熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用机制研究

目的研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化的作用机制,为麝香通心滴丸"凉开"法治疗动脉粥样硬化性疾病提供科学依据。方法采用ApoE~(-/-)基因敲除小鼠结合高脂饮食复制动脉粥样硬化动物模型,30只小鼠按体重用随机数字表法分为模型组(9只),麝香通心滴丸组(复方组,7只),麝香通心滴丸去熊胆粉组(拆方组,7只),熊胆粉组(7只);另取9只雄性同龄C57BL/6J小鼠设为正常对照组。复方组、拆方组和熊胆粉组分别给予对应药物(30、30、0.33 mg/kg)灌胃,模型和正常对照组予生理盐水灌胃,连续8周。E LISA法检测血清IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)及氧化性低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)含量;采用生化法测定血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。二氢乙啶(dihydroethidum,DHE)荧光探针探测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;Real-time PCR检测主动脉miR-20、miR-21、miR-126及miR-155表达。结果模型组小鼠主动脉荧光强度明显增强,复方组、拆方组和熊胆粉组荧光强度明显减弱,以复方组减弱的最为明显。与正常组比较,模型组小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、oxLDL和MDA均升高(P0.01),GSH和SOD下降(P0.01),主动脉miR-126、miR-21及miR-1 55表达上升(P0.01),miR-20表达下降(P0.01)。与模型组比较,复方组、拆方组和熊胆粉组血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、oxLDL及MDA下降(P0.01),GSH和SOD上升(P0.01),主动脉miR-126、miR-21、miR-155表达下调(P0.01),复方组和熊胆粉组miR-20表达上调(PO.01)。与复方组比较,拆方组和熊胆粉组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ水平升高(P0.01);拆方组和熊胆粉组GSH和SOD下降(P0.01),MDA和oxLDL上升(P0.01);拆方组与熊胆粉组miR-20和miR-155表达下调(P0.01)。结论麝香通心滴丸具有显著调节血清炎症因子、氧化应激因子的作用,其作用机制可能与其调控主动脉miR-126、miR-21、miR-1 55及miR-20的表达相关,熊胆粉在全方的调节作用中发挥了重要作用。     

人参皂苷Rg1与Rb1在心肌缺血复合肿瘤病理环境下的作用研究

目的:观察三七总皂苷主要成分人参皂苷Rg1和Rb1在心肌缺血复合肿瘤病理环境下的作用,并通过研究血管新生探索其可能的作用机制。方法:采用小鼠经皮下移植LLCs肿瘤细胞及腹腔注射异丙肾上腺素的方法制备肿瘤复合心肌缺血动物模型,再随机分为模型组、人参皂苷Rg1组、人参皂苷Rb1组;另设正常对照组。Rg1组和Rb1组分别予腹腔注射Rg1、Rb1(50 mg/kg);正常组与模型组给予等体积生理盐水。连续干预15 d后,比较各组小鼠的肿瘤生长情况、心肌组织病理形态学变化及通过免疫组织化学的方法检测心肌和肿瘤组织中CD34、vWF的蛋白表达。结果:人参皂苷Rg1及Rb1治疗组小鼠移植肿瘤生长显著受到抑制,其平均瘤重显著低于模型组(P0.05);两组心肌组织缺血损伤显著改善,胶原含量明显减少(P0.05,P0.01);同时心肌组织中CD34和vWF蛋白表达量显著升高,而肿瘤组织中CD34和vWF蛋白表达量显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:三七总皂苷主要活性成分人参皂苷Rg1和Rb1在心肌缺血复合肿瘤病理环境下显著抑制LLCs肿瘤生长,并显著改善心肌缺血损伤,其双向作用的机制可能与对血管生成双向调节作用有关。     

Apocynin预防异丙肾上腺素诱导小鼠阵发性房颤的研究

目的探讨Apocynin(APO)预防大剂量异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导小鼠阵发性房颤发生的作用及其可能的作用机制,为临床预防阵发性房颤提供新的治疗思路。方法将18只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,各6只。以100 mg/kg ISO腹腔注射诱导小鼠发生阵发性房颤,治疗组于造模前0.5 h腹腔注射APO(50 mg/kg)100μL,正常组则给予等体积的溶剂。监测小鼠2 h内动态心电图变化情况,统计分析心房颤动的发生频率、持续时间及期前收缩发生率;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价心肌缺血梗死情况;检测心房组织中miR-208b、miR-30b以及靶基因KCNN3的表达。结果与模型组比较,治疗组期前收缩及阵发性房颤的发生率、心肌组织缺血梗死面积显著降低(P<0.05);与正常组比较,模型组心房组织中miR-208b、miR-30b显著上调(P<0.05),基因KCNN3的表达显著下调(P<0.05);与模型组比较,治疗组心房组织中miR-208b、miR-30b的表达显著下调,基因KCNN3的表达显著上调(P<0.05)。结论 APO可显著预防ISO诱导小鼠阵发性房颤的发生,其作用机制可能与APO显著调节心房组织中miR-208b、miR-30b的表达,进而调节其靶基因KCNN3的表达有关。     

清肝益肾祛风方防治高血压心肌损伤的效应机制研究

目的探讨清肝益肾祛风方(QingganYishen Qufeng formula,QYQ)在高血压及高血压致心肌损伤双重病理条件下的干预效应及可能的作用机制。方法将自发性高血压大鼠随机分为模型组(SHR)、清肝益肾祛风方组(QYQ)、坎地沙坦组(Can),以8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常对照组(WKY)。所有实验动物于6周龄起进行药物干预,共干预14周。各组大鼠均每隔2周通过尾压法测量收缩压及舒张压水平,以评价QYQ降压作用;20周龄时取心脏组织,石蜡包埋切片,HE染色计算心肌细胞横截面面积以评价QYQ对高血压心肌损伤的预防作用;同时进一步检测心脏组织中miR-125a-5p及其靶基因IL-6R、STAT3以及IL-6 mRNA的差异性表达。结果与模型组(SHR)比较,QYQ可显著降低SHR大鼠收缩压及舒张压水平(P0.05),减少心肌细胞横截面面积(P0.05),显著上调心脏组织中miR-125a-5p的表达,显著下调其直接靶基因IL-6R mRNA、STAT3 mRNA的表达,显著下调心脏组织中IL-6 mRNA的表达(P0.05)。结论 QYQ不仅具有显著的降压作用,且对高血压心肌损伤具有显著的预防作用;QYQ对miR-125a-5p/IL-6R/STAT3介导作用通路的调节作用可能是其防治高血压心肌损伤潜在的分子机制之一。     

清肝益肾祛风方防治高血压及心肌损伤的作用研究

目的:探讨清肝益肾祛风方(QYQ)早期防治高血压及其心肌损伤的作用,为高血压的早期防治提供新思路。方法:将60只自发性高血压大鼠(SHR)随机分为模型组、清肝益肾祛风方低、中、高剂量组(QYQL, QYQM, QYQH),且以1 mg/Kg的氨氯地平(Am)、坎地沙坦(Can)分别作为阳性对照组,以同周龄WKY雄性大鼠作为正常对照组,6周龄时给予相应药物干预,共干预14周。每两周通过尾压法测量各组实验大鼠收缩压及舒张压水平,以评价QYQ的降压作用;20周龄时,取其心脏组织分别进行HE染色及Masson's染色,以评价QYQ的心肌保护作用。结果:与正常对照组(WKY)相比,随着周龄增加,模型组(SHR)大鼠收缩压及舒张压水平均显著升高(P0.05);与模型组相比,QYQL, QYQM, QYQH均显著降低SHR大鼠收缩压及舒张压水平(P0.05)。与正常对照组(WKY)相比,模型组(SHR)大鼠心肌组织可见多发性灶性坏死,且具有统计学差异(P0.05);QYQL, QYQM, QYQH均显著改善SHR大鼠心肌损伤程度,且优于Am及Can(P0.05)。Masson's染色结果提示,与正常对照组(WKY)相比,模型组(SHR)大鼠心肌血管周围纤维化程度显著增加(P0.05),QYQL, QYQM, QYQH均显著改善SHR大鼠心肌血管周围纤维化程度(P0.05),各组间未见明显差异。结论:清肝益肾祛风方具有显著的降压作用,且对高血压所致心肌损伤具有显著的防治作用。     

不同周龄ApoE-/-雄性小鼠离体胸主动脉内皮依赖性舒张作用研究

目的:研究不同周龄ApoE~(-/-)雄性小鼠离体胸主动脉内皮依赖性舒张功能的变化。方法:采用不同周龄(18~44周)ApoE~(-/-)雄性小鼠,分离其胸主动脉,以不同浓度的乙酰胆碱(Ach)分别评价其内皮的完整性,并绘制浓度-舒张曲线,观察不同周龄ApoE~(-/-)小鼠胸主动脉内皮的依赖性舒张作用;胸主动脉行油红O染色,以评价不同周龄ApoE~(-/-)小鼠胸主动脉脂质沉积、斑块面积大小。结果:不同周龄ApoE~(-/-)小鼠离体胸主动脉在浓度为10-5mol/L的Ach作用下,其舒张率均80%,且随着周龄的增加,舒张率呈逐渐降低趋势;与24周相比,48周ApoE~(-/-)雄性小鼠离体胸主动脉在不同浓度Ach下,其舒张率均显著降低;与24周和36周ApoE~(-/-)小鼠相比,48周ApoE~(-/-)小鼠其斑块面积/血管剖面面积显著增加。不同周龄ApoE~(-/-)小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)差异均无统计学意义(P0.05)。ApoE~(-/-)雄性小鼠胸主动脉内皮完整性、血管舒张功能与周龄呈负相关关系(P0.05),同时与脂质沉积、斑块面积也呈负相关关系(P0.05)。结论:ApoE~(-/-)雄性小鼠血管内皮依赖性舒张率随着周龄及斑块面积/血管剖面面积的增加而降低,其胸主动脉血管内皮依赖性舒张功能与周龄、斑块面积/血管剖面面积呈负相关关系。     

三七总皂苷抗动脉粥样硬化作用的实验研究

目的:探讨三七总皂苷抗动脉粥样硬化的效应。方法:在体动物实验:以Apo E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠为研究对象,喂饲高脂饲料模拟动脉粥样硬化发病过程,将9周龄ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、PNS低剂量组(50 mg/kg)、PNS中剂量组(100 mg/kg)、PNS高剂量组(200 mg/kg)。接受溶剂治疗的C57BL/6J小鼠及ApoE~(-/-)小鼠分别作为正常对照及模型对照组,腹腔注射进行干预8周。通过HE染色、Masson’s trichrome染色和油红O染色分别观察主动脉病理形态学改变、血管纤维化及脂质沉积。体外细胞学实验:用LPS诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞产生炎症反应和氧化应激,用不同浓度的PNS进行干预(50、100、200、400 mg/L),采用Real Time-PCR测定RAW264.7细胞炎症相关因子(IL1-β、IL-6、TNF-α和ICAM1)和氧化应激相关基因(Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2)的表达水平。结果:主动脉HE染色、油红O染色和Masson’s trichrome染色结果显示,与模型组比较,PNS低、中、高剂量均能不同程度减小斑块面积、减少斑块上的脂质沉积和减小斑块纤维化面积(P0.05)。Real timePCR结果显示:与空白组对比,模型组的炎症相关基因IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM1的表达显著上调(P0.01),氧化应激相关基因Nrf2、HO-1和SOD1的表达无差异,仅SOD2的表达有反应性上调(P0.01);与模型组对比,PNS各浓度均能显著下调IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM1的表达(P0.01),不同程度上调Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2的表达(P0.05或P0.01)。结论:三七总皂苷具有体内抗动脉粥样硬化斑块形成作用和显著的体外抗炎、抗氧化作用。     

三七皂苷R1抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的作用及其机制研究

目的探索三七皂苷R1抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的作用及其相关机制。方法将C57BL/6J小鼠作为正常组,将ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组和三七皂苷R1组(25μg/g)。正常组及模型组接受溶剂治疗。腹腔注射8周进行干预。通过HE染色和油红O染色观察肝脏病理形态学及脂质沉积相关改变。提取肝脏组织总RNA,采用Real-time PCR分析肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和SRBI基因的表达以及miR-26a、miR-33和miR-122表达。结果肝脏HE染色和油红O染色结果显示:与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织出现大量空泡样变,变性的肝细胞肿胀,肝细胞内见大量脂肪空泡和脂质沉积。与模型组比较,三七皂苷R1能显著减轻肝细胞肿胀,减少脂肪空泡和脂质沉积。肝脏脂质代谢相关基因和miRNA表达分析结果提示:与模型组比较,三七皂苷R1可显著上调肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1以及SRBI的表达水平(P0.05,P0.01),显著下调肝脏miR-26a的表达水平(P0.05)。结论三七皂苷R1可显著抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积,其机制可能与调节胆固醇代谢作用相关。