GIRK1在颞叶癫痫大鼠海马齿状回中的表达及其意义

目的探讨GIRK1在颞叶癫癎大鼠海马齿状回的表达及其意义.方法112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42),同时建立海人藻酸(KA)颞叶癫模型.选取KA腹腔注射后3、6、12、24、48 h,7、30 d为研究的时间点.用原位杂交法及免疫组织化学法检测海马齿状回GIRK1 mRNA及蛋白的表达.结果实验组大鼠海马齿状回GIRK1 mRNA表达在致癎后6 h较对照组减少,而在致癎后至7～30 d较对照组增高.结论在颞叶癫癎的不同时期海马齿状回GIRK1表达的变化反映出颞叶癫癎的复杂性.     

成年大鼠纹状体海人藻酸损伤后nestin的表达

目的　 研究成年大鼠纹状体海人藻酸 (kainicacid,KA)损伤后不同时间点nestin的表达并探讨其机制。方法　向成年SD大鼠纹状体内立体定位注射 0 .5 μlKA(1mg/ml) ,分别于手术后第 1、3、7、14天用免疫组织化学法检测纹状体内nestin表达的变化。结果　 正常纹状体内可观察到微弱的淡染nestin样免疫活性阳性细胞 ;大鼠纹状体KA损伤后 1d ,nestin样免疫活性增强 ;第 3天nestin样免疫活性达峰值 ,nestin样免疫活性阳性细胞的胞体肥大 ,突起粗大 ,分支增加 ;此后nestin样免疫活性阳性细胞染色强度减弱 ,其胞体和突起逐渐变小变细。 结论　 成年大鼠纹状体内注射海人藻酸可诱导nestin的大量表达 ,该表达可能与脑损伤后的自身修复相关。     

克罗米酚的抗癫癎作用

目的:了解雌激素受体调节剂克罗米酚(clomiphene citrate,CC)对海人藻酸(kainic acid, KA)致癎大鼠癫癎发作行为的影响。方法:健康雌性SD大鼠40只,均行双侧卵巢切除术,术后第八天将动物随机分4组:茶油对照组(OIL组)、KA组、雌二醇(E2) KA组、E2 CC KA组,每组10只。 OIL组、KA组连续5天腹腔注射茶油;E2 KA组连续5天腹腔注射E2(20mg／kg,10mg／ml);E2 CC KA组连续5天腹腔注射E2和CC(2mg／kg,2mg／ml),最后一次打药结束1 h后,致癎各组大鼠(KA 组、E2 KA组、E2 CC KA组)经腹腔注射KA(10mg／kg,2mg／ml),OIL组腹腔注射生理盐水后,连续观察大鼠2 h的行为改变。记录癎样发作的潜伏期、出现重型发作的时间以及发作程度。结果:E2 CC KA组的癫癎发作潜伏期为61．75±19．04 min,较E2 KA组的潜伏期23．8±6．03 min延长,且出现重型癫癎发作的时间晚,为50．20±20．37 min,而E2 KA组出现重型癫癎发作时间平均为30．70 ±13．58 min,两组比较差异有显著意义(P<0．05)。致癎2 h后,致癎各组大鼠的癫癎发作Racine分级比较差异显著意义(P>0．05)。结论:CC有拮抗雌激素的致癎作用,延缓癫癎的发作。     

EGb761对抗海人藻酸神经毒性的作用

目的：探讨银杏叶提取物（ＥＧｂ７６１）对海人藻酸（ＫＡ）引起皮层神经元毒性作用的影响及可能的作用机制。方法：在小鼠原代培养的皮层神经元ＫＡ毒性模型上,采用形态学观察,ＭＴＴ比色分析,ＥＬＩＳＡ及单细胞内游离钙离子浓度测定等方法。结果：ＥＧｂ７６１（６２．５μｇ／ｍｌ）及内酯Ｂ（３７．５μｇ／ｍｌ）预处理２４ｈ可不同程度地对抗ＫＡ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）短时间作用引起神经元损伤。结论：ＥＧb761可部分对     

新型的治疗阿尔茨海默氏症药物(1-二甲基磷酰基-2,2,2-三氯)-乙基-1-醇烟酸酯对体外神经细胞的作用

目的：观察本实验室合成的一种治疗阿尔茨海默氏症(AD)的药物(1-二甲基磷酰基-2，2，2-三氯)-乙基-1-醇烟酸酯(NMF)，对体外培养的皮层神经细胞活性的影响以及对海人藻酸(KA)所致的神经损伤的保护作用。方法：采用体外培养皮层神经元的方法，解剖分离15d胚胎小鼠皮层神经细胞，接种于96孔板，48h后加药并培养72h，以MTT法观察NMF对小鼠皮层神经细胞活性的影响；同时将接种于24孔板的细胞预先给予NMF，d3时加或不加KA处理后，以台盼蓝染色鉴别并计数死、活细胞，可得出细胞的存活率。结果：NMF明显促进胎鼠皮层神经元活性，其中NMF 1、0．1、10 nmol·L~(-1)促进神经元活性增殖率分别高达34．7％、37．4％、36．7％。NMF明显促进正常胎鼠皮层神经元存活率，与对照组比较，10、1nmol·L~(-1)NMF对皮层神经元的存活率分别提高39．3％、73．5％。NMF能显著对抗KA所致的神经元损伤，与KA损伤组相比，NMF0．1、10、1nmol·L~(-1)对损伤皮层神经元的保护率分别为77．30％、80．10％、84．15％。结论：NMF明显促进胎鼠皮层神经元的活性、提高正常皮层神经元的存活率，并能有效地保护KA所致的神经元损伤，提示NMF是一种很有潜力的治疗AD的药物。     

海人藻酸致急慢性癫痫模型中Nrf2的变化及其对神经元的影响

目的探讨海人藻酸致急慢性癫痫模型中Nrf2的变化及其对神经元的影响。方法大鼠海马内注射浓度为(1μg/μl)海人藻酸(KA)1.0μl后,随机分为模型24 h组(急性模型组)及模型28 d组(慢性模型组),假手术组注射等体积的生理盐水,每组10只。尼氏染色法观察神经元的变化;免疫组化及免疫印迹法测定Nrf2的表达。结果尼氏染色结果显示,与假手术组相比,模型24 h组与模型28 d组尼氏小体均减少,但以模型28 d组减少显著;免疫组化及免疫印迹结果表明,模型24 h组的表达增加,模型28 d组表达则减少。结论 Nrf2在急性模型表达上调,具有抗氧化作用,进而保护神经元;慢性模型中则不具有抗氧化作用,神经元受损。     

NMDA受体NR2B亚基在药物依赖过程中的作用

谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中重要的兴奋性神经递质，在突触传递和神经元可塑性方面具有非常重要的作用。其受体可分为代谢型和离子型两大类，离子型受体主要有：仅一氨基羟甲基异嗯唑丙酸（AMPA）、海人藻酸（kainic acid，KA）及N-甲基-D-天冬氨酸（N—methyl—D—aspartate，NMDA）。NMDA受体是一种配体门控型阳离子通道，由基本亚基NR1和至少一个NR2调节亚基组成异聚体。编码NR1的基因只有一种：但可通过mRNA剪接产生多种变异体；编码NR2的基因有4种，即NR2A、NR2B、NR2C和NR2D。NMDA受体的功能特性主要由组成异聚体的NR2亚基的特异性决定。     

海人藻酸受体亚基GluR6真核表达载体的构建及其表达

目的构建海人藻酸受体亚基GluR6的真核细胞表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法根据GenBank数据库中GluR6的cDNA序列（Z11548）,分3段分别设计并合成3对引物。从大鼠海马组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,分别克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后,将该3段cDNA片段依次与pcDNA3.1（＋）载体定向连接。将鉴定正确的重组体以脂质体法转染至COS-7细胞中,免疫印迹法检测GluR6蛋白质表达水平。结果克隆了GluR6的cDNA,并构建了其真核表达载体GluR6-pcDNA3.1,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;免疫印迹分析显示,GluR6在COS-7细胞中表达水平较高。结论成功构建GluR6-pcDNA3.1真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。     

大鼠海人藻酸诱发癫痫及针刺抗痫时海马内氨基酸释放的变化

海人藻酸诱发的实验性癫痫模型上，应用推挽灌流技术及高效液相色谱荧光检测分析法，测定癫痫及电针抗痫时海马内或基酸释放的变化，发现：癫痫时海马内门冬氨酸（Aspartate）、谷氨酸（Glutamate）、甘氨酸（Glvcine）和γ－氨基丁酸（GABA）的释放均显著增加，而电针后兴奋性氨基酸有降低趋势，抑制性氨基酸则有增加趋势，其中牛磺酸（Taurine）增加显著（P＜0．01），结果提示电针的抗痫作用可能部分与调节海马内氨基酸类递质的释放有关。     

经鼻滴入海人藻酸引起C57BL/6小鼠嗅球和海马区神经元的退行性病变

目的 应用海人藻酸(KA)在C57BL／6小鼠建立神经退行性病变动物模型并观察其对嗅球神经元的影响。方法 经鼻滴人KA应用尼氏和嗜银染色观察海马及嗅球的病理变化，免疫组化检测Cyclooxygenase2(COX-2)的表达。结果 经鼻滴入KA成功地在C57BL／6小鼠建立了神经退行性病变动物模型，KA通过嗅神经引起双侧嗅球和海马损伤，其病变程度与小鼠体重和滴入KA剂量有关，同时KA引起了脑内明显的胶质细胞增生和炎症因子COX-2在嗅球部的表达。结论 经鼻滴入KA能够引起嗅球和海马的损伤。