不对称PCR制备单链探针检测登革Ⅱ型病毒复制型RNA和复制中间体RNA

登革病毒是具包膜的单股正链RNA虫媒病毒 ,病毒的复制过程发生在感染细胞胞浆 ,复制型 (RF)RNA是病毒半保留复制的循环模板 ,复制中间体 (RI)RNA的合成则是病毒复制所必需的。经RT PCR获得的DNA模板进行不对称PCR扩增 ,当限制性引物终浓度为 2 5 0nmol L ,两引物比例为 1 0 0∶1时 ,即得到不对称PCR的预计单链和双链DNA产物。此单链产物用于标记探针进行核酸杂交。结果表明不对称PCR制备单链探针进行核酸杂交可用于检测病毒复制型RNA和复制中间体RNA的合成     

Role of oxidative stress,angiogenesis and chemo-attractant cytokines in the pathogenesis of ischaemic protection induced by remote ischaemic conditioning: Study of a human model of ischaemia-reperfusion induced vascular injury

Aims

We explored the effect of remote ischaemic conditioning (RIC) on endothelial function and on circulating mediators.

冠心病患者不对称二甲基精氨酸和同型半胱氨酸对一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

目的探讨冠心病患者不对称二甲基精氨酸(ADMA)和同型半胱氨酸(Hcy)对一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)的影响。方法冠心病患者60例和健康体检者30例,测定其ADMA、Hcy、NOS和NO以及血糖、血脂等。结果冠心病组和对照组的ADMA分别为(1.30±0.58)μmol/L和(0.57±0.18)μmol/L、Hcy分别为(31.53±13.26)μmol/L和(20.98±6.39)μmol/L、NOS分别为(5.06±1.82)μ/mg蛋白和(7.03±1.37)μ/mg蛋白、NO分别为(2.56±0.95)nmol/L和(4.21±1.12)nmol/L,两组之间的差异显著(P<0.01)。经相关分析,NOS和NO分别与ADMA和Hcy呈负相关(P<0.05)。结论冠心病患者ADMA和Hcy显著增高,NOS活性降低和NO水平下降与ADMA和Hcy增高有关。     

不对称二甲基精氨酸与动脉粥样硬化

不对称二甲基精氨酸与动脉粥样硬化@李建芝$暨南大学医学院组胚教研室!广东广州510632 @常青$暨南大学医学院组胚教研室!广东广州510632不对称二甲基精氨酸;;一氧化氮合酶;;一氧化氮;;动脉硬化~~~~     

尼莫地平对氧化型低密度脂蛋白培养的内皮细胞不对称二甲精氨酸的影响

目的：探讨氧化型—低密度脂蛋白(ox—LDL)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养液中内源性一氧化氮合酶抑制剂一不对称二甲精氨酸(ADMA)的影响及尼莫地平的干预作用。方法：采用改良的Jaffe法原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，取3-6代HUVECs用于实验。用Cu^ 引发脂质过氧化过程，制备氧化型低密度脂蛋白。按实验要求加入不同浓度的ox—LDL和尼莫地平，与内皮细胞共同孵育(37℃，5％CO^2)24h后，收集细胞及培养液。高效液相色谱法(HPLC)测定ADMA、L—arg的浓度。流式细胞仪测定细胞内Ca^ 含量，同时测定培养液NO、ET含量。结果：与空白对照组比较，ox—LDL使HUVECs产生ADMA的量呈浓度依赖性增加，ET及细胞内Ca^ 量显著升高；而合成NO的量减少。尼莫地乎能显著减少ox—LDL诱导的ADMA增加，增加N0的合成，同时细胞内Ca^ 含量及CT降低，而合成N0的底物L-arg无明显变化。结论：ox—LDL增加内源性NOS抑制剂—ADMA的产生，导致内皮细胞的功能障碍。尼莫地平能减少ox—LDL诱导的ADMA增加，从而减轻ox—LDL诱导的内皮细胞代谢功能障碍。     

A型肉毒毒素用于口角歪斜和鼻唇沟不对称的研究

目的在面瘫患者健侧部分面肌中注射A型肉毒毒素用以矫正口角歪斜和不对称的鼻唇沟,以满足美容的需要。方法将2001年1月￣2005年12月来在门诊和住院的部分面瘫患者作为观察对象,除对照组外治疗组分别在健侧面肌中注射A型肉毒毒素,依据注射剂量随机分为5个治疗组:A组(各肌注射1.25U)、B组(各肌注射2.50U)、C组(各肌注射5.00U)、D组(降、提口角肌和颧大、小肌各注射2.50U,笑肌注射5.00U)和E组(降、提口角肌和颧大、小肌各注射5.00U,笑肌注射2.50U),3d后定期观测每例患者双侧口角到门齿中缝的距离差。结果除A组外,各治疗组的口角歪斜和鼻唇沟不对称均得到不同程度的纠正,注射剂量越大起效越快,持续时间越长,但表情动作受到的影响也略大。结论根据口角歪斜和鼻唇沟不对称的程度,在健侧面肌注射相应剂量的A型肉毒毒素,既可以较好地纠正面瘫患者的口角歪斜和鼻唇沟的不对称,又可以避免并发症的发生。     

非对称性二甲基精氨酸促进大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶表达

目的观察非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)对培养的大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨其在脂质沉积中的作用及机制。方法分组①正常对照组以PBS缓冲液与巨噬细胞共孵育,②氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)组在巨噬细胞培养液中加oxLDL(50mg/L),③O A组在巨噬细胞培养液中加oxLDL(50mg/L)和ADMA(20μmol/L),④O A L组在培养液中加ox-LDL(50mg/L)、ADMA(20μmol/L)、L-Arg(1.2mmol/L)。以硝酸还原酶法和化学比色法分别测定培养液中一氧化氮(NO)含量与iNOS活力,以RT-PCR和Western Blotting分别检测iNOSmRNA和蛋白表达。结果①OxLDL组与O A组NO含量降低,iNOS活力升高,且以O A组明显,与正常对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);NO与iNOS呈负相关(r=-0.697,P<0.05)。②O A组iNOS mRNA和蛋白表达增强,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论ADMA抑制大鼠腹腔巨噬细胞合成NO,增强iNOS基因与蛋白表达,可能是ADMA促使巨噬细胞转变为泡沫细胞、促进动脉粥样硬化发生发展的机制之一。     

血浆非对称二甲基精氨酸浓度与冠状动脉粥样硬化程度有关

目的探讨血浆非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethyl arginine,ADMA)浓度与冠状动脉粥样硬化程度的相关性。方法冠心病病人97例,经Judkins法行冠状动脉造影观察冠状动脉粥样硬化的程度,并参照Gensini积分系统分析冠状动脉造影结果,对照组为24例无动脉粥样硬化者;实验组为73例动脉粥样硬化者,根据Gensini积分的高低分为3个亚组。通过高效液相色谱联合质谱法方法测定血浆ADMA和L-精氨酸含量,比色法测定高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯和尿酸。结果实验组ADMA浓度显著高于对照组[(5.5±1.3)μg/L与(4.4±0.9)μg/L(P<0.01)],ADMA/L-精氨酸低于对照组[(1.6±0.6)与(1.8±0.4)(P<0.05)],而两组间L-精氨酸差异无统计学意义。实验组亚组间分析显示随着Gensini积分的升高,血浆ADMA浓度上升。结论冠心病病人血浆ADMA浓度显著升高,与冠状动脉粥样硬化严重程度相关。     

葛根素对氧自由基培养的人脐静脉内皮细胞非对称型二甲精氨酸代谢的影响

目的:观察氧自由基(OFR)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)产生内源性一氧化氮合酶抑制剂——非对称型二甲基精氨酸(ADMA)的影响及葛根素的干预作用。方法:以黄嘌呤氧化酶作用于次黄嘌呤产生的 OFR 作用于培养的 HUVECs;并加用葛根素进行干预,以高效液相色谱法(HPLC)和经流式细胞仪检测细胞培养液中 ADMA、L-arg 和细胞内游离钙水平,并测定一氧化氮(NO)及内皮素(ET)的含量。结果:OFR 使培养液中 ADMA、ET 含量显著增加,而 NO 水平则降低,并使胞质内[Ca~(2+)]i 浓度升高;加用葛根素后,ADMA 明显减少,NO 合成增加,细胞内[Ca~(2+)]i 显著降低。结论:OFR 能通过增加 ADMA 使NO 合成减少,葛根素能通过减少 ADMA 而抑制 OFR 导致的内皮细胞功能障碍。     

吸烟对冠心病患者血清不对称二甲基精氨酸的影响

目的 探讨冠心病患者吸烟与血清不对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的关系,为冠心病患者早期治疗提供依据.方法 冠心病患者65例和健康体检者58例.测定其血压、血糖、血脂、肾功能和ADMA等.结果 冠心病吸烟者和非吸烟者的ADMA分别为(1.57±0.54)μmol/L和(1.08±0.55)μmol/L;非冠心病吸烟者和非吸烟者的ADMA分别为(0.72±0.19)μmol/L和(0.53±0.13)μmol/L,各组之间的差异均有统计学意义(P＜0.01).经偏相关分析,不论冠心病还是非冠心病者,ADMA与吸烟年支均呈显著相关(P＜0.05).结论 冠心病患者ADMA显著增高,ADMA增高与吸烟有关.