提供抗类风湿关节炎实验工具：人Janus激酶1单克隆抗体的免疫学特性

目的：制备人Janus激酶1单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性.方法：实验于2003-03/2005-04在湖南远泰生物技术有限公司免疫学实验室完成.用化学合成的部分人Janus激酶1多肽链与锁眼蓝蛋白偶联后的全抗原对BALB/c小鼠进行免疫,采用杂交瘤技术制备抗人Janus激酶1的单克隆抗体;同时采用酶联免疫吸附法和免疫印迹法进行筛选;免疫印迹法和免疫细胞化学分析鉴定单克隆抗体的特异性.结果：获得了一株可稳定分泌人Janus激酶1单克隆抗体的细胞株4E5D4,单抗的Ig亚类为IgG.通过免疫印迹法检测,发现其能够特异性识别人Janus激酶1蛋白.结论：成功制备了抗人Janus激酶1的单克隆抗体,为进一步研究其对类风湿关节炎的临床疗效提供了实验工具.     

靶向CD19的CAR修饰的NK细胞对B细胞淋巴瘤的杀伤

目的:利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,探讨以CD19 scFv序列构建CD19-CAR(pCD19-CAR)修饰的NK细胞对CD19+B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用.方法:用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序法获得抗体的序列.分析抗体序列,并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19-CAR片段,然后将其克隆到慢病毒载体上,病毒包装制备后,转染NK-92MI细胞.最后,用流式细胞术检测不同的pCD9-CAR-NK-92MI细胞对CD19+细胞的杀伤率.结果:(1)成功筛出特异性强的CD19单克隆抗体-pCD19;(2)抗体检测结果显示CD19+的Ramos细胞的阳性率为84.3％,Raji为85.6％,与商业化抗体结果相似;(3)被pCD19-CAR修饰的CD19-CAR阳性率为28.72％的NK-92MI细胞对CD19+的Ramos和Raji细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的NK-92MI细胞株对Ramos和Raji细胞的杀伤率[(47.1±1.7)％vs(24.7±6.2)％和(51.8±7.9)％vs(27.6±9.6)％,均P＜0.05];对CD19-细胞Jurkat,不论是未被pCD19-CAR修饰的NK-92MI或是被修饰的NK-92MI细胞,几乎都不存在特异性杀伤作用[(16.1±0.7)％vs(17.7±2.9)％,P＞0.05].结论:成功构建pCD19-CAR,被pCD19-CAR修饰的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19+B细胞淋巴瘤细胞.     

提供抗类风湿关节炎实验工具:人Janus激酶1单克隆抗体的免疫学特性

目的:制备人Janus激酶1单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法:实验于2003-03/2005-04在湖南远泰生物技术有限公司免疫学实验室完成。用化学合成的部分人Janus激酶1多肽链与锁眼蓝蛋白偶联后的全抗原对BALB/c小鼠进行免疫,采用杂交瘤技术制备抗人Janus激酶1的单克隆抗体;同时采用酶联免疫吸附法和免疫印迹法进行筛选;免疫印迹法和免疫细胞化学分析鉴定单克隆抗体的特异性。结果:获得了一株可稳定分泌人Janus激酶1单克隆抗体的细胞株4E5D4,单抗的Ig亚类为IgG。通过免疫印迹法检测,发现其能够特异性识别人Janus激酶1蛋白。结论:成功制备了抗人Janus激酶1的单克隆抗体,为进一步研究其对类风湿关节炎的临床疗效提供了实验工具。     

抗人CD138单克隆抗体以及重组双特异性抗体的开发及应用

目的制备鼠源抗人CD138单克隆抗体,经Western blot验证后,利用其基因序列构建重组抗人CD138抗体以及一种能够同时靶向CD138分子和CD3分子的双特异性抗体并对其功能进行验证。方法通过杂交瘤技术获得鼠源抗人CD138抗体,分子克隆构建重组抗体,Protein A纯化,综合运用Western blot(WB)、Flow cytometry(FC)、ELISA等实验方法进行相关的功能验证。结果鼠源的CD138单克隆抗体特异性强,可用于后续重组抗体的制备,而且重组的抗人CD138单克隆抗体经流式验证,同样可以与表达CD138的肿瘤细胞系(RPMI-8226,U266)进行结合,且不与CD138-的肿瘤细胞系(Jurkat)结合,在此基础上构建的双特异性抗体经功能验证,可以激活T细胞,从而对CD138+的细胞系进行特异杀伤。结论基于鼠源单克隆抗体重组构建表达的双特异性抗体anti-CD138×CD3具有靶向杀伤骨髓瘤细胞的生物活性,为细胞免疫治疗骨髓瘤疾病提供了临床研究基础。