原发性浆细胞白血病肿瘤新生抗原的筛查和预测

[摘要] 目的：采用基因测序技术结合生物信息分析手段探索原发性浆细胞白血病（PCL）的肿瘤新生抗原。方法：采集1 例原发性PCL患者复发期和缓解期的外周血样本，利用基于序列分型的聚合酶链式反应进行HLA分型，利用二代测序技术对全外显子组和转录组进行测序，利用生物信息学软件NetMHCpan预测新生抗原。结果：该患者复发期外周血中发现6 个肿瘤特异的错义突变基因，分别为FRG1、MLL3、SVIL、MYOM1、ZDHHC11、RFPL4A基因；结合患者的HLA亚型，通过生物信息预测出43条新生抗原。优先选取表达水平较高的FRG1 和MLL3 基因突变所产生的20 条新生抗原，其中4 条新生抗原高度亲合患者的HLA分子，具有潜在的临床应用价值。结论：完成了1 例原发性PCL肿瘤新生抗原的筛查和预测，实践说明基于肿瘤特异的体细胞突变预测新生抗原的方法对于原发性PCL同样可行。     

自体不成熟树突状细胞胸腔内注射治疗化疗耐药的肿瘤患者恶性胸腔积液

目的:观察体外扩增的不成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)胸腔内注射对恶性胸腔积液的疗效和安全性。方法:从6例对化疗耐药的恶性胸腔积液患者采集外周血单个核细胞,体外细胞因子诱导培养获得不成熟DC,每4周患者胸腔内注射DC(5~10)×107个,连续3次为一疗程,观察治疗后患者胸腔积液的变化及治疗的不良反应,流式细胞仪检测胸水中T细胞、NK细胞亚群。结果:总体疗效为:CR 2例,PR 1例,SD 1例,PD 2例,有效率为50%(3/6),获益率(CR+PR+SD)为66.7%。2例CR均为肾癌患者,缓解时间达26周和147周;3例肺癌患者中1例PR、1例SD及1例PD;1例恶性胸膜间皮瘤PD;治疗中无严重不良反应发生。DC治疗后6例患者胸水中的T细胞百分率均较治疗前上升,但差异无统计学意义;NK细胞百分率较治疗前明显上升(P<0.05)。结论:采用无抗原加载的自体不成熟DC胸腔内注射治疗恶性胸腔积液的疗效肯定,可能主要是通过NK细胞介导,是一种安全、有效的治疗方法。     

黄芪、莪术配伍对胃癌细胞COX-2表达的调节作用

目的:观察黄芪、莪术配伍对MKN-45细胞COX-2、PPlAR-Y、NF-KB的影响.方法:以黄芪、莪术配伍作用于MKN-45细胞,并设塞莱希布组、罗格列酮组、黄芪组、莪术组和空白组相对照.用MTT法观察各组药物对胃癌细胞的抑制率,用RT-PCR以及Western blot方法检测给药后人胃癌细胞COX-2、PPARy、NF-KB基因及COX-2蛋白表达的变化.结果:各组对COX-2和NF-KB的mRNA表达均有抑制作用,除莪术外对PPARy mRNA均有促表达作用,其中以塞莱希布组和配伍组对COX-2 mRNA表达的抑制作用最为明显,且配伍组作用明显强于黄芪组和莪术组,以罗格列酮组和配伍组对NF-KB mRNA的表达抑制作用和对PPARy表达的促表达作用都是最明显.结论:黄芪、莪术配伍能起到增效作用,对细胞的抑制效应明显,对COX-2的抑制作用大于黄芪、莪术的单独效应,与塞莱希布相近,其对COX-2的抑制作用可能是通过PPARy/NFKB信号途径发挥作用的.     

青黛提取物对HEL细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的研究青黛有效成分在体外对HEL细胞的增殖、凋亡和分化作用。方法应用MTT法检测青黛有效成分对HEL细胞的增殖抑制效应;流式细胞术检测CD14和CD11B,观察HEL细胞单核系分化趋势;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双标记法检测青黛有效成分对HEL细胞的早期凋亡诱导作用。结果与阴性对照组相比25,50,75和100μg/mL青黛有效成分作用下HEL细胞均出现单核系分化趋势,其中100μg/mL的分化趋势最明显;MTT结果显示25,50,75及100μg/mL药物对HEL细胞的生长抑制率分别为16.01%,39.12%,50.06%和59.28%;青黛有效成分可诱导HEL细胞凋亡:25,50,75及100μg/mL药物对HEL的早期凋亡率分别是5.60%,13.7%,17.8%和18.4%,明显高于对照细胞的自发凋亡率(2.70%)(P<0.05)。结论青黛有效成分对体外培养的HEL细胞具有显著抑制增殖作用,且可诱导细胞早期凋亡和单核系分化。     

兔棘阿米巴角膜炎IL-1β和MIP-1的表达

目的建立一种模拟临床人角膜棘阿米巴感染的动物模型,探讨角膜棘阿米巴原虫感染后角膜炎症细胞因子巨噬细胞炎性蛋白-1(macrophage inflammatory protein-1,MIP-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。方法 20只新西兰白兔应用角膜表层镜片法,即刮除角膜上皮,覆盖角膜植片,右眼在层间注入棘阿米巴滋养体混悬液,左眼注入生理盐水,缝合眼睑24h,建立棘阿米巴角膜炎模型,观察角膜溃疡形态,并行角膜HE染色或PAS染色组织病理切片检查,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测不同病程角膜组织中的IL-1β、MIP-1的表达。结果 20只兔右眼均感染棘阿米巴性角膜炎,病变角膜组织中IL-1β含量与MIP-1含量于术后第1天、3天、5天、7天、9天均明显升高(均为P<0.01),分别于术后第5天(53.360±1.083)与术后第3天(34.445±1.072)达最高值,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),以后逐渐下降。结论 IL-1β是反映兔棘阿米巴感染角膜局部炎症反应程度的敏感指标;而MIP-1的表达则是兔棘阿米巴角膜炎中机体重要的防御和保护性因素。     

他克莫司在移植肾功能延迟恢复患者中的临床应用

目的:探讨他克莫司(FK506)在移植肾功能延迟恢复(DGF)患者中的临床应用价值与合理用药方案.方法:17例DGF患者临床结合移植肾病理确立诊断.肾移植术后早期均接受三联(FK506 MMF Pred)免疫抑制药物治疗至少3个月.不用任何生物制剂诱导治疗,观察临床疗效及副作用.结果:17例患者无一例死亡或摘除移植肾.15例在术后第2～3天开始血液透析(HD)/连续性血液净化(CBP)治疗,2例在术后第5天开始HD/CBP.HD/CBP治疗2～15次后,10例在术后7天内停止,7例在术后7天后仍需CBP治疗,最长1例在术后第18天停止透析.FK506治疗后8～17天患者尿量开始明显增多,SCr开始明显下降.17例患者诊断DGF时SCr水平在489～1028μmol/L,14例在治疗后8～17天降至＜200μmol/L,另3例中2例SCr分别在术后第24天,28天降至＜200μmol/L.副作用主要是腹泻(3例),血糖升高(1例)及手颤,肢体麻木(4例),但未出现CMV等严重感染病例.结论:FK506 MMF Pred三联免疫抑制治疗方案治疗肾移植DGF安全有效,可作为肾移植术后DGF患者的过渡治疗方法之一.     

树突状细胞疫苗治疗多发性骨髓瘤的研究进展

近年来多发性骨髓瘤的发病率不断上升，但目前对于多发性骨髓瘤仍然没有很好的治疗方法。树突状细胞是一类抗原呈递细胞，具有启动和调控免疫反应的能力。利用肿瘤抗原冲击树突状细胞的免疫治疗策略已被证明是安全的并且对许多肿瘤具有一定的治疗效果。本文综述了多发性骨髓瘤相关的各种肿瘤抗原类型及树突状细胞免疫治疗多发性骨髓瘤的临床实验，并且分析了树突状细胞免疫治疗在未来实验研究方面的前景。     

流式细胞术检测100例健康人外周血来源树突状细胞亚群

目的初步了解健康人外周血来源的树突状细胞亚群占白细胞总数的比例。方法采用免疫荧光三色标记流式细胞术检测100例健康人外周血树突状细胞亚群(DC1/D11C+和DC2/CD123+)。结果 DC1/CD11C+[男:(0.303±0.070)%,女:(0.255±0.079)%]和DC2/CD123+[男:(0.138±0.056)%,女:(0.109±0.039)%]亚群及DC1/DC2[男:(2.701±0.861)%,女:(2.508±0.989)%]在男与女之间差异均无统计学意义(P0.05)。结论流式细胞术检测外周血树突状细胞亚群快速准确,可能为健康人外周血树突状细胞占白细胞总数的比例提供大致参考。     

肿瘤抗原冲击致敏的IL-2基因修饰的巨噬细胞治疗肾癌的实验研究

目的 :观察体外肿瘤抗原冲击致敏的白细胞介素 2 (IL 2 )基因修饰的巨噬细胞对肾癌小鼠的治疗效果并探讨其相关的免疫机理。方法 :通过重组腺病毒的介导 ,将IL 2基因转入新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞 ,经肿瘤抗原冲击致敏后回输治疗原位肾癌小鼠 ,采用 4h5 1 Cr释放法检测脾脏NK和CTL活性。结果 :IL 2基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后体内回输可使肾癌小鼠肺转移结节明显减少 ,存活期明显延长 ,40 %肾癌小鼠达到长期存活。治疗后荷瘤小鼠脾脏NK和CTL活性显著提高。结论 :IL 2基因修饰的巨噬细胞经肿瘤抗原冲击后自体回输是治疗肾癌的有效方法。     

树突状细胞与肿瘤免疫治疗研究进展

ＤＣ是目前发现的功能最强的ＡＰＣ，近年来对ＤＣ的研究为热点，本文对ＤＣ应用于肿瘤免疫治疗方面的研究进展进行了综述，包括ＤＣ与肿瘤发生发展的关系，各种形式瘤苗体外冲击致敏的ＤＣ诱导产生抗肿瘤免疫功能及机制，ＤＣ与肿瘤耐受等，并提出将ＤＣ应用于临床治疗肿瘤的一些注意事项。