中药防风抑制胃癌SGC-7901细胞生长的研究

目的研究中药防风对胃癌SGC-7901细胞生长的影响。方法通过细胞培养技术、集落形成实验、MTT实验等方法,观察防风对胃癌SGC-7901细胞生长的影响。结果SGC-7901细胞在防风作用24 h后,出现体积变小、核固缩、空泡样变化等形态学改变。防风对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成有明显的抑制作用,其抑制作用与防风的浓度和时间呈正相关,其IC50值为24 mg/ml。结论防风能抑制SGC-7901细胞生长,这些结果为防风在临床上的进一步应用提供了理论依据。     

苦瓜MAP30基因的克隆表达及对BGC-823细胞形态的影响

目的:克隆苦瓜蛋白MAP30基因,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,初步研究MAP30蛋白对BGC-823细胞的影响.方法:应用PCR技术从苦瓜基因组中扩增出MAP30基因片段,将其TA克隆和双酶切鉴定,再进行测序分析,并构建重组表达载体pET-28a-MAP30,转化到表达菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,用 NTA-Ni2+ 树脂分离纯化所表达的 MAP30 融合蛋白,并经 SDS-PAGE 电泳鉴定;纯化的蛋白作用于 BGC-823 细胞后通过光镜和电镜进行形态学观察. 结果:成功扩增出MAP30基因为861 bp, 与基因库中公布的DQ643967同源性为100%,与DQ643968和S79450的同源性为99%;成功构建 pET-28a-MAP30原核表达重组质粒;通过NTA-Ni2+树脂分离纯化目的蛋白,获得原核表达的大小约为30 000的MAP30融合蛋白,与预测一致;蛋白作用细胞后,细胞形态有明显变化.结论:成功构建pET-28a-MAP30表达载体并获得原核表达的MAP30融合蛋白;重组MAP30蛋白能引起BGC-823细胞明显的形态学变化.     

幽门螺杆菌Cag致病岛hp0527基因的缺失株构建和鉴定

目的:构建幽门螺杆菌(H.pylori)Cag致病岛编码hp0527基因的突变株.为Cag致病岛致病机制及H.priori功能研究奠定基础.方法:利用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(KanR)连接到PCR扩增hp0527两端区域产生的2个目的基因片段之间,构建hp0527基因缺失的自杀质粒pBlueKM40-△hp0527;将带有卡那霉素抗性标志的缺失突变载体,通过抗生素卡那霉素筛选出缺失hp0527基因的突变株,并经PCR方法鉴定后,采用野生株和突变株的幽门螺杆菌分别与胃癌上皮细胞BGC-823共培养后,分析它们对细胞毒素相关蛋白CagA转运能力的影响.结果:成功构建出幽门螺杆菌hp0527基因突变的自杀质粒,突变载体经内切酶酶切分析显示:产生的条带与设计结果完全一致;抗生素筛选并经PCR鉴定后,获得了hp0527基因缺失株;CagA蛋白转运分析表明基因hp0527缺失前后,可以导致细菌转运CagA蛋白能力的丧失.结论:成功构建出1株缺失hp0527基因的H.pylori突变株,对于阐明该基因的功能及其在H.pylori致病中的地位及作用具有重要的研究价值.     

幽门螺杆菌virD4基因的克隆表达及其功能初探

目的研究幽门螺杆菌SBK临床分离株virD4的功能。方法通过T-A克隆获得virD4基因片段;构建pET-28a(+)-virD4原核表达载体,转化入Rosetta工程菌,IPTG诱导表达;KCl染色切胶纯化法获得重组蛋白质,SDS-PAGE法分析鉴定重组蛋白质;纯化的重组蛋白质免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA法检测效价,western blot法分析抗原反应特异性;重组蛋白质与GES-1细胞共培养,检测其对细胞炎症因子的表达及细胞增殖的影响。结果 virD4基因全长为1 728 bp,序列与Shi470菌株的virD4基因同源性较高;成功构建原核表达载体,经诱导及纯化获得相对分子质量为63 000的重组蛋白质;成功免疫小鼠制备多克隆抗体,效价为512 000,抗原抗体反应具有特异性;virD4能诱导GES-1细胞分泌炎症因子和增殖。结论成功克隆并表达virD4基因,制备多克隆抗体,其重组蛋白质能诱导细胞因子分泌及细胞增殖。     

镇江地区诺如病毒分子流行病学特点及基因型分析

目的分析2015-2016年镇江地区诺如病毒(No V)的分子流行病学特点及基因型分布。方法收集镇江地区腹泻患者粪便标本,逆转录PCR(RT-PCR)检测No V衣壳蛋白基因的表达水平,并对PCR产物行基因测序验证;Mega软件构建系统进化树,并进行序列进化和基因型分析。结果 No V总阳性率为5.30%(85/1 605),GⅠ组检出率为0.87%(14/1 605),GⅡ组检出率为4.55%(73/1 605),其中2份样本同时检出感染GⅠ/GⅡ。GⅡ组在10~20岁组中的阳性率最高(17.80%)。2015年No V的检出率以1月最高,11月、2月次之;2016年以12月最高,3月、4月次之。2015年No V的基因型以新GII.17型变异株为主(63.89%),2016年以GII.4 Sydney_2012株为主(35%)。结论镇江地区的No V以GII组为主,青少年患者阳性率高,主要流行季节为11月至次年4月,主要流行基因型为GII.17型变异株和GII.4 Sydney_2012株。     

幽门螺杆菌黏附素的研究

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori Hp）黏附素是由Hp表达并参与Hp对胃粘膜上皮黏附定植的一种外膜蛋白（outer membrane protein OMP），主要有BabA、AlpA、AlpB、HopZ、SabA等。该文结合国内外文献对Hp黏附素的黏附作用、黏附机制以及与临床疾病的关系进行综述。     

白头翁总苷平喘作用的试验研究

目的 观察白头翁总苷(PTG)的平喘、镇咳、祛痰作用.方法 将实验动物随机分成阴性对照组、阳性对照组及FIG 200mg/kg组、PTG 100 mg/kg组、PTG 50 mg/kg组,每组10只.连续灌胃7 d.结果 FIG 100mg/kg以上剂量对巴豆油致小鼠耳肿胀及对角叉菜胶引起的小鼠足肿胀有明显的抑制作用(P<0.05),可明显延长小鼠卵白蛋白诱发的哮喘潜伏期(P<0.05),抑制氨水引起的小鼠咳嗽次数并延长咳嗽的潜伏期(P<0.05).结论 FIG具有一定的平喘、镇咳作用.     

硒对幽门螺杆菌空泡毒素及其重组影响

目的 研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响.方法 采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素.通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM>蛋白纯化系统纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、及免疫印迹(Western blot)鉴定,间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测其抗原特异性.进行细胞培养、细胞爬片;采用分光光度计、倒置显微镜、透射电镜及流式细胞仪等方法检测硒对幽门螺杆菌分泌的VacA及重组毒素蛋白功能的影响.结果 12 mmol/L硒即可使幽门螺杆菌形态发生球形变.鞭毛及菌毛出现脱落,溶血作用减弱,硒对VacA空泡毒作用无直接影响(P>0.05);硒通过抑制Hp生长减少VacA产生量从而使空泡毒作用减弱;通过抑制表达VacA的大肠埃希菌生长,减少重组VacA表达量;能增强重组VacA对人胃上皮癌细胞株(SGC-7901)生长抑制作用,使细胞分裂指数、集落形成率、S期细胞数量降低,G1期细胞总数增加;使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素,并随硒浓度增加颜色加深.结论 硒能抑制Hp生长,改变Hp的形态及结构;可使重组vacA表达量减少;能增强重组VacA对SGC-7901细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用;可使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素;不能直接抑制VacA的空泡毒作用.     

亚硒酸钠溶液诱导胃上皮肿瘤SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的：探讨亚硒酸钠能否诱导胃上皮肿瘤SGC 7901细胞凋亡，以及凋亡诱导与细胞周期改变的关系。方法：亚硒酸钠溶液不同浓度、不同作用时间分别处理SGC 7901细胞，应用电子显微镜观察亚硒酸钠溶液作用后细胞形态变化，应用DNA末端原位标记染色法 (TUNEL)及流式细胞仪技术分析细胞凋亡及细胞周期的改变。结果：亚硒酸钠作用于SGC 7901细胞后，可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化：细胞核固缩、染色质凝集、呈新月型紧贴于核膜周边，核碎裂，染色质片段化，凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”。TUNEL染色法细胞凋亡指数在8.4％～33.4％。结论：亚硒酸钠能够诱导SGC 7901细胞凋亡，亚硒酸钠诱导SGC 7901细胞凋亡与细胞周期阻滞密切相关。     

正常兔血清杀伤shope肿瘤细胞的研究

为了研究shope肿瘤细胞,在实验过程中我们在选用正常人、牛、马、豚鼠及兔清做对照培养时,结果发现用兔血清培养的shope肿瘤细胞大部分死亡,而人、牛、马、豚鼠血清培养的shope肿瘤细胞却生长良好。由此我们建立了本试验,通过实验证明兔血清具有杀伤shope肿瘤细胞的活性,而正常人、牛、马及豚鼠血清均无此活性。该实验结果提示在正常兔血清中存在着一种具有杀伤shope肿瘤细胞活性的物质。