mGM-CSF-GnRH3 与mGM-CSF-GRP6 融合蛋白体外抗肿瘤作用及生物信息学预测

[摘要] 目的：制备鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor,mGM-CSF)与促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)的融合蛋白mGM-CSF-GnRH3（mGGn）和mGM-CSF与胃泌素释放肽（gastrin-releasing peptide,GRP）的融合蛋白mGM-CSF-GRP6（mG6）,探讨这两种融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10 细胞的抑制效果,并对其等电点、相对分子质量、疏水性、稳定性、亚细胞定位、信号肽、空间结构、潜在抗原表位等进行初步预测。方法：mGGn与mG6 融合蛋白制备成功后,通过显微观察、划痕实验、CCK-8 法、流式细胞术分别检测不同浓度蛋白对B16F10 细胞形态、细胞迁移、细胞增殖、细胞周期的影响,利用蛋白质在线分析系统EXPASY、GOR4、SWISS MODEL对重组融合蛋白进行基本属性、二三级结构分析预测,运用IEDB和ABCpred软件综合预测其Ｂ细胞抗原表位,采用SYFPEITHI、BlMAS和NetCTL软件综合预测其CTL表位,利用NetMHCIIpan 3.1 Server 和IEDB软件综合预测其Th 表位。结果：mGGn和mG6 融合蛋白均抑制肿瘤细胞的增殖和迁移;mGGn能使B16F10 细胞周期阻滞于G1 期,mG6 能使B16F10 细胞周期阻滞于S期,不能进入G2 期,从而抑制瘤细胞的增殖。mGGn和mG6 结构丰富,含有较多潜在的B细胞、CTL和Th表位。结论：mGGn与mG6 融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞具有抑制作用,其生物信息学预测为进一步研究两种融合蛋白的生物学功能和免疫活性奠定了基础。