,高剂量组（161±4．9）mmHg],伴Profilin-1mRNA[替米沙坦低剂量组（4．45±0．92）,高剂量组（1．95±0．41）]表达及ERK1／2磷酸化水平[替米沙坦低剂量组（1．62±0．20）,高剂量组（1．34±0．09）]明显下调（P均〈0．05）。结论：长期替米沙坦治疗可降低高血压大鼠血压水平,降低血管Profilin-1表达及ERK1／2磷酸化水平,提示替米沙坦对高血压血管重塑具有一定的保护功效。     

联用免疫磁珠及定量RT-PCR检测胃癌外周血微转移

目的探讨联用免疫磁珠和定量RT-PCR检测胃癌患者外周血微转移的方法学及意义.方法首先将人胃癌MGC-803细胞以不同浓度加人到健康人外周血中,其次用淋巴细胞分离液收集单核细胞,然后等分成4份分别用4种方法处理--直接扩增(A方法)、阴性磁珠筛选(B方法)、阳性磁珠筛选(C方法)及联用阴性和阳性磁珠筛选(D方法),最后用定量RT-PCR检测β2 微球蛋白mRNA和癌胚抗原(CEA)mRNA并计算出相对CEA.mRNA值.同法测定41例胃癌、10例良性胃病患者和5例健康人外周血CEA mRNA.结果参照模型中D方法测出的相对CEA mRNA值均小于A、B和C方法测出的,其检测灵敏度为每ml血含有1个癌细胞.41例胃癌患者中用A、B、C和D方法测出的阳性例数分别为19例(46.34%)、23例(56.10%)、22例(53.66%)和27例(65.85%);D方法与A方法比较,P＜0.05.D方法检测10例良性胃病均为阴性,而用其它3种方法检测有1例阳性;5例健康人均未见扩增.结论联合使用免疫磁珠阴性、阳性筛选和定量RT-PCR可提高胃癌患者外周血微转移的检出率.     

维甲酸和1,25二羟维生素D3对LoVo细胞株细胞周期的影响

目的 观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）和１,２５－二羟维生素Ｄ３对大肠部细胞株ＬｏＶｏ细胞周期的影响。方法 流式细胞术测定细胞周期的分布。结果 ＡＴＡＲ和１,４５－二羟维生素Ｄ３使ＬｏＶｏ阻止在Ｇ０／Ｇ１期,未发现明显的亚Ｇ１峰。结论 单独或联合使用ＡＲＴＡ和１,２５－二羟维生素Ｄ３均具有诱导分化ＬｏＶｏ细胞的作用,这种诱导分化与细胞凋亡无关。     

AF131784在胃癌和胃癌前病变组织中的表达及临床意义

目的 研究AF131784在胃癌组织和癌前病变组织中的表达情况并探讨其对胃癌诊断的临床意义。方法 应用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测134例组织样本（包括104例胃癌组织和30例胃黏膜异型增生组织）中AF131784的表达量。结果 AF131784在胃癌组织中的表达量较成对的癌旁组织降低2.1倍（P=0.000）。AF131784在早期胃癌组织及胃黏膜异型增生组织中的表达量也显著降低。结论 AF131784在胃癌的发生中可能起重要作用,并且有可能成为胃癌早期筛查的肿瘤生物学标志物。