c-ski 对大鼠皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

目的研究原癌基因c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞活力、肌成纤维细胞分化、型胶原分泌等生物学行为的影响。方法免疫组化检测皮肤成纤维细胞内c-Ski蛋白的表达,并在转染c-ski基因后,利用MTT法检测皮肤成纤维细胞增殖活力、免疫组化和RT-PCR检测型胶原分泌、α-SMA细胞免疫组化检测肌成纤维细胞分化的改变。结果大鼠皮肤成纤维细胞内有c-Ski蛋白的表达,且主要表达在细胞核内,c-ski可以以剂量依赖的方式增加皮肤成纤维细胞的增殖活力,并可降低型胶原蛋白和mRNA的水平,但不改变皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程。结论c-ski促进细胞增殖但降低胶原分泌的作用可能对促进创伤愈合、降低瘢痕形成有着重要的意义。     

Protective effects of fungal (1-->3)-beta-D-glucan derivatives against oxidative DNA lesions in V79 hamster lung cells

We have investigated the protein turnover modulations involved in the hypertrophic muscle phenotype of c-ski overexpressing transgenic mice. In these animals, the body weight is increased and all the muscles examined show a definite hypertrophy. The protein degradation rate is significantly reduced in the fast twitch muscles of c-ski transgenic animals with respect to controls; in contrast, there are no detectable differences in the synthesis rates. The down-regulation of protein breakdown is paralleled by decreased expression of genes belonging to the lysosomal as well as to the ATP-ubiquitin-dependent proteolytic pathways.     

Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立

目的 测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立.方法 提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序.根据获得的c-ski基因部分序列设计实时荧光定量PCR引物,建立SYBR green定量PCR检测方法,并检测培养的大鼠皮肤成纤维细胞c-ski mRNA表达水平.结果 获得的Wistar大鼠c-ski基因cDNA序列长561bp,为未曾报道的新序列,其与人、小鼠具有较高的同源性,Gen-Bank收录(收入号DQ409171).建立的SYBR green定量PCR检测标准品在103～109拷贝范围内的相关系数为0.991 49.体外培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞样晶中c-ski mRNA水平为(1.024±0.18)×106拷贝/μl.结论 新获得了Wistar大鼠c-ski基因部分序列,该序列可用于实时荧光定量PCR的建立.     

兔眼小梁切除术后c-ski质粒抑制瘢痕形成的作用

目的:观察在滤过术后兔眼模型上应用c-ski质粒100μg滤过道组织病理学变化和控制眼压的作用,评估其可能的应用价值。方法:家兔分两组,双眼实行小梁切除术,术中一组右眼应用0.01mol/LPBS一次性给药作为模型对照眼,左眼同法0.2g/L丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)处理,另一组右眼术区结膜下自术后起每周注射c-ski质粒100μg至第3wk停止,左眼同法注射等剂量空质粒,术后第7,14,21,30,60d时测量眼压并分批处死家兔,取术区组织,采用组织病理学和免疫组化技术,观察成纤维细胞,新生胶原纤维,炎症细胞的改变。结果:应用空质粒组与模型对照组各时相点的各指标均无差异,相对于模型对照组,MMC在60d内降低眼压作用明显,能长时间抑制成纤维细胞和胶原分泌,c-ski组术后14d才体现出降低眼压的作用,持续至30d,降幅缓和,并能延长滤过泡寿命,c-ski质粒100μg没有抑制成纤维细胞的作用,但可减低术区胶原纤维增殖。结论:c-ski质粒100μg能抑制滤过术后新生胶原的合成,减轻术后滤过道的瘢痕化,可以降低眼压和延长滤过泡寿命,虽然作用不及0.2g/L丝裂霉素,但应用安全性较高。     

c-ski在胃癌组织中的表达与临床因素相关性分析

目的探讨c-ski在胃癌组织中的表达与临床因素相关性分析。方法采用RT-PCR法和免疫组化法检测癌旁组织和胃癌组织中c-ski蛋白及mRNA表达情况。结果胃癌组织c-ski蛋白阳性率和c-skimRNA水平明显高于癌旁组织(P0.01);c-ski蛋白阳性率肠型胃癌明显高于弥漫型胃癌,差异具有统计学意义(P0.05)。c-ski蛋白阳性率与患者的性别、肿瘤的大小、浸润深度、是否有淋巴结及远处转移、1年的生存时间无关。结论 c-ski在胃癌组织中表达明显升高,且在弥漫型胃癌和肠型胃癌表达中存在差异。     

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响

目的 研究原癌基因c—ski对大鼠皮肤成纤维细胞抗辐射作用的影响，并探讨其可能的机理。方法 采用Annexin—V—FITC—PI标记的方法。通过流式细胞仪检测2—8Gy的软X线照射对培养的大鼠皮肤成纤维细胞凋亡的影响；观察转染c—ski基因后细胞凋亡的变化；并采用Western blot检测c—ski对凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。结果 软X线照射以剂量依赖的方式增加细胞凋亡，并且随着时间的延长进一步增加，大约在36h时达到峰值。转染c—ski基因使4Gy照射24h后的成纤维细胞凋亡率显著下降。转染c—ski基因48h后，Bax的表达和对照组差异无统计学意义，而Bcl-2的表达显著增加。结论 c—ski可降低成纤维细胞的辐射敏感性，促进Bcl-2的表达可能是其机理之一。     

大鼠c-ski基因siRNA真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的干扰效果观察

目的构建大鼠c-ski基因的特异性siRNA沉默质粒,并评价其在大鼠皮肤原代成纤维中的干扰效果。方法采用pSUPER质粒构建大鼠c-ski基因siRNA的重组真核表达质粒,转染大鼠皮肤成纤维细胞,采用荧光纤维镜观察转染效率,BrdUELISA法检测转染后细胞增殖情况并作为其干扰效果的初步筛选,定量PCR、免疫组化法检测c-ski基因和蛋白的表达变化。结果构建3个c-SkisiRNA沉默质粒,按照质粒(μg)/脂质体(μl)1∶2.5的比例转染时效率最高,约为53.5%。转染c-SkisiRNA沉默质粒后,细胞增殖降低,且抑制效果与转染剂量成正比。定量PCR、免疫组化法结果显示转染后c-ski基因表达下调51%(P<0.01),蛋白表达明显降低。结论c-Ski沉默质粒构建成功,瞬时转染大鼠皮肤原代成纤维细胞后可以显著抑制c-ski基因和蛋白的表达。